唐宇+賈洪鋒+孫俊秀+鐘志惠+邵繼榮

摘要：采用HPLC法對金蕎麥（Fagopyrum cymosum）的有效成分進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，金蕎麥含有蘆丁、槲皮素和表兒茶素等有效成分，但不同器官的含量差異較大。蘆丁含量以花、葉較高，種子居中，莖和根狀莖很低。槲皮素含量則以種子最高，花其次，葉、莖和根狀莖較低；表兒茶素含量以根狀莖最高，花和種子的含量甚微，莖和葉中未見有表兒茶素成分。金蕎麥葉中的蘆丁含量以及根狀莖中的表兒茶素含量在開花結(jié)實(shí)期達(dá)最高峰，以后逐漸降低。

關(guān)鍵詞：金蕎麥（Fagopyrum cymosum）；蘆??；槲皮素；表兒茶素；HPLC

中圖分類號：TS201.2；O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）03-0672-04

金蕎麥（Fagopyrum cymosum）屬蓼科（Polygonaceae）蕎麥屬（Fagopyrum Mill.），為多年生野生蕎麥種之一，廣泛分布于中國南部各省，是一種營養(yǎng)豐富并具有重要藥用價值的資源植物。金蕎麥的根狀莖作為重要的傳統(tǒng)中藥材，主治肺膿瘍、痢疾、麻疹肺炎及風(fēng)濕痛等病癥?，F(xiàn)代藥理研究表明，金蕎麥的根狀莖活性提取物（植物次生代謝產(chǎn)物）具有顯著的抗癌、抑制腫瘤細(xì)胞肺侵襲和轉(zhuǎn)移，以及消炎抗菌等重要作用[1-4]。近年來，許多學(xué)者對其根狀莖的主要有效成分進(jìn)行了研究，表明其主要成分為表兒茶素一類的原花色素的縮合性單寧化合物[5-8]。為進(jìn)一步開發(fā)野生金蕎麥，對金蕎麥的全株有效成分及其不同生育期含量的動態(tài)變化進(jìn)行研究，以期為金蕎麥藥材的質(zhì)量控制以及合理利用其資源提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

2012年5月23日將采自四川省涼山州普格縣五道箐鄉(xiāng)的野生金蕎麥種子播種于成都市龍泉驛區(qū)試驗(yàn)地，播種10 d后取第一次樣，以后每隔30 d取樣，按植株不同器官置于80 ℃烘箱恒溫干燥后，用粉碎機(jī)粉碎后測定其有效成分。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 試劑 表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品鑒定所，純度98%）；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品鑒定所，純度90.5%）；槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品（中國食品藥品檢定研究院，純度96.5%）。甲醇、乙腈（色譜級），磷酸（分析級），均購自國藥集團(tuán)上海試劑公司。

1.2.2 儀器 普析通用L9型高效液相色譜儀，配有可變波長紫外檢測器和Pgrandsil-STC-C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；AUW220D電子天平（日本島津公司），KQ-5200E超聲波清洗器（常州諾基儀器有限公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 表兒茶素的測定 表兒茶素的測定參照何美珊等[9]的方法。精密稱取經(jīng)研細(xì)的金蕎麥樣品1.000 0 g，放入100 mL三角瓶中，加入50 mL 50%乙醇溶液，靜置過夜，回流提取1 h，待冷卻后過濾，定容至50 mL，待測。

色譜分析條件：色譜柱，Pgrandsil-STC-C18 （150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相，乙腈-0.01 mol/L磷酸溶液（體積比為8∶92）；流速，1.0 mL/min；柱溫，35.0 ℃；檢測波長，280 nm；進(jìn)樣量，20 μL。

1.3.2 蘆丁和槲皮素的測定 蘆丁和槲皮素的測定參照張麗靜等[10]和方玲芬[11]的方法。精密稱取經(jīng)研細(xì)的金蕎麥樣品1.300 0 g，放入100 mL三角瓶中，加入40 mL甲醇，用保鮮膜封口，超聲提取60 min，過濾后定容至50 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后進(jìn)行分析。色譜分析條件：色譜柱，Pgrandsil-STC-C18 （150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相，甲醇-0.4%磷酸溶液（體積比為1∶1）；流速，1.0 mL/min；柱溫，30.0 ℃；檢測波長，360 nm；進(jìn)樣量，10 μL。

1.3.3 表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取0.020 0 g表兒茶素標(biāo)樣，用乙腈-水（1∶9，V/V）定容至50 mL，作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液（表兒茶素400 μg/mL）。以標(biāo)準(zhǔn)貯備液為母液，以乙腈-水（1∶9，V/V）為溶劑，配制表兒茶素梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為5、10、20、40、80、120、160 μg/mL，以峰面積為縱坐標(biāo)，對照品濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得其回歸方程為y=6 071.8x-17 9950，表兒茶素在此范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 6。

1.3.4 蘆丁和槲皮素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取0.005 3 g蘆丁、0.005 1 g槲皮素，用甲醇定容至50 mL，作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液（蘆丁106 μg/mL，槲皮素102 μg/mL）。以標(biāo)準(zhǔn)貯備液為母液，以甲醇為溶劑，配制蘆丁和槲皮素混合梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液，蘆丁濃度分別為5.3、10.6、21.2、31.8、42.4、53.0 μg/mL，槲皮素濃度分別為5.1、10.2、20.4、30.6、40.8、51.0 μg/mL），以峰面積為縱坐標(biāo)，對照品濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

蘆丁的回歸方程為y=74 374x-184 393，蘆丁在5.3～53.0 μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為 0.999 7；槲皮素的回歸方程為y=128 445x-339 760，槲皮素在 5.1～51.0 μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為 0.999 2。

2 結(jié)果與分析

2.1 金蕎麥不同器官中表兒茶素含量

表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見圖1。金蕎麥開花結(jié)實(shí)期（播種后100 d，下同）植株各器官中表兒茶素的測定結(jié)果見圖2。分析結(jié)果見圖3。從結(jié)果可看出，在金蕎麥植株中的表兒茶素含量主要集中在根狀莖部分，表兒茶素的含量達(dá)0.88 mg/g，花及種子部分含量很低，葉和莖中則完全沒有。

2.2 金蕎麥不同器官中的蘆丁含量

蘆丁的HPLC測定結(jié)果見圖4、圖5。分析結(jié)果見圖6。測定結(jié)果表明，金蕎麥全植株中均含有蘆丁成分，但器官不同，蘆丁含量差別很大。金蕎麥花中的蘆丁含量最高，達(dá)12.5 mg/g，其次為葉，蘆丁含量為9.96 mg/g，種子中的蘆丁含量不及花和葉，僅為3.18 mg/g，而莖和根狀莖蘆丁含量則非常低，不及花中含量的1/10。

2.3 金蕎麥不同器官中的槲皮素含量

槲皮素的HPLC測定結(jié)果見圖4，分析結(jié)果見圖7。從測定結(jié)果看，金蕎麥全株均含有槲皮素，但不同器官其含量有較大差別。種子中的槲皮素含量最高，為0.25 mg/g，其次是花，為0.15 mg/g，葉中的含量低于花，僅為0.12 mg/g，莖和根狀莖中的槲皮素含量最低，二者的含量均為0.10 mg/g。

2.4 金蕎麥葉中蘆丁含量的變化

金蕎麥葉中含有較高的蘆丁成分，為此我們對不同時期葉中蘆丁含量的變化進(jìn)行了考察，其結(jié)果見圖8。從圖中可看出，在金蕎麥萌發(fā)時，子葉中的蘆丁含量僅1 mg/g左右，發(fā)芽后葉中的蘆丁含量急劇增加，發(fā)芽10 d后葉中的蘆丁含量就達(dá)到了較高的濃度，隨著生育期的增加，葉中的蘆丁含量逐步增加，至開花結(jié)實(shí)期（播種100 d后）達(dá)到最大值（9.96 mg/g），此后又逐漸下降。

2.5 金蕎麥根狀莖中表兒茶素的變化

表兒茶素主要在金蕎麥的根狀莖中。我們測定了不同時期金蕎麥根狀莖中表兒茶素的含量，結(jié)果見圖9。在金蕎麥發(fā)芽期和苗期，其根部并未形成根狀莖，因此，在根部沒有檢測到表兒茶素成分。播種后50 d，地下部分逐漸開成根狀莖，從圖9中可看出，隨著根狀莖的生長，其表兒茶素的濃度逐漸增加，至開花結(jié)實(shí)期（播種后100 d）達(dá)最大值（0.88 mg/g），其后逐漸下降，至地上部分枯萎時（播種后160 d），其表兒茶素含量僅為0.46 mg/g。

3 小結(jié)與討論

先前的研究表明，金蕎麥植株和果實(shí)中含有較高的總黃酮[12-14]，但總黃酮中有哪些成分尚不清楚。本試驗(yàn)結(jié)果表明，金蕎麥葉、莖、花、種子中除含有蘆丁、槲皮素外，在其根狀莖、種子和花等部位還含有表兒茶素成分。表兒茶素屬黃酮中的黃烷-3-醇，具有抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移、抑制腫瘤細(xì)胞增殖過程和顯著的抗氧化、清除自由基，抗致突變作用[15]。近年來人們通過對金蕎麥大量的研究，發(fā)現(xiàn)其根狀莖提取物具有抗菌、抗感染、抗癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用，其主要成分為表兒茶素[6-8]，本次試驗(yàn)也證實(shí)了這一點(diǎn)。除此之外，前人對金蕎麥化學(xué)成分研究主要是地下部分，地上部分的研究甚少。本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)金蕎麥的花及種子中也含有少量表兒茶素，值得進(jìn)一步研究。

在栽培蕎麥種中，由于苦蕎麥營養(yǎng)和藥用價值高，種子中富含蘆丁、槲皮素等黃酮成分，由此被廣泛開發(fā)制成多種保健產(chǎn)品[16]。金蕎麥屬野生蕎麥種，為多年生宿根草本植物，植株高大，生育期長，其果實(shí)較大，千粒重可達(dá)30 g左右。果實(shí)中蛋白質(zhì)、脂肪、微量元素及維生素的含量均較豐富[17]，有很高的利用價值。目前，金蕎麥主要是將其根狀莖入藥或制藥，其他部分未能很好地利用。從本研究結(jié)果看，金蕎麥全株除含有較高的蘆丁和槲皮素外，還含有苦蕎麥、甜蕎麥等栽培品種不具有的表兒茶素成分，開發(fā)利用的潛力巨大。

從金蕎麥整個生育期有效成分的變化動態(tài)來看，開花結(jié)實(shí)期是一個重要時期，在此時期中，金蕎麥地上部分的生物產(chǎn)量較大，而葉、花中的蘆丁和根狀莖中的表兒茶素累積達(dá)到最高峰。因此，若將金蕎麥作藥材采收時，無論是采收地上部分還是地下部分，可將結(jié)實(shí)期作為最佳采收期，若過早或過晚采收均會影響藥材的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)：

[1] 艾 群，王 斌，王國清.金蕎麥制劑的抑菌研究[J]. 黑龍江醫(yī)學(xué)，2002，26（9）：666.

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[17] 張 政，王轉(zhuǎn)花，林汝法，等. 金蕎麥籽粒營養(yǎng)成分分析[J]. 營養(yǎng)學(xué)報，1999，21（4）：480-482.

2.2 金蕎麥不同器官中的蘆丁含量

蘆丁的HPLC測定結(jié)果見圖4、圖5。分析結(jié)果見圖6。測定結(jié)果表明，金蕎麥全植株中均含有蘆丁成分，但器官不同，蘆丁含量差別很大。金蕎麥花中的蘆丁含量最高，達(dá)12.5 mg/g，其次為葉，蘆丁含量為9.96 mg/g，種子中的蘆丁含量不及花和葉，僅為3.18 mg/g，而莖和根狀莖蘆丁含量則非常低，不及花中含量的1/10。

2.3 金蕎麥不同器官中的槲皮素含量

槲皮素的HPLC測定結(jié)果見圖4，分析結(jié)果見圖7。從測定結(jié)果看，金蕎麥全株均含有槲皮素，但不同器官其含量有較大差別。種子中的槲皮素含量最高，為0.25 mg/g，其次是花，為0.15 mg/g，葉中的含量低于花，僅為0.12 mg/g，莖和根狀莖中的槲皮素含量最低，二者的含量均為0.10 mg/g。

2.4 金蕎麥葉中蘆丁含量的變化

金蕎麥葉中含有較高的蘆丁成分，為此我們對不同時期葉中蘆丁含量的變化進(jìn)行了考察，其結(jié)果見圖8。從圖中可看出，在金蕎麥萌發(fā)時，子葉中的蘆丁含量僅1 mg/g左右，發(fā)芽后葉中的蘆丁含量急劇增加，發(fā)芽10 d后葉中的蘆丁含量就達(dá)到了較高的濃度，隨著生育期的增加，葉中的蘆丁含量逐步增加，至開花結(jié)實(shí)期（播種100 d后）達(dá)到最大值（9.96 mg/g），此后又逐漸下降。

2.5 金蕎麥根狀莖中表兒茶素的變化

表兒茶素主要在金蕎麥的根狀莖中。我們測定了不同時期金蕎麥根狀莖中表兒茶素的含量，結(jié)果見圖9。在金蕎麥發(fā)芽期和苗期，其根部并未形成根狀莖，因此，在根部沒有檢測到表兒茶素成分。播種后50 d，地下部分逐漸開成根狀莖，從圖9中可看出，隨著根狀莖的生長，其表兒茶素的濃度逐漸增加，至開花結(jié)實(shí)期（播種后100 d）達(dá)最大值（0.88 mg/g），其后逐漸下降，至地上部分枯萎時（播種后160 d），其表兒茶素含量僅為0.46 mg/g。

3 小結(jié)與討論

先前的研究表明，金蕎麥植株和果實(shí)中含有較高的總黃酮[12-14]，但總黃酮中有哪些成分尚不清楚。本試驗(yàn)結(jié)果表明，金蕎麥葉、莖、花、種子中除含有蘆丁、槲皮素外，在其根狀莖、種子和花等部位還含有表兒茶素成分。表兒茶素屬黃酮中的黃烷-3-醇，具有抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移、抑制腫瘤細(xì)胞增殖過程和顯著的抗氧化、清除自由基，抗致突變作用[15]。近年來人們通過對金蕎麥大量的研究，發(fā)現(xiàn)其根狀莖提取物具有抗菌、抗感染、抗癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用，其主要成分為表兒茶素[6-8]，本次試驗(yàn)也證實(shí)了這一點(diǎn)。除此之外，前人對金蕎麥化學(xué)成分研究主要是地下部分，地上部分的研究甚少。本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)金蕎麥的花及種子中也含有少量表兒茶素，值得進(jìn)一步研究。

在栽培蕎麥種中，由于苦蕎麥營養(yǎng)和藥用價值高，種子中富含蘆丁、槲皮素等黃酮成分，由此被廣泛開發(fā)制成多種保健產(chǎn)品[16]。金蕎麥屬野生蕎麥種，為多年生宿根草本植物，植株高大，生育期長，其果實(shí)較大，千粒重可達(dá)30 g左右。果實(shí)中蛋白質(zhì)、脂肪、微量元素及維生素的含量均較豐富[17]，有很高的利用價值。目前，金蕎麥主要是將其根狀莖入藥或制藥，其他部分未能很好地利用。從本研究結(jié)果看，金蕎麥全株除含有較高的蘆丁和槲皮素外，還含有苦蕎麥、甜蕎麥等栽培品種不具有的表兒茶素成分，開發(fā)利用的潛力巨大。

從金蕎麥整個生育期有效成分的變化動態(tài)來看，開花結(jié)實(shí)期是一個重要時期，在此時期中，金蕎麥地上部分的生物產(chǎn)量較大，而葉、花中的蘆丁和根狀莖中的表兒茶素累積達(dá)到最高峰。因此，若將金蕎麥作藥材采收時，無論是采收地上部分還是地下部分，可將結(jié)實(shí)期作為最佳采收期，若過早或過晚采收均會影響藥材的質(zhì)量。

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[12] 唐 宇，彭德川，孫俊秀，等. 金蕎麥籽粒中總黃酮提取工藝研究[J]. 食品和發(fā)酵科技，2011，47（6）：54-57

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2.2 金蕎麥不同器官中的蘆丁含量

蘆丁的HPLC測定結(jié)果見圖4、圖5。分析結(jié)果見圖6。測定結(jié)果表明，金蕎麥全植株中均含有蘆丁成分，但器官不同，蘆丁含量差別很大。金蕎麥花中的蘆丁含量最高，達(dá)12.5 mg/g，其次為葉，蘆丁含量為9.96 mg/g，種子中的蘆丁含量不及花和葉，僅為3.18 mg/g，而莖和根狀莖蘆丁含量則非常低，不及花中含量的1/10。

2.3 金蕎麥不同器官中的槲皮素含量

槲皮素的HPLC測定結(jié)果見圖4，分析結(jié)果見圖7。從測定結(jié)果看，金蕎麥全株均含有槲皮素，但不同器官其含量有較大差別。種子中的槲皮素含量最高，為0.25 mg/g，其次是花，為0.15 mg/g，葉中的含量低于花，僅為0.12 mg/g，莖和根狀莖中的槲皮素含量最低，二者的含量均為0.10 mg/g。

2.4 金蕎麥葉中蘆丁含量的變化

金蕎麥葉中含有較高的蘆丁成分，為此我們對不同時期葉中蘆丁含量的變化進(jìn)行了考察，其結(jié)果見圖8。從圖中可看出，在金蕎麥萌發(fā)時，子葉中的蘆丁含量僅1 mg/g左右，發(fā)芽后葉中的蘆丁含量急劇增加，發(fā)芽10 d后葉中的蘆丁含量就達(dá)到了較高的濃度，隨著生育期的增加，葉中的蘆丁含量逐步增加，至開花結(jié)實(shí)期（播種100 d后）達(dá)到最大值（9.96 mg/g），此后又逐漸下降。

2.5 金蕎麥根狀莖中表兒茶素的變化

表兒茶素主要在金蕎麥的根狀莖中。我們測定了不同時期金蕎麥根狀莖中表兒茶素的含量，結(jié)果見圖9。在金蕎麥發(fā)芽期和苗期，其根部并未形成根狀莖，因此，在根部沒有檢測到表兒茶素成分。播種后50 d，地下部分逐漸開成根狀莖，從圖9中可看出，隨著根狀莖的生長，其表兒茶素的濃度逐漸增加，至開花結(jié)實(shí)期（播種后100 d）達(dá)最大值（0.88 mg/g），其后逐漸下降，至地上部分枯萎時（播種后160 d），其表兒茶素含量僅為0.46 mg/g。

3 小結(jié)與討論

先前的研究表明，金蕎麥植株和果實(shí)中含有較高的總黃酮[12-14]，但總黃酮中有哪些成分尚不清楚。本試驗(yàn)結(jié)果表明，金蕎麥葉、莖、花、種子中除含有蘆丁、槲皮素外，在其根狀莖、種子和花等部位還含有表兒茶素成分。表兒茶素屬黃酮中的黃烷-3-醇，具有抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移、抑制腫瘤細(xì)胞增殖過程和顯著的抗氧化、清除自由基，抗致突變作用[15]。近年來人們通過對金蕎麥大量的研究，發(fā)現(xiàn)其根狀莖提取物具有抗菌、抗感染、抗癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用，其主要成分為表兒茶素[6-8]，本次試驗(yàn)也證實(shí)了這一點(diǎn)。除此之外，前人對金蕎麥化學(xué)成分研究主要是地下部分，地上部分的研究甚少。本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)金蕎麥的花及種子中也含有少量表兒茶素，值得進(jìn)一步研究。

在栽培蕎麥種中，由于苦蕎麥營養(yǎng)和藥用價值高，種子中富含蘆丁、槲皮素等黃酮成分，由此被廣泛開發(fā)制成多種保健產(chǎn)品[16]。金蕎麥屬野生蕎麥種，為多年生宿根草本植物，植株高大，生育期長，其果實(shí)較大，千粒重可達(dá)30 g左右。果實(shí)中蛋白質(zhì)、脂肪、微量元素及維生素的含量均較豐富[17]，有很高的利用價值。目前，金蕎麥主要是將其根狀莖入藥或制藥，其他部分未能很好地利用。從本研究結(jié)果看，金蕎麥全株除含有較高的蘆丁和槲皮素外，還含有苦蕎麥、甜蕎麥等栽培品種不具有的表兒茶素成分，開發(fā)利用的潛力巨大。

從金蕎麥整個生育期有效成分的變化動態(tài)來看，開花結(jié)實(shí)期是一個重要時期，在此時期中，金蕎麥地上部分的生物產(chǎn)量較大，而葉、花中的蘆丁和根狀莖中的表兒茶素累積達(dá)到最高峰。因此，若將金蕎麥作藥材采收時，無論是采收地上部分還是地下部分，可將結(jié)實(shí)期作為最佳采收期，若過早或過晚采收均會影響藥材的質(zhì)量。

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