何榮芬

(安徽省淮北市人民醫(yī)院，安徽 淮北 235000)

白芷維生素E 乳膏是淮北市人民醫(yī)院的自制制劑，主要成分為白芷、維生素E。維生素E 為自由基清除劑，可使細(xì)胞的脂質(zhì)免受自由基氧化的損害，從而延緩衰老。白芷具有美白除斑、潤膚、控油、延緩皮膚衰老的作用。經(jīng)臨床驗(yàn)證，白芷維生素E 乳膏療效好，使用方便，無刺激性，無不良反應(yīng)。筆者采用高效液相色譜法測定白芷維生素E 乳膏中維生素E 的含量，方法操作簡便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、靈敏度高，適用于制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Waters e2695 HPLC 色譜系統(tǒng);Empower Waters 工作站;Waters 2489 UV/visible Detector 檢測器;JAC-300 型超聲波處理器(濟(jì)寧奧波超聲電氣有限公司);Mettler AE-240 電子分析天平(0.1 mg;0.01 mg)。維生素E(北大國際醫(yī)院集團(tuán)西南合成制藥有限公司);白芷維生素E 乳膏(淮北市人民醫(yī)院的自制制劑，批號(hào)為20120928，20121025，20121030);甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方與制備

處方:白芷細(xì)粉100 g，維生素E1g，硬脂酸89.7 g，單硬脂酸甘油酯52.8 g，白凡士林53 g，液體石蠟157.5 g，甘油106 g，三乙醇胺2 mL，十二烷基硫酸鈉2 g，蒸餾水加至1 000 g。

制備工藝:取硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、白凡士林、液體石蠟，置水浴上加熱熔化，濾過，保溫80 ℃左右。另取十二烷基硫酸鈉，甘油加入適量蒸餾水加熱，控制水相溫度在80 ℃左右，在不斷攪拌下，將油相細(xì)流加入水相中，加三乙醇胺乳化，接近室溫時(shí)，加入維生素E，過120 目篩的白芷細(xì)粉，攪勻，即得。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Platisil ODS 柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇;流速:1.0 mL/min;柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:20 μL;檢測波長284 nm。在此條件下，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2.2 溶液制備

精密稱取維生素E 對(duì)照品0.104 5 g，置50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對(duì)照品貯備液。取本品2 g，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加甲醇20 mL，80 ℃水浴加熱振搖，使維生素E 充分溶解，超聲提取5 min，放冷至室溫，用甲醇溶解至刻度，置冰浴冷卻2 h，取出后迅速過濾，取續(xù)濾液放冷至室溫，用0.45 μm 濾膜過濾，即得供試品溶液。取處方中除維生素E 外的其他組分，依法制備陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn):按照樣品處方，制備缺少維生素E 的模擬樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液，精密量取20 μL 注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果在與供試品溶液色譜主峰保留時(shí)間相同處無色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其他成分對(duì)含量測定無干擾(圖1)。

線性關(guān)系考察:分別精密量取對(duì)照品貯備液1.0，2.0，3.0，5.0，8.0，10.0 mL，置25 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，按擬訂的色譜條件，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(μg)進(jìn)行線性回歸分析，得回歸方程Y=8 345.923 1 X+4 645.310 4，r=0.999 98(n=6)。結(jié)果表明，維生素E 進(jìn)樣質(zhì)量濃度在83.6 ～836 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5 次。結(jié)果峰面積為1952000，1953000，1955000，1956000，1958000，RSD=0.12%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取樣品測定項(xiàng)下的同一供試品溶液(批號(hào)為20121025)，于0，2，4，6，12 h 時(shí)分別進(jìn)樣測試，記錄色譜圖。結(jié)果維生素E 峰面積的RSD 為0.13%(n =5)，表明供試品溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號(hào)為20121025)，依法制備供試品溶液并測定，計(jì)算含量。結(jié)果維生素E 平均含量為標(biāo)示量的108.3%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)為20121025)適量，置50 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，共9 份，分成3 組，每組分別精密加入對(duì)照品貯備液0.8，1.0，1.2 mL，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm 濾膜過濾，精密量取20 μL 注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定。結(jié)果見表1。

表1 維生素E 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果( n=9)

2.2.4 樣品含量測定

取樣品3 批，精密稱取適量(約相當(dāng)于維生素E 20 mg)，置50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm 濾膜過濾，精密量取20 μL 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，用回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

3 討論

維生素E 甲醇溶液在200 ～400 nm 波長內(nèi)掃描，結(jié)果在207 nm 和284 nm 波長出有兩個(gè)吸收峰，因在207 nm 波長處維生素E 的吸收系數(shù)太大，故選擇284 nm 作為測定波長，對(duì)維生素E主要成分純度分析，結(jié)果表明284 nm 為單一峰。

維生素E 乳膏多采用氣相色譜法[1]、高效液相色譜法[2]、紫外分光光度法測定含量，從方法學(xué)考察可見，3 種方法都可用于白芷維生素E 乳膏中維生素E 含量的測定。紫外分光光度法操作也較簡便，分析成本不高，但選擇性較差，在操作中若不慎有雜質(zhì)干擾，則會(huì)對(duì)結(jié)果造成較大影響，這與紫外檢測的加合性有關(guān)。高效液相色譜法的精密度與準(zhǔn)確度比滴定法略差，操作成本較高，但高效液相色譜法的靈敏度較高，同時(shí)由于其高分離能力，故不易受雜質(zhì)的干擾。

表2 樣品含量測定結(jié)果

[1] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典(二部) [M]. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:907 -908.

[2] 彭 云，吳美珠，劉 燕，等.HPLC-法測定復(fù)發(fā)維生素E 乳膏中維生素E 的含量[J]. 今日藥學(xué)，2011，6(21):340 -341.

[3] 黃夕野.HPLC-法測定復(fù)發(fā)蘆薈乳膏中維生素E 的含量[J]. 中南藥學(xué)，2007，10(5):467 -468.

[4] 沈 鴻，方子正. 復(fù)發(fā)維生素E 乳膏的制備及質(zhì)量控制[J]. 中國藥業(yè)，2007，16(17):29.