徐正強(qiáng)，沈莉萍，桂劍峰，傅建義，楊天春

（1.上海動(dòng)物園，上海 長(zhǎng)寧 200335；2.上海市動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，上海 長(zhǎng)寧 201103）

卷羽鵜鶘（Pelecanus crispus）屬鵜形目（Pele?caniforms）鵜鶘科（Pelecanidae），是一種大型游禽，被IUCN列為受威脅物種（Vulnerable），屬國(guó)家二級(jí)重點(diǎn)保護(hù)動(dòng)物[1-3]。上海動(dòng)物園于20世紀(jì)50年代引進(jìn)卷羽鵜鶘進(jìn)行試養(yǎng)，并在20世紀(jì)70年代成功繁殖，現(xiàn)在種群已發(fā)展至40多只。從20世紀(jì)80年代開(kāi)始探索鵜鶘的人工孵化和育雛技術(shù)并取得初步成功，從2008年開(kāi)始，人工孵化和育雛的1周齡鵜鶘幼鳥(niǎo)出現(xiàn)陸續(xù)發(fā)病并死亡的現(xiàn)象，至2012年共計(jì)82只幼鳥(niǎo)發(fā)病，造成56只幼鳥(niǎo)死亡。發(fā)病幼鳥(niǎo)一般于7日齡時(shí)出現(xiàn)嘔吐，食欲不振，排泄物呈橘紅色，呼吸困難。發(fā)病幼鳥(niǎo)生長(zhǎng)發(fā)育較差，身體裸露，缺乏絨毛，體重增長(zhǎng)緩慢。

為了探求鵜鶘幼鳥(niǎo)的發(fā)病原因和醫(yī)治方法，從2010年開(kāi)始連續(xù)對(duì)發(fā)病死亡的幼鳥(niǎo)進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定、藥敏試驗(yàn)和治療試驗(yàn)，取得了較好的結(jié)果，現(xiàn)就2008-2012年間鵜鶘幼鳥(niǎo)發(fā)病情況、疾病診斷和治療結(jié)果報(bào)告如下，希望為今后鵜鶘的人工繁育和野外保護(hù)提供基礎(chǔ)資料。

1 研究方法

1.1 幼鳥(niǎo)的發(fā)病、治療及存活情況統(tǒng)計(jì) 對(duì)2008-2012年成功出殼的鵜鶘幼鳥(niǎo)的發(fā)病情況、藥物處理及其存活情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，存活個(gè)體指大于3月齡的鵜鶘個(gè)體。

1.2 細(xì)菌的分離鑒定、藥敏試驗(yàn) 2010-2011年共對(duì)幼鳥(niǎo)飼料（1份）、未受精蛋（2份）、死亡胚胎（5份）和死亡幼鳥(niǎo)（4份）共12份樣本進(jìn)行了細(xì)菌的分離鑒定、藥敏試驗(yàn)。

1.2.1 試驗(yàn)材料 培養(yǎng)基：哥倫比亞瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂、三糖鐵瓊脂、營(yíng)養(yǎng)肉湯、MHA等，由北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司提供并按常規(guī)法配制；GNI+革蘭陰性鑒定卡，批號(hào)：S109M，由法國(guó)梅里埃公司提供；藥敏紙片，共16種，由杭州天和微生物試劑有限公司提供；藥敏試驗(yàn)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株，大腸桿菌(ATCC25922)，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng) 將無(wú)菌采集的病料（心、肝、脾、肺、腎、膽汁、卵黃、腦等）接種于哥倫比亞(Columbia)羊血瓊脂平板，36℃培養(yǎng)24 h后，挑取可疑菌落涂片鏡檢并純培養(yǎng)。將純培養(yǎng)菌分別接種于哥倫比亞血瓊脂平板、伊紅美藍(lán)、三糖鐵瓊脂等，37℃培養(yǎng)24 h，觀察其培養(yǎng)特性。

1.2.3 VITEK鑒定 對(duì)分離菌的純培養(yǎng)物按照細(xì)菌鑒定卡操作規(guī)范進(jìn)行操作，并在VITEK-32全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀上讀取細(xì)菌鑒定結(jié)果。

1.2.4 藥敏試驗(yàn) 將細(xì)菌純培養(yǎng)物接種于MHA平板，用紙片法進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)，36℃培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果。試驗(yàn)方法及判讀標(biāo)準(zhǔn)參照CLSI2010。

2 研究結(jié)果

2.1 細(xì)菌的生化特性和分離鑒定 將無(wú)菌采集的病料分別接種于哥倫比亞羊血瓊脂平板，36℃、24 h培養(yǎng)后，5#～12#均無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，而樣品1#～4#（死亡幼鳥(niǎo)）初代培養(yǎng)均分離純一的細(xì)菌（表1），經(jīng)革蘭染色、涂片鏡檢，均為革蘭陰性桿菌。4株分離菌在Columbia羊血瓊脂平板上形成濕潤(rùn)、邊緣整齊、圓形、隆起、灰白色中等大小菌落，β溶血；肉湯中培養(yǎng)為均勻渾濁、管底有多量沉淀、振搖呈絮狀升起，管壁有菌環(huán)；伊紅美藍(lán)上為黑色有金屬光澤菌落；三糖鐵瓊脂上為斜面和底層變黃、產(chǎn)氣、無(wú)H2S產(chǎn)生（表2）。4株細(xì)菌在VITEK-32全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀上鑒定均為大腸桿菌Escherichia coli（表2）。

表1 不同樣品中分離到大腸桿菌情況

表2 分離菌株生化特性

2.2 藥敏試驗(yàn) 分離菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3，從表3中可以看出，4株分離菌對(duì)頭孢哌酮、丁胺卡那霉素敏感，而對(duì)其他藥物部分敏感。

2.3 不同藥物處理幼鳥(niǎo)組的存活情況 2008-2012年間分別根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果采用不同藥物對(duì)82只發(fā)病幼鳥(niǎo)進(jìn)行醫(yī)治，其治療效果見(jiàn)表4。從表4中可以看出，2008-2010年分別使用青霉素、慶大霉素和大觀霉素對(duì)56只發(fā)病幼鳥(niǎo)進(jìn)行醫(yī)治，其治療效果不明顯，發(fā)病幼鳥(niǎo)全部死亡；而2011-2012年使用丁胺卡那霉素對(duì)26只發(fā)病幼鳥(niǎo)進(jìn)行醫(yī)治，其治療效果明顯，發(fā)病幼鳥(niǎo)全部存活。

表3 分離菌株藥敏試驗(yàn) （抑菌圈直徑，mm）

2.4 鵜鶘的人工孵化、出雛和育雛管理操作 發(fā)病后鵜鶘的人工孵化、出雛和育雛管理操作如下：將自然環(huán)境下的鵜鶘巢穴中取出的蛋浸入5%碘伏溶液中消毒5 min后，晾干后放入孵化箱中孵化，不同批次的蛋放入不同孵化箱內(nèi)分別孵化。當(dāng)?shù)俺霈F(xiàn)破殼點(diǎn)后移入出雛箱內(nèi)出雛，幼鳥(niǎo)1日齡后轉(zhuǎn)移到育雛室中進(jìn)行飼養(yǎng)。

3 討論

大腸桿菌是一種條件致病菌，當(dāng)外界條件適宜和鳥(niǎo)類機(jī)體免疫力下降時(shí)，剛孵化出殼的鳥(niǎo)類幼體容易感染該細(xì)菌。幼鳥(niǎo)感染的途徑主要有兩種類型，一是垂直感染，即直接由生病雌性母鳥(niǎo)感染胚胎引起的；二是水平感染，即由飼養(yǎng)環(huán)境、飼料等物品中有該細(xì)菌存在造成的。本試驗(yàn)中未受精的鵜鶘蛋和胚胎中均未檢測(cè)出細(xì)菌表明，由雌鳥(niǎo)直接感染胚胎引起的幼鳥(niǎo)發(fā)病機(jī)會(huì)很少，同時(shí)幼鳥(niǎo)飼料中也未檢測(cè)出細(xì)菌，說(shuō)明由飼料引起的“病從口入”的感染途徑的可能性不大。相反，死亡幼鳥(niǎo)中有2個(gè)個(gè)體樣本的卵黃囊中檢測(cè)出致病菌（表1）說(shuō)明，鵜鶘幼體感染是可能在出殼以后發(fā)生，這是因?yàn)轼B(niǎo)類幼體出殼時(shí)孵化箱溫度較高、相對(duì)濕度較大，加上出殼時(shí)胚胎的殘留物，這為細(xì)菌的繁殖創(chuàng)造了有利條件，這可能是造成幼鳥(niǎo)發(fā)病的重要途徑之一。

表4 不同藥物醫(yī)治的幼鳥(niǎo)存活情況

藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，鵜鶘幼鳥(niǎo)感染的大腸桿菌對(duì)丁胺卡那霉素、頭孢哌酮敏感，這也是2011年前對(duì)發(fā)病幼鳥(niǎo)使用慶大霉素、青霉素和大觀霉素進(jìn)行醫(yī)治無(wú)效的原因。根據(jù)Ellis等（2003）建議[5]，在出殼后第2天對(duì)鵜鶘幼鳥(niǎo)肌肉注射丁胺卡那霉素進(jìn)行預(yù)防性用藥，預(yù)防效果明顯。另外，規(guī)范鵜鶘的人工孵化、出雛和育雛管理操作環(huán)節(jié)，避免不同批次或不同種類的蛋間的相互感染，以減少幼鳥(niǎo)感染病菌的機(jī)會(huì)。

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