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        蒜頭果油中神經(jīng)酸的含量測(cè)定

        2014-08-08 16:34:50羅愛勤王小妹劉春芳葛發(fā)歡
        中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥 2014年14期
        關(guān)鍵詞:氣相色譜法含量測(cè)定

        羅愛勤+王小妹+劉春芳+葛發(fā)歡

        [摘要] 目的 建立蒜頭果油中神經(jīng)酸含量測(cè)定的方法。 方法 采用氣相色譜法,毛細(xì)管柱為ZB-Wax(30.00 m×0.25 mm×0.50 μm),神經(jīng)酸為對(duì)照品,程序升溫,采用FID檢測(cè)器。 結(jié)果 神經(jīng)酸在0.3045~6.0900 mg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系,平均回收率為101.5%,RSD為2.12%。 結(jié)論 本法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好,可用于測(cè)定蒜果油中神經(jīng)酸的含量。

        [關(guān)鍵詞] 氣相色譜法;蒜頭果油;神經(jīng)酸;含量測(cè)定

        [中圖分類號(hào)] R285[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1674-4721(2014)05(b)-0014-03

        Content determination of nervonic acid from Malania oleifera oil

        LUO Ai-qin1,2 WANG Xiao-mei2 LIU Chun-fang2 GE Fa-huan2

        1.School of Chinese Materia Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006,China;2.Guangzhou Hanfang Pharmaceutical Co.Ltd./National Engineer Research Center for the Modernization of Extraction and Separation of TCM,Guangzhou 510240,China

        [Abstract] Objective To establish a method for the content determination of nervonic acid from Malania oleifera oil. Methods Nervonic acid was determined by gas chromatography with aera-external standard method.A capillary column ZB-Wax(30.00 m×0.25 mm×0.50 μm)was used with nervonic acid as external standard,temperature programming and FID detector were used. Results Nervonic acid presented a good linear correlation within range from 0.3045 to 6.0900 mg/ml.The average recovery of nervonic acid was 101.5%,RSD was 2.12%. Conclusion This method is simple,reliable,has good repeatability and can be used for quality control of Malania oleifera oil.

        [Key words] Gas chromatography;Malania oleifera oil;Nervonic acid;Content determination

        蒜頭果為鐵青樹科蒜頭果屬植物的果實(shí),別名山桐果、馬蘭后、麥后等,主產(chǎn)于廣西西部至云南東南部一帶,產(chǎn)量豐富[1-2]。神經(jīng)酸及其酯類化合物是蒜頭果油的主要成分。神經(jīng)酸的化學(xué)名順-15-二十四碳烯酸,是一種長(zhǎng)鏈的單不飽和脂肪酸,具有恢復(fù)神經(jīng)末梢活性、促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育功能的作用,是大腦發(fā)育維持的必需營(yíng)養(yǎng)物[3-7]。目前,有關(guān)神經(jīng)酸測(cè)定的文獻(xiàn)[8-12]只介紹了氣相色譜法,以神經(jīng)酸甲酯或乙酯為對(duì)照品,將樣品進(jìn)行甲酯化或乙酯化后,測(cè)定酯化物的含量,并將酯化物的量表述為神經(jīng)酸含量的方法。所表述的神經(jīng)酸含量是一個(gè)相對(duì)值,并非神經(jīng)酸的絕對(duì)含量。當(dāng)神經(jīng)酸酯化不完全時(shí),僅有一部分神經(jīng)酸成為酯化物能被測(cè)出來,而沒有酯化的神經(jīng)酸并不能被測(cè)到,因而結(jié)果會(huì)偏低。本研究開發(fā)了一種能直接測(cè)定蒜頭果油中神經(jīng)酸含量的方法,首次測(cè)定蒜頭果油中神經(jīng)酸的絕對(duì)含量,為蒜頭果油的開發(fā)利用提供質(zhì)量控制方法。

        1 儀器與試劑

        1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

        氣相色譜儀(7890A,美國(guó)Agilent),毛細(xì)管柱(ZB-Wax,廣州菲羅門科學(xué)儀器有限公司),BS210S型電子天平(德國(guó)賽多利斯),分析天平(XA205,梅特勒-托利多儀器有限公司)。

        1.2 藥品與試劑

        神經(jīng)酸對(duì)照品(99%,批號(hào):SLBC5921V,Sigma中國(guó)),蒜頭果油(廣州白云山漢方現(xiàn)代藥業(yè)有限公司),所有試劑均為分析純,水為蒸餾水。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

        2.1.1 色譜條件[13-16]色譜柱:ZB-Wax毛細(xì)管柱(30.00 m×0.25 m×0.50 μm),F(xiàn)ID溫度300℃,進(jìn)樣口溫度290℃。升溫程序:色譜柱初始溫度為170℃,保持2 min,以每分鐘升高3℃的速率升溫至240℃,保持30 min,分流比150∶1,進(jìn)樣量1 μl。

        2.1.2 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)分別精密吸取神經(jīng)酸對(duì)照品溶液和供試品溶液各1 μl注入氣相色譜儀,測(cè)定,色譜圖見圖1。神經(jīng)酸的保留時(shí)間約為31 min,與其他組分離良好。

        2.2 對(duì)照品溶液的制備

        精密稱取神經(jīng)酸對(duì)照品適量,加三氯甲烷制成每毫升含神經(jīng)酸6.0900 mg的溶液,即得。

        2.3 供試品溶液的制備

        取蒜頭果油1 g,精密稱定,置25 ml容量瓶中,加三氯甲烷溶解,并定溶至刻度,搖勻,加0.3 g無水硫酸鈉干燥除去水分,濾過,取續(xù)濾液,即得。

        2.4 方法學(xué)考察

        2.4.1 線性關(guān)系考察精密吸取含量為6.0900 mg/ml神經(jīng)酸對(duì)照品溶液適量,加三氯甲烷稀釋成濃度為0.3045、0.6090、1.2180、2.4360、4.8720、6.0900 mg/ml的溶液,分別精密吸取1 μl進(jìn)樣。回歸方程:A=939.27C+113.22(r=0.9992),結(jié)果表明神經(jīng)酸在0.3045~6.0900 mg/ml范圍,與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系(表1、圖2)。

        表1 神經(jīng)酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

        圖2 神經(jīng)酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

        2.4.2 精密度試驗(yàn)取濃度為1.827 mg/ml的神經(jīng)酸對(duì)照品溶液,進(jìn)樣6次,1 μl/次,記錄峰面積分別為:1763.32837、1714.16760、1724.13647、1713.75305、1720.95215、1720.95215、1693.76733,平均峰面積值為1721.68416,RSD=1.33%,表明本測(cè)定法精密度良好。

        2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液,分別在0、4、6、8、12、16 h進(jìn)樣1 μl測(cè)定,記錄峰面積分別為:2299.20874、2335.68848、2394.12793、2387.74487、2315.20898、2299.20874,平均峰面積值為2329.90714,RSD=2.39%(n=6),表明供試品溶液中神經(jīng)酸在16 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

        2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)取同批供試品6份,精密稱定,按4項(xiàng)下方法制備,進(jìn)樣1 μl測(cè)定,測(cè)得神經(jīng)酸含量5.13%,RSD=2.67%(n=6),表明本法具有良好的重復(fù)性(表2)。

        表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

        2.4.5 準(zhǔn)確度試驗(yàn)采用加樣回收法,取已知神經(jīng)酸含量為5.13%的蒜頭果油,精密稱取6份,每份0.5 g,分別置于6個(gè)25 ml容量瓶中,精密加入含神經(jīng)酸對(duì)照品25.40 mg/ml的對(duì)照品溶液1 ml,按4項(xiàng)方法制備,進(jìn)樣1 μl測(cè)定,結(jié)果見表3。

        2.5 樣品測(cè)定

        取10批蒜頭果油,按4項(xiàng)下方法制備,分別精密吸取1 μl注入氣相色譜儀,測(cè)定樣品中神經(jīng)酸的含量,結(jié)果見表4。

        表4 蒜頭果油中神經(jīng)酸的含量

        3 討論

        在開展本研究前,筆者曾將蒜頭果油甲酯化,以神經(jīng)酸甲酯為對(duì)照品,測(cè)定神經(jīng)酸甲酯的含量,但發(fā)現(xiàn)蒜頭果油中仍有一部分神經(jīng)酸未被甲酯化。甲酯化反應(yīng)過程復(fù)雜,影響甲酯化反應(yīng)的因素很多,包括反應(yīng)溫度和時(shí)間、催化劑、樣品的濃度和水分等。甲酯化反應(yīng)通常只應(yīng)用于脂肪酸的組成分析(定性分析),用于定量分析難以準(zhǔn)確控制。

        本實(shí)驗(yàn)以神經(jīng)酸為對(duì)照品、氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定蒜頭果油中神經(jīng)酸的含量,方法穩(wěn)定性好、重復(fù)性好,精密度、回收率都較滿意,能有效控制蒜頭果油的質(zhì)量。

        樣品中若既有游離神經(jīng)酸,又有結(jié)合型神經(jīng)酸,仍然可以用本研究方法測(cè)定神經(jīng)酸含量。處理樣品時(shí),首先將樣品進(jìn)行皂化,即把結(jié)合型神經(jīng)酸與氫氧化鈉或氫氧化鉀的醇溶液進(jìn)行反應(yīng),形成鈉鹽或鉀鹽,再用鹽酸或硫酸酸化,使析出游離神經(jīng)酸,然后按供試品溶液制備方法操作即可。皂化是否完全,可以通過檢驗(yàn)析出的游離酸酸值來判斷,當(dāng)酸值不再增高,說明游離酸析出不再增加,皂化已經(jīng)完全。

        [參考文獻(xiàn)]

        [1]劉釗權(quán).蒜頭果的生長(zhǎng)和利用[J].西南林學(xué)院學(xué)報(bào),1981, 1(1):61-68.

        [2]黃開響,賴家業(yè),石海明,等.我國(guó)特有單種屬植物蒜頭果的保護(hù)與利用研究狀況[J].廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué),2008, 27(6):76-80.

        [3]侯鏡德,陳至善.神經(jīng)酸與腦健康[M].北京:中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社,2006.

        [4]劉琳,楊東福,嚴(yán)勝驕,等.神經(jīng)酸研究進(jìn)展[J].云南化工,2008,35(4):39-43.

        [5]王熙才,左曙光,邱宗海,等.艾舍爾軟膠囊增強(qiáng)小鼠免疫力的實(shí)驗(yàn)研究[J].昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,(6):71-75.

        [6]王建民,黃偉素,馮鳳琴,等.神經(jīng)酸在嬰幼兒母乳化配方奶粉中的應(yīng)用[J].中國(guó)乳品工業(yè),2003,31(2):27-29.

        [7]王性炎,樊金栓,王姝清,等.中國(guó)含神經(jīng)酸植物開發(fā)利用研究[J].中國(guó)油脂,2006,31(3):69-71.

        [8]郝旭亞,李偉光,劉雄民,等.氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定神經(jīng)酸[J].應(yīng)用化工,2011,40(3):545-549.

        [9]郝旭亞.蒜頭果油中神經(jīng)酸的分離提純研究[D].南寧:廣西大學(xué),2011.

        [10]周永紅,李偉光,易封萍,等.氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定蒜頭果油中的脂肪酸[J].色譜,2001,19(2):147-148.

        [11]熊德元,劉雄民,李偉光,等.結(jié)晶法分離蒜頭果油中神經(jīng)酸溶劑的選擇研究[J].廣西大學(xué)學(xué)報(bào),2004,29(3):85-88.

        [12]周永紅,劉雄民,王立升.不同產(chǎn)地蒜頭果中脂肪酸的GC-MS分析[J].廣西大學(xué)學(xué)報(bào),2002,27(4):298-300.

        [13]李春,黃警.寒痹軟膏中樟腦、冰片和薄荷腦含量的測(cè)定[J].海峽藥學(xué),2013,25(11):90-95.

        [14]王仲,張長(zhǎng)弓,付琴琴,等.氣相色譜法測(cè)定搏心通原料藥中亞油酸含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2009,28(7):918-920.

        [15]周靜,劉垣升.氣相色譜法測(cè)定女貞子中棄墩果酸和熊果酸的含量[J].中國(guó)新藥與臨床雜志,2003,22(10):596-598.

        [16]張琪,張繼龍,王會(huì)剛,等.氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定生物柴油中的酯類組分[J].現(xiàn)代化工,2013,33(8):134-138.

        (收稿日期:2014-03-31本文編輯:李亞聰)

        [作者簡(jiǎn)介] 羅愛勤(1980-),女,制藥高級(jí)工程師,執(zhí)業(yè)藥師,主要從事中藥新藥和保健食品研發(fā)工作

        2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)取同批供試品6份,精密稱定,按4項(xiàng)下方法制備,進(jìn)樣1 μl測(cè)定,測(cè)得神經(jīng)酸含量5.13%,RSD=2.67%(n=6),表明本法具有良好的重復(fù)性(表2)。

        表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

        2.4.5 準(zhǔn)確度試驗(yàn)采用加樣回收法,取已知神經(jīng)酸含量為5.13%的蒜頭果油,精密稱取6份,每份0.5 g,分別置于6個(gè)25 ml容量瓶中,精密加入含神經(jīng)酸對(duì)照品25.40 mg/ml的對(duì)照品溶液1 ml,按4項(xiàng)方法制備,進(jìn)樣1 μl測(cè)定,結(jié)果見表3。

        2.5 樣品測(cè)定

        取10批蒜頭果油,按4項(xiàng)下方法制備,分別精密吸取1 μl注入氣相色譜儀,測(cè)定樣品中神經(jīng)酸的含量,結(jié)果見表4。

        表4 蒜頭果油中神經(jīng)酸的含量

        3 討論

        在開展本研究前,筆者曾將蒜頭果油甲酯化,以神經(jīng)酸甲酯為對(duì)照品,測(cè)定神經(jīng)酸甲酯的含量,但發(fā)現(xiàn)蒜頭果油中仍有一部分神經(jīng)酸未被甲酯化。甲酯化反應(yīng)過程復(fù)雜,影響甲酯化反應(yīng)的因素很多,包括反應(yīng)溫度和時(shí)間、催化劑、樣品的濃度和水分等。甲酯化反應(yīng)通常只應(yīng)用于脂肪酸的組成分析(定性分析),用于定量分析難以準(zhǔn)確控制。

        本實(shí)驗(yàn)以神經(jīng)酸為對(duì)照品、氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定蒜頭果油中神經(jīng)酸的含量,方法穩(wěn)定性好、重復(fù)性好,精密度、回收率都較滿意,能有效控制蒜頭果油的質(zhì)量。

        樣品中若既有游離神經(jīng)酸,又有結(jié)合型神經(jīng)酸,仍然可以用本研究方法測(cè)定神經(jīng)酸含量。處理樣品時(shí),首先將樣品進(jìn)行皂化,即把結(jié)合型神經(jīng)酸與氫氧化鈉或氫氧化鉀的醇溶液進(jìn)行反應(yīng),形成鈉鹽或鉀鹽,再用鹽酸或硫酸酸化,使析出游離神經(jīng)酸,然后按供試品溶液制備方法操作即可。皂化是否完全,可以通過檢驗(yàn)析出的游離酸酸值來判斷,當(dāng)酸值不再增高,說明游離酸析出不再增加,皂化已經(jīng)完全。

        [參考文獻(xiàn)]

        [1]劉釗權(quán).蒜頭果的生長(zhǎng)和利用[J].西南林學(xué)院學(xué)報(bào),1981, 1(1):61-68.

        [2]黃開響,賴家業(yè),石海明,等.我國(guó)特有單種屬植物蒜頭果的保護(hù)與利用研究狀況[J].廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué),2008, 27(6):76-80.

        [3]侯鏡德,陳至善.神經(jīng)酸與腦健康[M].北京:中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社,2006.

        [4]劉琳,楊東福,嚴(yán)勝驕,等.神經(jīng)酸研究進(jìn)展[J].云南化工,2008,35(4):39-43.

        [5]王熙才,左曙光,邱宗海,等.艾舍爾軟膠囊增強(qiáng)小鼠免疫力的實(shí)驗(yàn)研究[J].昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,(6):71-75.

        [6]王建民,黃偉素,馮鳳琴,等.神經(jīng)酸在嬰幼兒母乳化配方奶粉中的應(yīng)用[J].中國(guó)乳品工業(yè),2003,31(2):27-29.

        [7]王性炎,樊金栓,王姝清,等.中國(guó)含神經(jīng)酸植物開發(fā)利用研究[J].中國(guó)油脂,2006,31(3):69-71.

        [8]郝旭亞,李偉光,劉雄民,等.氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定神經(jīng)酸[J].應(yīng)用化工,2011,40(3):545-549.

        [9]郝旭亞.蒜頭果油中神經(jīng)酸的分離提純研究[D].南寧:廣西大學(xué),2011.

        [10]周永紅,李偉光,易封萍,等.氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定蒜頭果油中的脂肪酸[J].色譜,2001,19(2):147-148.

        [11]熊德元,劉雄民,李偉光,等.結(jié)晶法分離蒜頭果油中神經(jīng)酸溶劑的選擇研究[J].廣西大學(xué)學(xué)報(bào),2004,29(3):85-88.

        [12]周永紅,劉雄民,王立升.不同產(chǎn)地蒜頭果中脂肪酸的GC-MS分析[J].廣西大學(xué)學(xué)報(bào),2002,27(4):298-300.

        [13]李春,黃警.寒痹軟膏中樟腦、冰片和薄荷腦含量的測(cè)定[J].海峽藥學(xué),2013,25(11):90-95.

        [14]王仲,張長(zhǎng)弓,付琴琴,等.氣相色譜法測(cè)定搏心通原料藥中亞油酸含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2009,28(7):918-920.

        [15]周靜,劉垣升.氣相色譜法測(cè)定女貞子中棄墩果酸和熊果酸的含量[J].中國(guó)新藥與臨床雜志,2003,22(10):596-598.

        [16]張琪,張繼龍,王會(huì)剛,等.氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定生物柴油中的酯類組分[J].現(xiàn)代化工,2013,33(8):134-138.

        (收稿日期:2014-03-31本文編輯:李亞聰)

        [作者簡(jiǎn)介] 羅愛勤(1980-),女,制藥高級(jí)工程師,執(zhí)業(yè)藥師,主要從事中藥新藥和保健食品研發(fā)工作

        2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)取同批供試品6份,精密稱定,按4項(xiàng)下方法制備,進(jìn)樣1 μl測(cè)定,測(cè)得神經(jīng)酸含量5.13%,RSD=2.67%(n=6),表明本法具有良好的重復(fù)性(表2)。

        表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

        2.4.5 準(zhǔn)確度試驗(yàn)采用加樣回收法,取已知神經(jīng)酸含量為5.13%的蒜頭果油,精密稱取6份,每份0.5 g,分別置于6個(gè)25 ml容量瓶中,精密加入含神經(jīng)酸對(duì)照品25.40 mg/ml的對(duì)照品溶液1 ml,按4項(xiàng)方法制備,進(jìn)樣1 μl測(cè)定,結(jié)果見表3。

        2.5 樣品測(cè)定

        取10批蒜頭果油,按4項(xiàng)下方法制備,分別精密吸取1 μl注入氣相色譜儀,測(cè)定樣品中神經(jīng)酸的含量,結(jié)果見表4。

        表4 蒜頭果油中神經(jīng)酸的含量

        3 討論

        在開展本研究前,筆者曾將蒜頭果油甲酯化,以神經(jīng)酸甲酯為對(duì)照品,測(cè)定神經(jīng)酸甲酯的含量,但發(fā)現(xiàn)蒜頭果油中仍有一部分神經(jīng)酸未被甲酯化。甲酯化反應(yīng)過程復(fù)雜,影響甲酯化反應(yīng)的因素很多,包括反應(yīng)溫度和時(shí)間、催化劑、樣品的濃度和水分等。甲酯化反應(yīng)通常只應(yīng)用于脂肪酸的組成分析(定性分析),用于定量分析難以準(zhǔn)確控制。

        本實(shí)驗(yàn)以神經(jīng)酸為對(duì)照品、氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定蒜頭果油中神經(jīng)酸的含量,方法穩(wěn)定性好、重復(fù)性好,精密度、回收率都較滿意,能有效控制蒜頭果油的質(zhì)量。

        樣品中若既有游離神經(jīng)酸,又有結(jié)合型神經(jīng)酸,仍然可以用本研究方法測(cè)定神經(jīng)酸含量。處理樣品時(shí),首先將樣品進(jìn)行皂化,即把結(jié)合型神經(jīng)酸與氫氧化鈉或氫氧化鉀的醇溶液進(jìn)行反應(yīng),形成鈉鹽或鉀鹽,再用鹽酸或硫酸酸化,使析出游離神經(jīng)酸,然后按供試品溶液制備方法操作即可。皂化是否完全,可以通過檢驗(yàn)析出的游離酸酸值來判斷,當(dāng)酸值不再增高,說明游離酸析出不再增加,皂化已經(jīng)完全。

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        (收稿日期:2014-03-31本文編輯:李亞聰)

        [作者簡(jiǎn)介] 羅愛勤(1980-),女,制藥高級(jí)工程師,執(zhí)業(yè)藥師,主要從事中藥新藥和保健食品研發(fā)工作

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