李 晶，李 娜，律廣富，楊 擎，越 皓，曲曉波*

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué) 吉林省人參科學(xué)研究院，長(zhǎng)春 130117；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心 中藥藥理實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)春 130117)

鹿角膠為鹿科動(dòng)物馬鹿(CervuselaphusLinnaeus)或梅花鹿(CervusnipponTemminck)的已骨化的角或鋸茸后翌年春季脫落的角基，經(jīng)水煎煮、濃縮而成的固體膠[1]，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。溫補(bǔ)肝腎，益精養(yǎng)血。古代主要用于虛勞、陽(yáng)痿遺精、胎動(dòng)不安、五勞七傷、面黃肌瘦等證[2]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，鹿角膠能夠增加白細(xì)胞，促進(jìn)骨髓恢復(fù)，提升化療耐受力作用[3]， 并且具有保護(hù)胃黏膜、抗骨質(zhì)疏松癥、提高免疫力等功能[4-5]，并且對(duì)成骨細(xì)胞具有保護(hù)作用[6]。本研究采用環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)致小鼠血虛模型，從抗炎和活血角度探討鹿角膠的傳統(tǒng)應(yīng)用，賦予其傳統(tǒng)功效的現(xiàn)代科學(xué)理論，為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

雄性balb/c小鼠，體質(zhì)量(20±2) g，清潔級(jí)，購(gòu)自長(zhǎng)春生物制品研究所有限公司，合格證編號(hào)：SCXK-(吉)2011-0003。玉屏風(fēng)膠囊(江蘇吉貝爾藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字z10980026，批號(hào)130809)，鹿角膠(黑龍江神樹(shù)阿膠有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字z23020051)，注射用CTX(山西普德藥業(yè)有限股份公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H14023686，規(guī)格0.2 g/每支)，PT試劑盒(上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司，批號(hào)1001133)，APTT試劑盒(上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司,批號(hào)1011043)。JA2003B電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)，Mindray BC-5300全自動(dòng)細(xì)胞血液分析儀(深圳邁瑞儀器有限公司),Coatron-M4血凝儀(成都貝斯達(dá)儀器有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組及給藥 將48只雄性小鼠隨機(jī)分為6組，即空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(玉屏風(fēng)膠囊，0.39 g/kg)、高劑量組(4.0 g生藥/kg)、中劑量(2.0 g生藥/kg)、低劑量(1.0 g生藥/kg)。于造模前預(yù)防性給藥7 d，空白組和模型組小鼠給予等體積生理鹽水灌胃，1次/d，20 mL/kg。

2.2 模型建立 空白組小鼠腹腔注射等體積生理鹽水，其他各組小鼠腹腔注射CTX注射液60 mg/kg，1次/d，連續(xù)3 d。

2.3 檢測(cè)指標(biāo) 末次給藥后2 h,小鼠眼球取血，部分全血利用全自動(dòng)細(xì)胞血液分析儀進(jìn)行RBC、PLT、WBC、T-LYM的檢測(cè)；部分全血3 500 rpm離心10 min，分離血漿，利用全自動(dòng)血凝儀對(duì)PT和APTT進(jìn)行測(cè)定。

3 結(jié)果

3.1 鹿角膠對(duì)CTX致血虛小鼠模型血細(xì)胞的影響 與空白組比較，模型組小鼠全血中RBC、PLT、WBC、T-LYM的數(shù)量均下降，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說(shuō)明模型制備成功；與模型組比較，除鹿角膠低劑量組RBC外,鹿角膠和玉屏風(fēng)膠囊能顯著升高血虛小鼠全血中RBC、PLT、WBC、T-LYM的數(shù)量，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。提示鹿角膠對(duì)血虛小鼠具有預(yù)防炎癥、活血的功能，見(jiàn)表1。

表1 鹿角膠對(duì)CTX所致血虛模型小鼠全血中WBC、RBC、T-LYM、PLT的影響

注：與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01;與空白組比較，△△P<0.01。

3.2 鹿角膠對(duì)CTX致血虛小鼠模型對(duì)PT和APTT的影響 與空白組比較,模型組小鼠PT和APTT數(shù)值明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明模型制備成功；與模型組比較，鹿角膠和玉屏風(fēng)膠囊能明顯提高小鼠PT和APTT數(shù)值,其中鹿角膠高劑量組APTT值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),其余各組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示鹿角膠能夠通過(guò)抗凝血作用來(lái)保護(hù)免疫損傷模型小鼠。

組 別劑量/(g/kg)PT/(s)APTT/(s)空白組 19.961±1.751 25.690 ±2.572 模型組 18.800±2.011△△19.186 ±1.681△△陽(yáng)性對(duì)照組 0.3916.730±1.290# 21.558 ±1.527# 419.178±2.223# 24.705 ±2.625##鹿角膠組 218.456±1.574# 23.771 ±2.012# 118.506±1.897# 22.810 ±1.634#

注：與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01； 與空白組比較，△△P<0.01

4 討論

鹿角膠是鹿角經(jīng)水煎煮，濃縮制成的固體膠，味甘、咸，性溫。歸肝、腎經(jīng)。傳統(tǒng)功效益氣養(yǎng)血、益精填髓、強(qiáng)筋骨、壯陽(yáng)?，F(xiàn)代研究表明，血虛會(huì)出現(xiàn)RBC 、PLT、WBC、T-LYM的減少，并且凝血功能障礙，采用現(xiàn)代科學(xué)手段模擬中醫(yī)血虛癥，賦予傳統(tǒng)中藥現(xiàn)代科學(xué)理論，對(duì)于機(jī)制的探討和新藥的開(kāi)發(fā)具有一定的意義。

CTX為常用的抗腫瘤化療藥物，同時(shí)影響人體的造血功能和免疫功能，對(duì)外周血細(xì)胞和骨髓細(xì)胞均有殺傷作用，采用CTX損傷小鼠血液系統(tǒng)，造成血虛癥候。PLT在血栓形成、止血、炎癥反應(yīng)等過(guò)程中有著重要的作用,WBC聚集、浸潤(rùn)，單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，都受到PLT的影響，可釋放大量炎性介質(zhì)，直接參與多種疾病的形成和發(fā)展[7]。WBC和RBC能夠促進(jìn)血小板的凝血活性，當(dāng)機(jī)體RBC大量減少時(shí),會(huì)引起貧血。PT和APTT是反應(yīng)機(jī)體凝血功能的重要指標(biāo)。免疫損傷屬于中醫(yī)氣血不足、肝腎兩虛的病癥。WBC和RBC都是具有免疫功能的細(xì)胞，可吞噬異物產(chǎn)生抗體，抵抗病菌入侵，當(dāng)由于各種理化因素導(dǎo)致的中毒，腫瘤放化療，免疫抑制等時(shí)就會(huì)導(dǎo)致WBC和RBC的數(shù)量明顯下降，T-LYM主要參與細(xì)胞免疫，直接殺傷靶細(xì)胞，釋放淋巴因子，使免疫效應(yīng)增強(qiáng)，是炎癥反應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞，抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生。

本實(shí)驗(yàn)采用CTX建立小鼠免疫抑制模型,利用鹿角膠對(duì)模型小鼠進(jìn)行干預(yù)，通過(guò)檢測(cè)全血中RBC、PLT、WBC、T-LYM，以及PT和APTT變化,從抗炎和活血兩方面探討了鹿角膠調(diào)節(jié)血虛癥可能的機(jī)制，結(jié)果顯示，鹿角膠可明顯升高血虛小鼠全血中RBC 、PLT、WBC、T-LYM數(shù)量，提高PT和APTT，提示鹿角膠可作為治療腫瘤和改善化療藥物產(chǎn)生血虛癥的輔助用藥，為臨床應(yīng)用提供參考。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:302.

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