楊長(zhǎng)琴

(天津市濱海新區(qū)食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心， 天津 300457)

HPLC法測(cè)定牛黃上清膠囊中梔子苷含量*

楊長(zhǎng)琴

(天津市濱海新區(qū)食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心， 天津 300457)

目的：建立HPLC法測(cè)定牛黃上清膠囊中梔子苷的含量。方法：采用Agela C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm),以甲醇-水(20∶80)為流動(dòng)相，流速為0.8 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm。結(jié)果：梔子苷線性范圍為0.101 7～0.610 2 μg/ml(r=0.999 9)，平均回收率為99.53%，RSD為0.57%(n=6)。結(jié)論：本方法可靠、靈敏、準(zhǔn)確，適用于牛黃上清膠囊中梔子苷的質(zhì)量控制。

HPLC，牛黃上清膠囊，梔子苷

牛黃上清膠囊處方由人工牛黃、薄荷、菊花、荊芥穗、白芷、川芎、梔子等中藥材組成，具有清熱瀉火，散風(fēng)止痛的功效。為了更加有效控制該制劑質(zhì)量，本文采用HPLC法對(duì)處方梔子中梔子苷進(jìn)行含量測(cè)定，該方法操作簡(jiǎn)便、分離度好、專屬性強(qiáng)。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀LC-2010A，島津高效液相色譜儀工作站LC-Solution；十萬(wàn)分之一分析天平(日本島津)；Agela C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。梔子苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110749-201115，含量99.7%)；牛黃上清膠囊(江西天施康弋陽(yáng)制藥有限公司，批號(hào)13090102、12070502、12060801)；甲醇為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：Agela C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(20∶80)；檢測(cè)波長(zhǎng)：238 nm；流速：0.8 ml/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μl。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱取梔子苷對(duì)照品20.40 mg，置200 ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻；精密量取10 ml,置25 ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 取本品“裝量差異”項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取約0.4 g，精密稱定，置25 ml量瓶中,加甲醇適量溶解，超聲處理(功率150 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻,濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例制備不含梔子的樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.4專屬性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示陰性對(duì)照在梔子苷相同保留時(shí)間處無(wú)干擾峰，見圖1。

1 梔子苷

2.3線性考查 精取對(duì)照品溶液5、10、15、20、25和30 μl，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)，得回歸方程Y=14 591.9X+1 630.9(r=0.999 9)。結(jié)果表明梔子苷在0.101 7～0.610 2 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定梔子苷峰面積，RSD為0.14%，說(shuō)明該法精密度良好。

2.5重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同批號(hào)的樣品0.4 g(批號(hào)13090102)，精密稱取6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，測(cè)定梔子苷含量，其RSD為0.10%，說(shuō)明該法重現(xiàn)性良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備的供試品溶液(批號(hào)13090102)，分別在0、4、8、12、24、48和72 h測(cè)定，梔子苷峰面積RSD為0.67%，說(shuō)明該溶液在72 h內(nèi)穩(wěn)定。

2．7回收率試驗(yàn) 取同批樣品(批號(hào)13090102，含量0.95 mg/粒)約0.2 g，精密稱取6份，分別置25 ml量瓶中，各精密加入梔子苷對(duì)照品溶液至刻度，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果梔子苷的平均回收率為99.53%，RSD為0.57%，見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.8樣品含量測(cè)定 取3批次的樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件分析，根據(jù)供試品和對(duì)照品的峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 梔子苷在《中國(guó)藥典》2010年版一部梔子含量測(cè)定方法中波長(zhǎng)選擇為238 nm[1]，本品采用藥典選用波長(zhǎng)為該品種的測(cè)定波長(zhǎng)，且梔子苷與其相鄰峰取得了較好的分離效果。

3.2流動(dòng)相的選擇 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，考查了不同組分的流動(dòng)相，將甲醇-水(20∶80)[1]、乙腈-水(15∶85)[2]、乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液(8∶1∶91)[3]三種流動(dòng)相進(jìn)行比較，結(jié)果顯示以甲醇-水(20∶80)為流動(dòng)相色譜分離效果最佳，系統(tǒng)保留時(shí)間適中，故將其確定為流動(dòng)相。

3.3提取溶劑及提取方法的選擇 本實(shí)驗(yàn)選擇50%甲醇和純甲醇作溶劑，分別超聲提取30 min，結(jié)果純甲醇提取樣品含量較高；又以純甲醇為溶劑，回流提取30 min，結(jié)果超聲提取較回流提取更為完全。因此最終選擇純甲醇超聲提取30 min，該法提取較為完全，且簡(jiǎn)便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 中國(guó)藥典[S].一部.2010：231，491

2 馮亦穎，王巨存，徐學(xué)銳.高效液相色譜法測(cè)定龍膽瀉肝丸中梔子苷的含量[J].天津藥學(xué)，2008，20(3)： 11-13

3 紀(jì)曉影，畢開順，王洋，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定抗感解毒顆粒中綠原酸、梔子苷和葛根素的含量[J].藥物分析雜志，2010，30(1)：56-58

DeterminationofgeniposideinNiuhuangshangqingCapsulesbyHPLC

Yang changqin

(Tianjin Binhaixinqu Center for Food and Drug Control,Tianjin 300457)

Objective: To establish a HPLC method for determinative of geniposide in Niuhuangshangqing Capsules.Method∶The Agela C18column (250 mm×4.6 mm，5 μm) was used with the mobile phase consisted of methanol-water(20∶80),the flow rate was 0.8 ml/min,the detection wavelength was set at 238 nm.Result:The linear range of geniposide was 0.101 7～0.610 2 μg/ml(r=0.999 9),the average recovery rate was 99.53%,RSD was 0.57%(n=6).Conclusion∶The method is reliable,sensitive,accurate and can be used for the quality control of Niuhuangshangqing Capsules.

HPLC,Niuhuangshangqing Capsules,geniposide

2014-02-14

R927.2

A

1006-5687(2014)04-0018-03