符路娣 潘衛(wèi)松，2 譚滴清，3 王蕭 肖瑛陳土地

（1.廣州中醫(yī)藥大學,廣州510405；2.廣州市藥品檢驗所,廣州510160；3.華南農(nóng)業(yè)大學，廣州,510642；4.暨南大學,廣州510632；5.廣東藥學院,廣州510006)

支氣管過敏性哮喘（哮喘）是免疫刺激引起嗜酸性粒細胞、T淋巴細胞和組織胺等多種炎性細胞或炎性介質(zhì)的釋放，導致氣道產(chǎn)生炎癥反應，這種慢性炎癥導致氣道高反應性和廣泛多變的可逆性氣流受限，引起反復發(fā)作性的哮喘、氣急、胸悶或咳嗽等癥狀，氣道高反應性又可加重哮喘。OVA誘導豚鼠哮喘建立豚鼠哮喘模型是研究急性炎癥治療的常用模型，其主要特點是只有糖皮質(zhì)激素對其有效，而肥大細胞膜穩(wěn)定劑對該模型沒有治療作用。猴耳環(huán)水提物抗炎作用在臨床用藥治療實踐中已得到證實，但目前研究對其藥理作用的研究及開發(fā)尚不全面。據(jù)于猴耳環(huán)的眾多功效，本研究采用OVA誘導豚鼠哮喘建立豚鼠哮喘模型，觀察猴耳環(huán)浸膏對哮喘豚鼠相關(guān)指標的干預調(diào)節(jié)機制，探討猴耳環(huán)的抗炎作用可能的機制。

1 材料和方法

1.1 實驗材料 普通級雄性的Hartley豚鼠50只，體重250～350g，由廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供；生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2008-0020；使用許可證：SYXK（粵）2008-0001。

1.2 藥物與試劑 中藥猴耳環(huán)浸膏，密度為

1.1641g?mL-1（批號：130903，含沒食子酸5.1%），由廣州萊泰制藥有限公司提供。地塞米松（批號：41211251）（規(guī)格：1ml:5mg:10支），天津金耀集團湖北天藥藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；卵清蛋白（OVA），由美國Sigma公司生產(chǎn)、廣州威佳生物科技有限公司提供。IL-4、IgE和NO試劑盒、均由廣州有田生物科技有限公司提供。

1.3 動物分組、造模及治療給藥

1.3.1 動物分組：將50只雄性豚鼠依體重按隨機表分成5組：陰性對照組（生理鹽水，n=10），陽性對照組（地塞米松，n=10）、猴耳環(huán)浸膏高劑量組(n=10)、猴耳環(huán)浸膏中劑量組（n=10）、猴耳環(huán)浸膏低劑量組（n=10），每組10只。

1.3.2 動物模型的制備及給藥 購回豚鼠適應性喂養(yǎng)一星期后，各組均參照卵清蛋白致豚鼠哮喘的方法[1]，實驗第8天用10%卵清蛋白生理鹽水溶液腹腔注射豚鼠，每只1ml。各組分別于致敏后第7天起，每天下午灌胃給藥。陰性對照喂生理鹽水；陽性對照喂地塞米松，劑量為0.1mg/100g；猴耳環(huán)浸膏高劑量組采用原液的1/2濃度給藥，劑量為1ml/kg；猴耳環(huán)浸膏中劑量組采用原液的1/4濃度給藥，劑量為1ml/kg；猴耳環(huán)浸膏低劑量組采用原液的1/8濃度給藥，劑量為1m l/kg；第14天將致敏豚鼠放在半密閉塑料箱內(nèi)，用霧化器噴入0.05%OVA，40s/次/只，連續(xù)4次；第15天，噴入1%OVA溶液超聲霧化激發(fā)2次，第一次2min/次/只，過4h后5min/次/只。

1.4 采集標本及指標檢測 第16天（動物末次激發(fā)24h后）心臟采血。麻醉處死豚鼠，對肺部進行肺泡灌洗，肺泡灌洗方法：分離氣管使氣管暴露，在環(huán)狀軟骨下端1cm處剪一個V型切口，做氣管插管，插入2mm長1.5cm的無菌塑料管，每次用2ml生理鹽水進行氣管肺泡灌洗，灌洗兩次，將灌洗的回收液置于潔凈塑料瓶內(nèi)以待下一步的白細胞計數(shù)和嗜酸性粒細胞計數(shù)。打開胸腔取出小片肺組織用10%的福爾馬林溶液固定以做病理切片。

表1猴耳環(huán)浸膏不同劑量對血液中IL-4、IgE和NO含量的比較（X±s，n=10）

1.5 血液細胞因子IL－4、IgE和NO水平的檢測采用酶聯(lián)免疫法檢測。

1.6 統(tǒng)計方法SPSS15.0軟件進行統(tǒng)計并用t檢驗進行組間比較分析，結(jié)果以（）表示。

2 結(jié)果

猴耳環(huán)浸膏不同劑量對血液中IL-4、IgE和NO含量的影響。

由表1可見，陽性組與空白組的IL-4水平相比，無差異無統(tǒng)計學意義；中劑量組IL-4水平顯著低于于空白組IL-4水平（P<0.01），其結(jié)果有顯著性差異。

陽性組、高劑量組、中劑量組和低劑量組的IgE水平與空白組的IgE水平相比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。低、中、高劑量組NO水平顯著低于空白組NO水平(P<0.01)，結(jié)果存在極顯著差異統(tǒng)計學意義。

3 討論

支氣管哮喘是一種氣道慢性炎癥性疾病，伴有嗜酸性粒細胞增多、杯狀細胞肥大、粘液分泌增多及對吸入變應原和非特異性刺激的高反應等特點[2]。在過敏原等的刺激下由于炎性因子的激活引起呼吸道平滑肌的收縮，促進粘液分泌，改變血管通透性導致氣道變應性和氣道炎癥的形成[3]。IL-4是Th2細胞分泌的促進IgE合成的最主要細胞因子，而IgE的合成分泌受到Th細胞分泌的細胞因子嚴格控制。IgE引起肥大細胞脫顆粒引起即刻型氣道反應的重要原因，因此IL-4在哮喘炎性過程起著十分重要的作用。此外IL-4還能促進T、B細胞增殖和誘導粘附分子表達。IL-4不僅可以促進T細胞與B細胞的相互作用，還可以使B淋巴細胞的抗體應答向IgE類型轉(zhuǎn)化，但IL-4不能單獨誘導B淋巴細胞產(chǎn)生IgE[4]。

當結(jié)合在肥大細胞或噬堿性粒細胞上的IgE與相應的抗原結(jié)合時，這些細胞就釋放化學活性物質(zhì)而引起一系列速發(fā)型變態(tài)反應。Melhop認為雖然血清IgE水平增高與哮喘有關(guān)，但對哮喘的發(fā)生、發(fā)展并非絕對必需，哮喘的發(fā)病機制還包含其他免疫學機制。

哮喘屬于中醫(yī)學哮證范疇，其病機為宿痰內(nèi)伏于肺，復加外感、飲食、體虛病后等因素，以致痰阻氣道、肺氣上逆所致。久病遷延，正氣漸虛，正虛邪實，肺脾腎三臟受損，臟器功能失調(diào)，瘀血阻絡(luò)而致病情反復難愈

本研究中，猴耳環(huán)浸膏對哮喘豚鼠沒有體現(xiàn)出治療作用，但對IL-4和NO的變化產(chǎn)生了積極的影響。以上結(jié)果提示，猴耳環(huán)浸膏的抗炎作用可能不是通過糖皮質(zhì)激素作用通路而起作用，極有可能是通過對于炎癥細胞因子的調(diào)節(jié)作用而發(fā)揮積極的抗炎作用的。

[1]張徐.固本平喘湯治療支氣管哮喘44例[J].河南中醫(yī)，2004，24(11)：51.

[2]蘭小玲，黃躍，楊廣林.《猴耳環(huán)消炎片治療咽喉炎、扁桃腺炎200例療效觀察》[J]實用臨床醫(yī)學2007，8(2):89-92.

[3]Xia-Yu Guo;Nai-LiWang;LiBo.Chemicalconstituents from Pithecellobium clyPearia and theireffectson T lymPhoeytesproliferation，[J].JournalofChinece PharmaceuticalSciences，2007(03)；208-213.

[4]林耀廣,主編.《現(xiàn)代哮喘病學》，中國協(xié)和醫(yī)科大學出版社，197-