葉明陽，溫曉敏，王鋒

論著·臨床

急性病毒性心肌炎患兒血清心肌酶與外周血淋巴細(xì)胞凋亡的關(guān)系

葉明陽，溫曉敏，王鋒

目的探討急性病毒性心肌炎(VM)患兒血清心肌酶與外周血淋巴細(xì)胞凋亡的關(guān)系。方法采用TUNEL法和全自動生化分析儀對43例VM患兒(觀察組)、37例健康兒童(健康對照組)外周血淋巴細(xì)胞凋亡率和心肌酶譜進(jìn)行測定，分析外周血淋巴細(xì)胞凋亡率和心肌酶譜的相關(guān)性。結(jié)果觀察組外周血淋巴細(xì)胞凋亡率和壞死率均顯著高于健康對照組(P<0.05)；心肌酶譜CK-MB、LDH、CK、HBDH均高于健康對照組(P<0.05)，且與外周血淋巴細(xì)胞凋亡率呈正相關(guān)(r=0.831、0.793、0.783、0.717,P均<0.05)。結(jié)論VM患兒外周血淋巴細(xì)胞凋亡率的增加可能是導(dǎo)致患兒免疫功能低下的原因，心肌酶譜與外周血淋巴細(xì)胞凋亡率呈正相關(guān)。

心肌炎,病毒性,急性；心肌酶；淋巴細(xì)胞；相關(guān)性

病毒性心肌炎(viral myocarditis,VM)是指由柯薩奇病毒、?？?ECHO)病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、流感病毒等感染引起的心肌局限性或彌漫性急性或慢性炎性反應(yīng)病變[1]。該病是小兒常見的心臟疾病，嚴(yán)重時可導(dǎo)致患兒發(fā)生心源性休克甚至死亡。調(diào)查顯示有5%～43%的小兒患者會進(jìn)一步發(fā)展成擴(kuò)張型心肌病[2]，給患兒的生命健康帶來極大威脅。關(guān)于急性病毒性心肌炎的發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚，因此目前尚無針對性的治療方法。有研究顯示VM患兒免疫功能受到損傷[3]，因此有學(xué)者提出T淋巴細(xì)胞引起的細(xì)胞毒性作用可能是導(dǎo)致VM心肌細(xì)胞損傷的原因。為了進(jìn)一步探討VM的發(fā)病機(jī)制，現(xiàn)對我院收治的43例VM患兒外周淋巴細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行檢測，并分析其與心肌酶譜變化的相關(guān)性，以期為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年4月—2013年4月我院收治的VM患兒43例(觀察組)，納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合小兒病毒性心肌炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；(2)所有患兒均為急性期；(3)年齡≥3歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)患兒存在先天性免疫功能低下；(2)近期(1個月內(nèi))使用激素類藥物；(3)近期感染患兒。43例中男27例，女16例，年齡3～11(6.3±3.4)歲。臨床表現(xiàn)：胸悶17例，反復(fù)呼吸道感染11例，陣發(fā)性腹痛10例，氣短5例。另選擇來我院體檢的健康兒童37例作為健康對照組，男18例，女19例，年齡3～13(6.7±4.1)歲；2組兒童的性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。全部入選者簽署知情同意書。

1.2 檢測方法[5]2組兒童均于清晨空腹肘靜脈取血2ml，置于抗凝管中。(1)采用TUNEL法對外周血淋巴細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行檢測，試劑盒由羅氏公司提供；試劑選擇末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)，方法為TdT介導(dǎo)的duTP末端標(biāo)記法；由于在斷裂處DNA會發(fā)生顏色反應(yīng)(出現(xiàn)黑色)，因此可以在光學(xué)顯微鏡下觀測及計算細(xì)胞凋亡數(shù)。判定依據(jù)：隨機(jī)選擇5個視野(×400)的細(xì)胞數(shù)，計算出凋亡細(xì)胞百分率。(2)采用全自動生化分析儀(貝克曼庫爾特公司提供，型號：AU5800)對心肌酶譜(CK-MB、LDH、CK、HBDH)進(jìn)行檢測，檢測數(shù)據(jù)直接讀出，并由分析儀連接的電腦打印。

2 結(jié) 果

2.1 外周血淋巴細(xì)胞凋亡率比較 外周血淋巴細(xì)胞凋亡率和壞死率觀察組均顯著高于健康對照組(P<0.05)。見表1。

表1 2組兒童外周血淋巴細(xì)胞凋亡率比較

注：與健康對照組比較，*P<0.05

2.2 心肌酶譜比較 心肌酶譜CK-MB、LDH、CK、HBDH觀察組均較健康對照組顯著升高(P<0.05)。見表2。

表2 2組兒童心肌酶譜檢測結(jié)果比較

注：與健康對照組比較，*P<0.05

2.3 相關(guān)性分析 VM患兒心肌酶譜CK-MB、LDH、CK、HBDH與外周血淋巴細(xì)胞凋亡率呈正相關(guān)(r=0.831、0.793、0.783、0.717，P均<0.05)。

3 討 論

機(jī)體內(nèi)細(xì)胞凋亡的方式主要有2種：當(dāng)細(xì)胞在缺氧或中毒情況下導(dǎo)致的死亡稱為壞死；而在正常生理?xiàng)l件下機(jī)體細(xì)胞主動、有序地死亡稱為凋亡。正常的凋亡對維持機(jī)體平衡有著積極的作用。正常機(jī)體的動態(tài)平衡源于淋巴細(xì)胞的調(diào)控，當(dāng)?shù)蛲霾蛔銜r會引起機(jī)體發(fā)生自身免疫性疾病，而凋亡過度又會引起免疫缺陷性疾病。大量研究均證實(shí)VM患兒心肌細(xì)胞存在凋亡的情況[6，7]，因此有研究者推測其發(fā)病機(jī)制可能與細(xì)胞免疫異常有關(guān)[8]。楊云華等[9]對VM患兒免疫細(xì)胞進(jìn)行檢測后發(fā)現(xiàn)，VM患兒普遍存在免疫功能紊亂；但是關(guān)于淋巴細(xì)胞凋亡與VM的關(guān)系目前報道較少。潘璐璐等[10]對VM小鼠心肌細(xì)胞與外周淋巴細(xì)胞凋亡相關(guān)性進(jìn)行深入研究后認(rèn)為，通過淋巴細(xì)胞的凋亡率可以間接反映出心肌細(xì)胞的凋亡。章惠剛等[11]也證實(shí)VM患兒的發(fā)病過程伴隨著T淋巴細(xì)胞免疫功能降低，而這種免疫功能降低與細(xì)胞凋亡過度有著密切關(guān)系。本組研究中，VM患兒淋巴細(xì)胞凋亡率顯著高于正常兒童，進(jìn)一步證實(shí)了上述觀點(diǎn)。

病毒感染是導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的主要原因，大多急性病毒感染可以降低宿主的免疫功能[12～15]。臨床上常用檢測心肌酶譜的活性來判斷心肌細(xì)胞的損傷程度[16]。其中LDH、CK、HBDH廣泛存在于機(jī)體內(nèi)，但是心肌細(xì)胞含量最高，而CK-MB是心肌細(xì)胞的特異性酶。本結(jié)果中，觀察組心肌酶譜均顯著升高，與健康對照組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明急性病毒性心肌炎患兒心肌細(xì)胞受到明顯損傷。進(jìn)一步分析顯示急性病毒性心肌炎患兒心肌酶譜與外周血淋巴細(xì)胞凋亡率呈正相關(guān)，這與彭宗生等[17]報道一致，說明可以通過檢測外周血淋巴細(xì)胞的凋亡率來初步判斷心肌細(xì)胞損傷程度。

綜上，VM患兒外周血淋巴細(xì)胞凋亡率的增加可能是導(dǎo)致患兒免疫功能低下的原因；VM患兒心肌酶譜與外周血淋巴細(xì)胞凋亡率呈正相關(guān)，因此通過檢測外周血淋巴細(xì)胞的凋亡率可初步判斷心肌細(xì)胞損傷程度，從而為療效評價和預(yù)后判斷提供依據(jù)。

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Therelationshipbetweenmyocardialenzymeandapoptosisofperipheralbloodlymphocytesofacuteviralmyocarditischildren

YEMingyang,WENXiaomin,WANGFeng.

DepartmentofPediatrics,AffiliatedHospitalofHubeiUniversityofMedicine/XiangyangFirstPeople'Hospital,Xiangyang430060,China

ObjectiveTo investigate the acute viral myocarditis (VM) serum cardiac enzymes and apoptosis in peripheral blood lymphocytes.MethodsUsing TUNEL method and automatic biochemical analyzer VM measured 43cases of children (study group) and 37 healthy children (healthy control group) in peripheral blood lymphocyte apoptosis and myocardial enzymes. Analysis peripheral blood lymphocyte apoptosis and myocardial enzymes correlation.ResultsIt was observed that apoptosis and necrosis were significantly higher in peripheral blood lymphocyte in study group than that in the healthy control group (P<0.05).myocardial enzymes CK-MB, LDH, CK, HBDH in study group were higher than in the control group (P<0.05), and peripheral blood lymphocyte apoptosis was positively correlated (r=0.831, 0.793, 0.783, 0.717,P<0.05).ConclusionIncrease of VM peripheral blood lymphocyte apoptosis may be the cause of children with immune dysfunction, and myocardial enzymes and peripheral blood lymphocyte apoptosis rate were positively correlated.

Myocarditis,viral,acute; Cardiac enzymes; Lymphocytes; Relevance

430060 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬襄陽醫(yī)院/湖北省襄陽市第一人民醫(yī)院兒科

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.03.006

2013-11-20)