羅 東,張家衡，柯有力

(武漢市中西醫(yī)結合醫(yī)院 胸心外科，武漢 430022)

缺血再灌注后出現的肺急性損傷是肺動脈成形、體外循環(huán)等手術術后患者肺功能障礙的重要原因之一[1]。急性肺損傷(ALI)一般認為多屬中醫(yī)“暴喘”“喘脫”等病證范圍[2]。本實驗通過在體兔肺缺血再灌注動物模型,觀察防己黃芪湯對肺缺血再灌注損傷(Lung ischaemia-reperfusion Injury，LIRI)的保護作用，并探討其可能的作用機制。

1 實驗材料

健康成年日本大耳白兔30只，雌雄不拘，體質量(2.5±0.5) kg,購于武漢市生物制品研究所動物實驗中心。DW2000型動物人工呼吸機(上海嘉鵬科技有限公司)；防己黃芪湯組成為：防己12 g，黃芪15 g，白術9 g，甘草6 g，使用中藥顆粒沖泡成水性藥液，每毫升藥液含生藥1 g，中藥顆粒由江蘇江陰藥品有限公司生產；超氧化物歧化酶(SOD)(批號：20120606)試劑盒購自南京建成生物工程研究所；伊文思蘭(EB，Fluka公司)；二甲基甲酰胺(廣東汕頭西隴化工廠)。

2 實驗方法

2.1 動物分組和處理 30只日本大耳白兔隨機分為3組(每組10只)。防己黃芪湯組,于術前連續(xù)7 d灌服防己黃芪湯，2 mL/(kg·d)，對照組及假手術組術前不作干預。建立肺缺血再灌注損傷模型：實驗動物稱重，經耳緣靜脈注射25%烏拉坦(4 mL/kg)麻醉，術中以0.8 mL/kg間斷給藥維持。頸正中切開，游離氣管，在氣管正中做T型切口,氣管插管、固定，連接動物呼吸機給予機械通氣，呼吸頻率30次/min，吸呼比1∶1，氧濃度100%，潮氣量10 mL/kg。胸骨旁線縱行切開左胸，切斷左下肺韌帶，游離左肺，由肺門后方繞過阻斷帶，備阻斷肺門用。肝素350 U/kg肝素化。實驗動物隨機分3組(n=10):防己黃芪湯組術中于呼氣末時用阻斷器阻斷左肺門造成左肺缺血1 h后開放阻斷器，左肺恢復灌注并復張后觀察3 h；對照組，阻斷左肺門1 h后開放阻斷器，左肺恢復灌注并復張后觀察3 h；假手術組，開胸后僅游離左肺門并套帶，不阻斷肺門，觀察4 h。

2.2 檢測指標 1)肺含水量測定：防己黃芪湯組和對照組在缺血1 h、再灌注3 h，假手術組在開胸4 h，于近肺門處結扎并切取部分左肺下葉肺組織，計算肺含水量:肺組織稱濕重，80 ℃干燥箱中烘干24 h后稱干重，通過公式算出肺含水量。肺含水量=(濕重-干重)/濕重×100%;2)組織學觀察：上述方法取部分左肺下葉組織，10%甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋、制成切片、HE染色，光鏡下觀察肺組織結構破壞、肺間質水腫及炎性細胞浸潤程度；3)SOD含量測定：余下左肺組織凍存，按試劑盒說明測定SOD含量；4)肺血管通透性比較：EB法檢測肺毛細血管通透性。各組按2 mL/Kg經股靜脈注射2%EB，1 h后取左肺上葉比較肺血管通透性差異：取左肺上葉肺組織約300 mg，吸干血液，按每100 mg濕重組織用1 mL甲酰胺的比例浸泡、置入37 ℃水浴中24 h，5 000 r/min抽提離心后，于波長620 nm處測吸光度，計算出伊文思蘭含量(μg/g)。

3 實驗結果

3.1 肺含水量測定 防己黃芪湯組和對照組左肺含水量均顯著高于假手術組(P<0.05)，防己黃芪湯組肺含水量則明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05,見表1)。

3.2 肺血管通透性比較 防己黃芪湯組和對照組左肺組織中伊文思蘭含量明顯高于假手術組(P<0.05)，而防己黃芪湯組肺組織中伊文思蘭含量明顯低于對照組(P<0.05,見表1)。

3.3 肺組織中SOD含量檢測 防己黃芪湯組和假手術組中SOD含量均明顯高于對照組(P<0.05)，且防己黃芪湯組SOD含量高于假手術組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表1)。

組 別含水量/%伊文思蘭含量/(μg/g)SOD/(NU/mL)對照組 89.52±0.36△ 182.6±17.7△ 94.32± 9.96△ 假手術組 75.57±0.22 113.8±11.5 113.52±11.23 防己黃芪組81.89±0.27#△129.3±13.1#△126.34±12.56#△

注：與對照組比較，#P<0.05，與假手術組比較，△P<0.05

3.4 肺組織學觀察 對照組缺血1 h、再灌注3 h后，動物左肺可見肺血管擴張充血，肺間質水腫，肺泡腔內有漿液性滲出，并有大量紅細胞漏出，中性粒細胞浸潤明顯。防己黃芪湯組動物左肺損傷很輕，肺泡結構完整，肺水腫程度較對照組明顯減輕，肺泡腔內僅有少量紅細胞漏出，中性粒細胞浸潤很少。假手術組動物左肺組織無破壞征象，肺泡壁完整，肺間質無水腫，無中性粒細胞浸潤。

4 討論

缺血再灌注可導致組織內有氧自由基(OFR)大量生成，激活及釋放多種炎性介質可使肺脂質過氧化增強，引起微血管損傷、通透性增高，細胞間質水腫，ATP酶活性受損,是引起患者呼吸功能下降的主要原因[3]。李玉梅等[4]對大鼠肺損傷研究過程中證實炎性介質直接參與了肺損傷。本研究在建立兔肺缺血再灌注動物模型的基礎上發(fā)現對照組兔肺組織經歷缺血再灌注后與假手術組相比可見肺血管擴張充血，中性粒細胞浸潤，肺泡腔內有大量漿液性滲出及紅細胞漏出，表明發(fā)生了嚴重的肺水腫。尋找抑制氧自由基生成、減輕肺水腫等改善缺血再灌注后肺功能的方法是目前亟待解決的難題。

陳建真等[5]認為黃芪對血管內皮細胞通透性增加有改善作用，并有清除氧自由基作用。高妮娜等[6]認為黃芪具有免疫增強和免疫抑制的雙向調節(jié)作用。白玉新等[7]認為黃芪有減輕脂質過氧化、清除自由基、增強ATP酶活性、抑制腫瘤壞死因子-α等作用。王迪等[8]通過研究黃芪組方對小鼠免疫功能的影響，證實黃芪在提高淋巴細胞轉化率和TNF活性方面起主導作用。有學者[9]認為，黃芪、白術、甘草組方可補益脾肺之氣，增強肺組織ATP酶活性。黃芪是防己黃芪湯重要成分，SOD是體內重要的抗氧化酶，它可對抗與阻斷氧自由基對細胞造成的損害，并及時修復受損細胞，復原氧自由基造成的細胞傷害。本研究觀察到,肺缺血再灌注損傷后對照組SOD含量明顯減少，防己黃芪湯組SOD含量明顯高于對照組及假手術組。其結果提示中藥防己黃芪湯可提高體內抗氧化酶系統(tǒng)的活性，增加清除氧自由基的能力，減輕肺缺血再灌注損傷的程度。

陳 等[10]研究表明，在方劑瓜蔞薤白半夏湯中加黃芪以補氣行氣，能對抗氧化低密度脂蛋白對血管內皮細胞生長的抑制作用。本研究結果發(fā)現與對照組相比，防己黃芪湯組動物肺泡結構完整，肺泡腔內僅有少量紅細胞漏出，肺水腫程度明顯減輕。肺含水量測定結果也證實防己黃芪湯具有減輕肺缺血再灌注后肺水腫的作用。肺組織中伊文思蘭含量測定亦提示防己黃芪湯組肺血管通透性得到了明顯的改善，也印證了黃芪對微血管內皮細胞的保護作用。

中醫(yī)理論認為，手術時耗傷元氣，肺失宣肅，津液不布，聚液為痰。治療時應以補益肺氣、止咳化痰為法。防己黃芪湯是益氣利水的代表方，出自《金匱要略》，原文：“風濕脈浮，身重汗出惡風者，防己黃芪湯主之?！苯M方有防己、黃芪、白術、甘草等，防己祛風濕利小便；黃芪益氣固表扶正以祛風濕之邪；白術健脾益氣，利水燥濕；甘草調和營衛(wèi)，諸藥合用，扶正祛邪，祛風除濕，故宜于氣虛挾濕的病癥。防己黃芪湯功能益氣祛風、健脾利水，治療衛(wèi)氣不固，外受風邪而致的風水、風濕證。其配伍特點是益氣與利水并行，標本兼顧，重在固本，體現了消補兼施之法。

[1]胡克儉,葉磊,姜楨,等.體外循環(huán)中急性肺水腫分析[J].上海生物醫(yī)學工程,2002,23(1):6-7,10.

[2]耿耘,魏星.急性呼吸窘迫綜合征的中醫(yī)發(fā)病機理探討[J].江西中醫(yī)藥,2002,33(5):11-12.

[3]Van D,Kluin J,Haitsma J J,et al.Ischemia of the lung causes extensive long-term pulmonary injury:an experimen-tal study[J].Respiratory Research,2008,9(1):28.

[4]李玉梅,戴春來,周文莉,等.高氧肺損傷肺組織中IL-8和IL-10含量的變化及意義[J].吉林大學學報:醫(yī)學版,2010,36(5):918-921.

[5]陳建真,呂圭源,葉磊,等.黃芪黃酮的化學成分與藥理作用研究進展[J].醫(yī)藥導報,2009,28(10):1314-1316.

[6]高妮娜,李麗.黃芪調節(jié)免疫功能的應用研究[J].長春中醫(yī)藥大學學報,2008,24(6):671.

[7]白玉新,傅亮,高進.黃芪對缺血性急性腎功能衰竭的保護作用[J].中國實驗方劑學雜志,2009,15(7):74-76.

[8]王迪,張文風,張杰.黃芪配甘草對小鼠細胞免疫功能的影響[J].長春中醫(yī)藥大學學報,2006,22(3):42-43.

[9]梁啟軍,李存霞,王鵬.益氣溫陽活血湯對肺心病初期家兔模型肺組織ATP酶的影響[J].吉林中醫(yī)藥,2010,30(7):628-630.

[10]陳 ,郜俊清,金惠根,等.補氣化痰方對氧化低密度脂蛋白誘導血管內皮細胞損傷的保護作用[J].吉林中醫(yī)藥,2013,33(6):612-614.