王朝輝,張嬌嬌,劉 暢,郄麗麗,韓東岳,逄紫千

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，長(zhǎng)春 130117)

糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy,DPN)一直以來都是糖尿病患者致殘的高危因素。研究表明針刺能夠明顯改善神經(jīng)傳導(dǎo)功能[1]，對(duì)治療糖尿病周圍神經(jīng)病變具有良好的療效[2-4]。本文通過針刺不同穴組治療糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變，觀察不同穴組腧穴對(duì)糖尿病大鼠周圍神經(jīng)的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 選用清潔級(jí)健康雄性Wistar大鼠,6～8周齡，體質(zhì)量(200±20) g，由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為正常對(duì)照組、糖尿病模型組、西藥組、治療1組、治療2組和治療3組，每組10只。

1.2 主要試劑和器材 鏈脲佐菌素(STZ，美國(guó)Sigma)，彌可保(德國(guó)：拜耳醫(yī)藥分裝)，水合氯醛、無水乙醇、鹽酸(北京化工)，蘇木素及伊紅染液(鼎國(guó))，二甲苯(國(guó)藥集團(tuán))，中性樹膠；血糖儀及試紙(臺(tái)灣：優(yōu)克糖)，毫針(華佗牌:0.25 mm×25 mm)、切片機(jī)(日本LE-ICA公司LKB-Ⅲ型)，載玻片、蓋玻片，光學(xué)顯微鏡及攝像系統(tǒng)(日本COIC 980153型)。

1.3 模型復(fù)制方法 分組后除對(duì)照組外各組大鼠禁食不禁水24 h后按60 mg/kg(體質(zhì)量)腹腔內(nèi)注射1%STZ檸檬酸緩沖液(濃度0.1 mmol/L，PH4.2～4.4)；正常對(duì)照組注射等劑量的檸檬酸緩沖液進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)，注射后給予正常飲食。72 h后尾靜脈采血測(cè)定血糖，血糖值≥16.7 mmol/L的大鼠為造模成功。

1.4 治療方法 治療組均采用針刺治療，參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》(中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2007年第2版)的方法定位取穴，治療1組針刺肺俞、脾俞、腎俞，治療2組針刺足三里、三陰交、合谷,治療3組選取肺俞、脾俞、腎俞、足三里、三陰交、合谷。所有腧穴均雙側(cè)取穴，常規(guī)消毒，背俞穴毫針平刺6 mm，肢體穴位毫針直刺深度1～5 mm,行平補(bǔ)平瀉法后，針上通電，疏密波，中等強(qiáng)度刺激以局部微抽動(dòng)為宜，每次30 min，隔日針刺1次，連續(xù)治療12周。西藥組給予彌可保喂服，1次/d，15 μg/次；對(duì)照組，糖尿病模型組給予與彌可保等量的生理鹽水喂服刺激，連續(xù)喂服12周。

1.5 血糖、體質(zhì)量指標(biāo)檢測(cè) 各組大鼠分別在造模前，造模72 h后，造模成功后治療12周進(jìn)行血糖、體質(zhì)量檢測(cè)。

1.6 神經(jīng)組織病理形態(tài)觀察

1.6.1 取材 治療結(jié)束后各組大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，在麻醉狀態(tài)下解剖大鼠背側(cè)骶尾部，分離尾神經(jīng)，取神經(jīng)組織中段1 cm左右固定于4%多聚甲醛固定液中，用于HE染色。

1.6.2 神經(jīng)組織HE染色 常規(guī)石蠟包埋，切片8 μm，脫蠟，HE染色。HE染色步驟：1)先將石蠟切片用二甲苯脫蠟(二甲苯各10 min/次，2次)。2)梯度酒精水化(100%、90%、75%、50%乙醇，各8 min)，在蒸餾水中浸泡5 min。3)0.01 mol/L PBS(pH=7.4)浸泡5 min/次，3次。4)蘇木素染色10～30 min。5)自來水稍洗去蘇木精液，洗3 s。6)1%鹽酸乙醇分化1～3 s。7)自來水洗15 s。8)0.5%氨水返藍(lán)15 s。9)自來水洗10 min。10)蒸餾水洗2 s。伊紅染色復(fù)染1～3 min。蒸餾水稍洗。梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血糖水平比較 見表1。西藥組和治療組與模型組相比在治療后血糖水平均有所下降,治療12周后顯示血糖水平明顯下降，而治療3組較西藥組及治療1組、治療2組降糖療效更加明顯,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 各組大鼠體質(zhì)量水平比較 見表2。與正常組比較各組大鼠體質(zhì)量在造模72 h后明顯下降, 模型組大鼠體質(zhì)量在成膜后下降趨勢(shì)明顯；與模型組比較西藥組及各治療組大鼠體質(zhì)量下降水平均有所改善，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而與西藥組、治療1組及治療2組比較，治療3組大鼠體質(zhì)量下降水平明顯改善,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 各組大鼠血糖水平比較 mmol/L

注：與正常對(duì)照組比較,■P<0.05；與糖尿病模型組比較,#P<0.05；與治療3組比較,△P<0.01。

表2 各組大鼠體質(zhì)量水平比較 g

注：與正常對(duì)照組比較,■P<0.05；與糖尿病模型組比較,#P<0.05；與治療3組比較,△P<0.05。

A：正常組；B：模型組；C：西藥組；D：治療1組；E：治療2組；F：治療3組圖1 各組大鼠尾神經(jīng)縱切病理形態(tài)(HE×400)

2.3 尾神經(jīng)HE染色結(jié)果 正常對(duì)照組大鼠尾神經(jīng)纖維排列緊密，髓鞘形態(tài)正常，軸突清晰可見；糖尿病模型組尾神經(jīng)纖維髓鞘形態(tài)明顯異常，神經(jīng)纖維排列紊亂松散，髓鞘細(xì)胞減少且分布紊亂，部分軸突萎縮、變性；治療1組、治療2組及西藥組大鼠尾神經(jīng)神經(jīng)纖維髓鞘病理結(jié)構(gòu)改變均有所改善，而治療3組大鼠尾神經(jīng)神經(jīng)纖維髓鞘病理形態(tài)變化較治療1組、治療2組及西藥組改善更加明顯(見圖1)。

3 討論

研究表明[5-7]，高血糖引起的神經(jīng)脫鞘樣改變、周圍神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)障礙以及周圍神經(jīng)微血管病變是糖尿病周圍神經(jīng)病變發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)。其主要機(jī)制為代謝障礙，神經(jīng)組織中果糖和山梨醇的含量增高，雪旺氏細(xì)胞中醛糖還原酶含量增高等所致的周圍神經(jīng)損害[8-9]。針刺對(duì)神經(jīng)組織具有很好的修復(fù)功能[10-12]。通過對(duì)比顯示，針刺背俞穴配合肢體遠(yuǎn)端腧穴治療糖尿病周圍神經(jīng)病變具有優(yōu)于單獨(dú)針刺這2組腧穴的神經(jīng)修復(fù)療效，這種有效修復(fù)神經(jīng)組織的作用與背俞穴配合體針的配伍協(xié)同作用密切相關(guān)。一方面，背俞穴位置與脊神經(jīng)后根鄰近，針刺背俞穴可直接刺激感覺神經(jīng)末梢、交感神經(jīng)末梢以及神經(jīng)伴隨的血管，通過反射作用于脊髓相應(yīng)節(jié)段的植物神經(jīng)中樞，調(diào)節(jié)臟腑功能，改善胰島功能及胰島素抵抗以快速降糖，降低神經(jīng)組織中果糖和山梨醇和雪旺氏細(xì)胞中醛糖還原酶含量。另一方面，針刺合谷、三陰交、足三里等局部腧穴還可增加周圍神經(jīng)血流量，改善微血管病變，提高內(nèi)源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)等神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子含量,促進(jìn)軸突與髓鞘修復(fù)。

祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，糖尿病周圍神經(jīng)病變的基本病機(jī)為氣陰虧虛、脈絡(luò)瘀阻，常累及肺、脾、腎三臟，治療選取肺俞、脾俞、腎俞等背俞穴調(diào)理臟腑功能，取合谷、三陰交、足三里等局部腧穴疏通經(jīng)絡(luò)氣血，同時(shí)還可輔助調(diào)節(jié)臟腑功能,6穴的配伍療效明顯優(yōu)于單純選取背俞穴或肢體穴位，充分體現(xiàn)了中醫(yī)學(xué)辨證論治、整體調(diào)節(jié)的宏觀治療優(yōu)勢(shì)，突出腧穴配伍的重要性。

[1]逄紫千,王朝輝,朱丹,等.早期針刺干預(yù)對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)電生理的影響[J].吉林中醫(yī)藥,2010,30(9):808-810.

[2]Sun Yuan-zheng,Xu Ying-ying.Clinical and electrophysiological observations on diabetic peripheral neuropathytreated by warm needling and moxibustion[J].World J.Acu-moxi.Vol,2008,18(2):1-6.

[3]陳妮,沈衛(wèi)國(guó).針刺對(duì)氣陰兩虛型糖尿病周圍神經(jīng)病變患者的臨床觀察[J].遼寧中醫(yī)雜志,2012,39(12):2476-2480.

[4]金澤.足三針溫針療法治療糖尿病性周圍神經(jīng)病的臨床觀察[J].針灸臨床雜志,2013,29(5):42-44.

[5]Verrotti A,Giuva PT,Morgese G,et al,New trends in the etiopathogenesis of diabetic peripheral neuropathy[J].J Child Neurol,2001,16(6):389-94.

[6]沈薇,董繼宏,汪昕.糖尿病周圍神經(jīng)病的發(fā)病機(jī)制及治療展望[J].中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué),2008,16(2):204-207.

[7]Cameron NE,Cotter MA.Diabetes causes an early reduction in autonomic ganglion blood flow in rats[J].Diabetes Complications,2001,15(4):198-202.

[8]逄紫千,謝占峰,閻慧,等.針刺對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠尾神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)的影響[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,27(4):523-525.

[9]張秋娟,施茵,張?jiān)圃?等.電針對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度和超微結(jié)構(gòu)的影響[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù),2007,11(16):3069-3073.

[10]Nardone A,Schieppati M.Group Ⅱspindle fibres and afferent control of stance.Clues from diabetic neuropathy[J].Clin Neuro physiol,2004,115(4):779-789.

[11]Oltman C L,Coppey L J,Gellett JS,et al.Progression of vascular and neural dysfunction in sciatic nerves of Zucker diabetic fatty and Zucker rats[J].Am J Physiol Endocrinol Metab,2005,289(1):113-122.

[12]董彥敏,李惠林,倪青,等.針刺對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變治療作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào):中醫(yī)臨床版,2006,13(2):7-10.