張婧卓,林 ,律廣富,李 娜,常志達(dá),王建瑋,楊 擎,林 賀

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué),長(zhǎng)春 130117)

鹿角膠是鹿科動(dòng)物梅花鹿或馬鹿的角煎熬而成的膠塊，又稱“鹿角仙膠”，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，主產(chǎn)于東三省及北京、上海等地。本品味甘、咸，性溫，具有溫補(bǔ)肝腎，益精血，止血的功效[1]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)鹿角膠有增加白細(xì)胞，治療大腦水腫等作用，用于治療癌癥化療后的后遺癥。臨床還應(yīng)用于治療血小板減少癥、白細(xì)胞減少癥、再生障礙性貧血等，能使血象及臨床癥狀均獲得不同程度的好轉(zhuǎn)[2]，本研究旨在通過(guò)建立炎癥和疼痛模型以探討其抗炎、鎮(zhèn)痛作用，為開辟新的用藥途徑、擴(kuò)大其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及飼養(yǎng)條件 健康昆明種小鼠，清潔級(jí)，體質(zhì)量18～22 g，雌雄皆用；健康SD大鼠，雄性，清潔級(jí)，體質(zhì)量180～220 g，以上動(dòng)物均由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證：SCXK(吉)-2013-0005。室內(nèi)光照為自然晝夜交替，溫度為15～25 ℃，相對(duì)濕度為45%～65%，通風(fēng)良好，環(huán)境相對(duì)安靜。自由攝食及飲水。

1.2 藥品、試劑及儀器 鹿角膠(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心提供)；阿司匹林泡騰片(規(guī)格:0.5 g/片，阿斯利康制藥有限公司);JA2003B電子天平(上海越平科技儀器有限公司)；RB-200智能熱板儀(四川成都泰盟科技有限公司)；SH-耳腫打孔器(上海嘉適科學(xué)儀器有限公司)；PV200-足跖容積測(cè)量?jī)x(山東泰盟科學(xué)儀器有限公司)。

1.3 分組及給藥劑量 耳廓腫脹分組:取60只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為5組，每組12只；足跖腫脹組：取30只雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組，每組6只；熱板法分組：取熱板法篩選合格的60只雌性昆明小鼠隨機(jī)分為5組，每組12只；醋酸扭體分組：50只雄性昆明小鼠隨機(jī)均分為5組，4個(gè)實(shí)驗(yàn)均設(shè)正常對(duì)照組(生理鹽水組)，陽(yáng)性藥對(duì)照組(阿斯匹林0.2 g/kg)，鹿角膠高、中、低劑量組,其高、中、低劑量組濃度分別為0.6、0.3、0.1 g/kg。

1.4 對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響[3-4]各組小鼠灌胃給予相應(yīng)受試物，連續(xù)7 d，末次給藥1 h后，于小鼠右耳正反兩面均勻涂抹二甲苯0.02 mL/只致炎,左耳不涂二甲苯為對(duì)照。致炎1h后將小鼠頸椎脫臼處死，用直徑6 mm的打孔器分別在小鼠左右耳同一部位打下圓耳片，精密稱量，右耳與左耳質(zhì)量之差即為腫脹度，計(jì)算小鼠耳廓腫脹抑制率。耳腫脹抑制率(%)=(正常對(duì)照組平均耳腫脹度-給藥組平均耳腫脹度)/正常對(duì)照組平均耳腫脹度×100%。

1.5 對(duì)角叉菜膠致足跖腫脹的影響[5]各組大鼠連續(xù)灌胃給予相應(yīng)受試物7 d，第8天于大鼠右后足掌心向踝關(guān)節(jié)方向皮下注射1%角叉菜膠混懸液0.1 mL/只致炎，在致炎后的2，4，6 h分別測(cè)量足跖容積。

1.6 對(duì)熱板法致痛的影響[6]取篩選過(guò)的合格小鼠(痛閾值在5～30 s內(nèi))，分組及給藥方法同1.3項(xiàng)下，連續(xù)灌胃給予相應(yīng)受試物7 d，于末次給藥后1，2，4 h分別將小鼠逐只放于(55.0±0.5) ℃熱板儀上，記錄小鼠舔后足反應(yīng)所需時(shí)間(疼痛反應(yīng)潛伏期)作為小鼠的痛閾值，如痛閾值超過(guò)60 s，即停止測(cè)試而按60 s計(jì)。

1.7 對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響[7]各組小鼠連續(xù)灌胃給予相應(yīng)受試物7 d，于末次給藥1 h后，小鼠腹腔注射0.8%，冰醋酸0.1 mL/10 g，記錄小鼠扭體潛伏期及10 min內(nèi)各組小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 鹿角膠對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響 與正常對(duì)照組比較，鹿角膠高、中劑量對(duì)二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹有抑制作用(P<0.05)，其中鹿角膠高劑量組活性最強(qiáng)，其腫脹抑制率為45.41%，見表1。

表1 鹿角膠對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01。

2.2 鹿角膠對(duì)角叉菜膠所致足跖腫脹度的影響 與正常對(duì)照組比較，致炎后2h，鹿角膠高、中劑量組均對(duì)角叉菜膠所致足跖腫脹度有極顯著抑制作用(P<0.01)，低劑量組對(duì)其腫脹有明顯抑制作用(P<0.05)；致炎后4 h,鹿角膠高、中劑量均對(duì)角叉菜膠所致足跖腫脹度有明顯抑制作用(P<0.05)。見表2。

表2 鹿角膠對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響

注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01

2.3 鹿角膠對(duì)熱板法所致小鼠疼痛的影響 與正常對(duì)照組比較，鹿角膠高劑量組在藥后1,2 h小鼠舔足時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.05)，鹿角膠中劑量組2 h后小鼠舔足時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.05)，說(shuō)明鹿角膠具有鎮(zhèn)痛作用。見表3。

表3 鹿角膠對(duì)小鼠熱板致痛實(shí)驗(yàn)的影響

注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01

2.4 鹿角膠對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 與正常對(duì)照組相比，無(wú)論是潛伏期還是扭體次數(shù)，鹿角膠高劑量組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 對(duì)小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響

注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01

3 小結(jié)

本研究采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠致大鼠足跖腫脹2種非特異性炎癥模型評(píng)價(jià)鹿角膠對(duì)早期急性炎癥的影響；以醋酸致小鼠扭體和熱板法2種用于鎮(zhèn)痛藥粗篩的經(jīng)典常用方法評(píng)價(jià)鹿角膠的鎮(zhèn)痛作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，除鹿角膠低劑量組的鎮(zhèn)痛作用和對(duì)耳腫脹的抑制作用無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，各劑量的鹿角膠均有顯著的抗炎和鎮(zhèn)痛作用(P<0.05，P<0.01)。鹿角膠高劑量在二甲苯所致小鼠耳廓腫脹及角叉菜膠所致足跖腫脹度抗炎實(shí)驗(yàn)和熱板法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)中均顯示顯著的藥理活性。數(shù)據(jù)分析可見，鹿角膠的抗炎鎮(zhèn)痛作用與濃度不成正比關(guān)系，但很明顯其高劑量的抗炎鎮(zhèn)痛作用要比低劑量和中劑量的抗炎鎮(zhèn)痛作用好很多。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示鹿角膠有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，為擴(kuò)大鹿角膠的臨床應(yīng)用范圍和進(jìn)一步的研究提供了科學(xué)依據(jù)。

[1]任仁安.中藥鑒定學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1986:124.

[2]陳富軍,白克杰,方玉先,等.略述鹿角膠的臨床應(yīng)用及現(xiàn)代研究[J].光明中醫(yī),2002,17(5):50-51.

[3]陳奇.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1994:70.

[4]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:882.

[5]李春子,李雪婷,王沛,等.痛風(fēng)寧抗炎鎮(zhèn)痛抗痛風(fēng)作用研究[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2010,26(5):651-652.

[6]劉齊林,何歡,趙士彥,等.痛風(fēng)靈抗炎、鎮(zhèn)痛、抗痛風(fēng)作用研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2009,15(2):74-75.

[7]張嘯環(huán).桂枝附子湯的抗炎鎮(zhèn)痛作用試驗(yàn)研究[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2007,23(5):17-18.