黎淑芳，陸海峰，鄧敏，陳海波，鄧文正

（1.右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科，廣西 百色 533000 E－mail：bslishufang＠126.com；2.右江民族醫(yī)學(xué)院化學(xué)教研室，廣西 百色 533000；3.廣西梧州市紅十字會醫(yī)院口腔科，廣西 梧州 543002）

茶是世界三大無酒精飲料之一，含有氟及Ca、Zn、Cu、Al、Fe、Hg、Mn、Ni等多種金屬離子。茶具有防齲作用，目前認為茶中防齲的有效成分主要是氟和茶多酚。研究發(fā)現(xiàn)，氟離子濃度較低時，氟離子與羥磷灰石發(fā)生置換反應(yīng)，形成氟磷灰石，增強其抗酸性［1］。在過往的研究中，茶葉中茶多酚的防齲作用有較多相關(guān)報道［2－3］，關(guān)于茶葉對牙釉質(zhì)的抗酸作用報道較少。本研究擬通過茶浸出液浸泡牙釉質(zhì)塊后進行脫礦實驗，觀察茶浸出液對牙釉質(zhì)抗酸性的效果，為進一步分析茶防齲機制提供實驗依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 茶浸出液的制備及氟含量的測定 選取廣西凌云白毫茶（綠茶，一級凌螺春），按照人們飲茶習(xí)慣，取經(jīng)80℃烘4h的茶葉1g，加入100ml 90℃的蒸餾水于90℃恒溫水浴中保溫10 min，冷卻后過濾即得茶浸出液。采用氟離子選擇電極法測定氟含量，氟離子濃度為1.5mg／L。

1.2 牙釉質(zhì)標(biāo)本的選擇和制備 選擇新鮮拔除的牛切牙，分離冠根，去除根部及軟組織，用氧化鋁糊劑除去表面有機污染物，冠部超聲清洗，經(jīng)顯微鏡下觀察無裂痕、缺隙。用高速硬組織切割機將牙冠切成長6mm、寬6mm、厚2mm大小的釉質(zhì)塊，頰面釉質(zhì)留4mm×4mm試驗開窗區(qū)，其余部分涂防酸指甲油兩遍，待防酸指甲油干燥后，置于去離子水中，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 氟化物的配制 NaF分析純加蒸餾水配制與茶浸出液相同濃度的氟化鈉溶液（1.5mg／L）。

1.4 脫礦液的制備［4］2.2mmo l／L CaCl2，2.2mmol／L NaH2PO4，0.05mmol／L CH3CHOOH，用 NaOH 校正，pH＝4.0。

1.5 實驗分組及處理 將預(yù)備好的45個牙釉質(zhì)塊隨機分為3組，每組15個牙塊。①茶浸出液組；②濃度為1.5mg／L的氟化鈉溶液；③對照組：去離子水。將分組的牙塊分別浸泡于10 ml的茶浸出液、氟化鈉溶液及去離子水中。浸泡是間斷性的，每浸泡5min，取出1min，再浸泡5min。浸泡完成10次后，用蒸餾水清洗5次。將茶浸出液、氟化鈉及對照組3組釉質(zhì)塊標(biāo)本分別置于人工脫礦液10ml中浸泡72h，取培養(yǎng)液1ml，置于Roche生化分析儀，應(yīng)用鄰甲酚絡(luò)合酮法測定鈣的濃度，磷鉬酸法測定磷的濃度。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 15.0軟件包中的單因素方差分析及SNK檢驗對脫礦液中鈣、磷溶出值進行分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 脫礦液中牙釉質(zhì)塊鈣、磷的溶出情況 經(jīng)脫礦液浸泡的牙釉質(zhì)開窗區(qū)，肉眼可見白色區(qū)域。脫礦液中茶浸出液組鈣、磷溶出濃度最小，對照組鈣、磷溶出濃度最大，3組脫礦液鈣、磷溶出量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果見表1。

表1 脫礦液中牙釉質(zhì)塊鈣、磷的溶出情況（，mmol／L）

表1 脫礦液中牙釉質(zhì)塊鈣、磷的溶出情況（，mmol／L）

注：三組間鈣含量比較，F(xiàn) ＝13.45，P ＜0.05；磷溶出量比較，F(xiàn) ＝19.92，P ＜0.05，三組間鈣、磷溶出量不全相等，再經(jīng)SNK行兩兩檢驗得各組間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）

組別 n 釉質(zhì)鈣溶出量 釉質(zhì)磷溶出量茶浸出液組 151.384±0.126 1.304±0.174氟化鈉溶液組 151.521±0.114 1.498±0.163對照組 151.708±0.2711.725±0.181

3 討論

茶作為防齲藥物，氟為主要的有效成分之一。但由于產(chǎn)地和采摘時間不同，氟的含量會有所不同。本實驗對所選用的廣西凌云白毫茶（綠茶，一級凌螺春）進行氟含量的測定，測得氟離子濃度1.5mg／L。然而，茶葉中成分復(fù)雜，除黃酮類抗氧化物質(zhì)、茶多酚、氟等主要成分外還有鞣酸及Ca、Zn、Cu等多種成分。本實驗通過對茶浸出液與單一氟化物對牙釉質(zhì)抗酸性的比對，以初步探討茶葉中其他成分與氟在對牙釉質(zhì)抗酸蝕過程中是否存在協(xié)同關(guān)系。

本實驗結(jié)果顯示，茶浸出液組及氟化物組牙釉質(zhì)鈣磷溶出量均比去離子水對照組少（P＜0.05），該結(jié)果與氟離子的存在有關(guān)。牙釉質(zhì)的主要成分是羥磷灰石，氟離子可以與羥磷灰石發(fā)生置換反應(yīng)，形成氟磷灰石，沉淀于釉質(zhì)表層和表層下，增加釉質(zhì)的硬度，阻止礦物離子的流失，減輕釉質(zhì)中鈣、磷的溶出。當(dāng)酸攻擊釉質(zhì)時，釉質(zhì)表面沉積的氟化鈣顆粒能夠中和酸，緩沖釉質(zhì)界面pH，成為酸攻擊時的暫時屏障［5］，從而增加釉質(zhì)對酸的抵抗力，抑制釉質(zhì)脫礦，降低脫礦的速度［6］。

實驗中發(fā)現(xiàn)含氟量相同的茶浸出液與氟化物對抑制鈣磷溶出差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），茶浸出液對牙釉質(zhì)的抗酸性較強。推測這一結(jié)果與茶葉中的其他成分有關(guān)。有研究指出，鞣酸可與蛋白和Ca2＋、Zn2＋等離子反應(yīng)形成不可溶性復(fù)合物而影響其生物活性［7］，與釉質(zhì)有機質(zhì)和鈣結(jié)合形成復(fù)合物，阻塞釉質(zhì)的超微孔隙，從而降低釉質(zhì)的通透性［8］。茶浸出液對脫礦實驗過程中Ca2＋、PO3－4的溶出顯著抑制作用可能與茶葉中鞣酸凝固釉質(zhì)蛋白和抑制蛋白分解的作用有關(guān)。另一方面，茶葉中還含有鈣、鐵等微量元素，這些元素均具有參與牙齒再礦化的能力。最近研究發(fā)現(xiàn)鐵離子能干擾酸性物質(zhì)對牙釉質(zhì)的腐蝕作用，鐵和氟能影響碳酸飲料對牙釉質(zhì)粉末的溶出度［9］。釉質(zhì)脫礦及再礦化是在一個組成與結(jié)構(gòu)復(fù)雜且不斷變化的環(huán)境中進行的，其過程不是單純的鈣鹽溶解及沉積過程，但Ca2＋、和PO3－4的溶出與晶體的溶解、齲損的形成有直接關(guān)系。本實驗發(fā)現(xiàn)茶浸液能夠顯著性抑制脫礦過程中Ca2＋、和PO3－4的溶出，表明了茶葉對齲病的進展具有抑制作用。但由于茶葉中含有多種成分，其活性成分的追蹤分析及其對牙釉質(zhì)抗酸性的影響有待進一步研究。

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