舒鵑娟等

能力驗證（proficiency testing）即利用實驗室間比對，按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則評價參加者的能力。通過能力驗證能夠評定實驗室從事特定檢測或測量的能力，識別實驗室存在的問題并啟動改進措施，提高實驗室的檢測能力等。因此，參加能力驗證活動對實驗室質(zhì)量控制有著非常重要的意義。上海市閘北區(qū)疾病預(yù)防控制中心實驗室已連續(xù)多年參加遼寧出入境檢驗檢疫局食品微生物能力驗證計劃，現(xiàn)將從中收獲的一些經(jīng)驗教訓(xùn)介紹如下，供同行參考。

1.2.2操作步驟

① 按照PTC-T028參試指導(dǎo)書的要求進行樣品水化。從冰箱取出待測樣品，待其恢復(fù)至室溫后，無菌開啟裝有樣品的西林瓶，立即加入4 mL生理鹽水進行再水化，稀釋液合計40 mL，待溶解后，吸出放入無菌瓶中，反復(fù)用余下的稀釋液清洗西林瓶內(nèi)壁，回收清洗液放入上述無菌瓶中，此溶液即是待測樣品原液，全過程20 min內(nèi)完成。將上述制備的40 mL待測原液按照標(biāo)準(zhǔn)方法進行后續(xù)操作。

② 菌落總數(shù)檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL滅菌生理鹽水混勻，制成10-1稀釋液，取10-1稀釋液1 mL加9 mL滅菌生理鹽水混勻，制成10-2稀釋液，以此類推稀釋至10-4。每稀釋1次，換1次無菌吸管。每個稀釋度樣液各取1 mL加入到2個無菌平皿中，同時做空白對照。及時用15 mL冷卻至45℃左右的平板計數(shù)瓊脂傾注平皿，搖勻，待培養(yǎng)基凝固后倒置放入培養(yǎng)箱中，36℃培養(yǎng)48 h后進行菌落計數(shù)。

③ 大腸菌群檢測。采用最可能數(shù)（most probable number，MPN）法進行大腸菌群計數(shù)。將經(jīng)水化的待測樣品按照菌落總數(shù)檢測的方法制備10-1～10-6的稀釋液。每個稀釋度接種3管LST肉湯，每管接種1 mL，36℃培養(yǎng)48 h后，產(chǎn)氣者進行復(fù)發(fā)酵試驗，接種BGLB肉湯管36℃培養(yǎng)48 h后產(chǎn)氣者計為大腸菌群陽性，記錄每個稀釋度的BGLB產(chǎn)氣管數(shù)。

④ 金葡菌檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL 7.5%NaC1肉湯制成混懸液，于36℃培養(yǎng)20 h，轉(zhuǎn)種血平板和Baird-Parker平板，于36℃培養(yǎng)24 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

⑤ 沙門菌檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL BPW制成混懸液，于36℃培養(yǎng)18 h后，分別取1 mL轉(zhuǎn)種TTB 10 mL及SC 10 mL， TTB置42℃培養(yǎng)24 h，SC置36℃培養(yǎng)24 h，分別轉(zhuǎn)種BS平板內(nèi)于36℃培養(yǎng)48 h及沙門菌屬顯色平板，于36℃培養(yǎng)24 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

⑥ 單增檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL LB1制成混懸液，于30℃培養(yǎng)24 h后，吸取0.1 mL轉(zhuǎn)種于10 mL LB2中，置30℃培養(yǎng)24 h，轉(zhuǎn)種于PALCAM平板和李斯特菌顯色平板，36℃培養(yǎng)48 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

⑦ 志賀菌檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL志賀菌增菌液制成混懸液，于41.5℃厭氧培養(yǎng)20 h后轉(zhuǎn)種XLD及MAC平板，于36℃培養(yǎng)24 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

⑧ 副溶血性弧菌檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL APW制成混懸液，于36℃培養(yǎng)16 h，轉(zhuǎn)種TCBS及弧菌顯色平板，于36℃培養(yǎng)24 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

3討論

本實驗室參加的7項能力驗證試驗反饋結(jié)果均為滿意（《食品中微生物學(xué)能力驗證計劃PTC-T028結(jié)果報告》），表明本實驗室能很好地應(yīng)用國家標(biāo)準(zhǔn)（GB 4789，現(xiàn)行有效系列）開展相關(guān)項目的檢測。本次能力驗證的定量項目中，菌落總數(shù)和大腸菌群的滿意率分別為90.5%和89.7%；定性項目中金葡菌滿意率最高，78個結(jié)果反饋僅1個為不滿意，滿意率為98.7%；副溶血性弧菌滿意率最低，56個結(jié)果反饋中，49個為滿意，滿意率為87.5%。此外，組織方將每一個項目分成不同組別，本實驗室副溶血性弧菌項目被分配到指定值為陽性組，有26個結(jié)果反饋，只有20個為滿意，滿意率為76.9%。

在參加能力驗證活動時，需要注意以下幾方面：

實驗前要仔細(xì)閱讀參試指導(dǎo)書，按照其要求對樣品進行前處理。對于定量項目來說，西林瓶中的樣品是一個不可分割的整體，應(yīng)全部溶解用于檢測，不能只取一部分進行檢測而造成結(jié)果不準(zhǔn)確。樣品打開后應(yīng)立即水化，否則會導(dǎo)致樣品吸潮溶解困難，影響準(zhǔn)確計數(shù)。在樣品稀釋過程中要充分混勻，以免影響計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。采用傾注法對樣品計數(shù)的項目，在傾注培養(yǎng)基后應(yīng)搖動平板以保證細(xì)菌均勻分布，以免造成蔓延生長影響計數(shù)結(jié)果。由于MPN法是基于泊松分布的一種間接計數(shù)方法，其計數(shù)原理是將待測樣品作一系列稀釋，一直稀釋到將少量的稀釋液接種到新鮮培養(yǎng)基中沒有或極少出現(xiàn)細(xì)菌生長繁殖，然后根據(jù)沒有生長的最低稀釋度與出現(xiàn)生長的最高稀釋度，采用“最可能數(shù)”理論，查MPN表計算得出樣品單位體積中細(xì)菌數(shù)的近似值。所以采用MPN法對樣品計數(shù)的項目在操作時應(yīng)稀釋足夠的倍數(shù)，以達到出現(xiàn)生長的最高稀釋度，并謹(jǐn)慎選擇計數(shù)的稀釋度，即選擇的3個稀釋度既要包括所有重復(fù)都有菌液生長的最高稀釋度，又要包括出現(xiàn)生長的最高稀釋度，否則會影響MPN法的計數(shù)結(jié)果。

對于定性項目來說，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量，選擇適合的培養(yǎng)基，檢測人員的操作水平和經(jīng)驗判斷都非常重要。每批次培養(yǎng)基應(yīng)做好質(zhì)控，并在有效期內(nèi)使用。在首次分離培養(yǎng)時，建議使用弱選擇性培養(yǎng)基，這是因為冷凍干燥過程可能造成細(xì)胞內(nèi)核酸的損傷而誘導(dǎo)突變體的產(chǎn)生，可能導(dǎo)致目標(biāo)菌在強選擇性培養(yǎng)基上也無法生長。建議使用顯色培養(yǎng)基，更方便有效地將目標(biāo)菌和雜菌區(qū)分開來。在劃線分離時，要盡可能多的分出單個菌落。能準(zhǔn)確識別選擇性平板上的可疑菌落，進行后續(xù)鑒定時，應(yīng)挑取盡可能多的可疑菌落，以免因挑取的菌落數(shù)量太少沒有取到目標(biāo)菌而造成假陰性。認(rèn)真完成所有的鑒別試驗再做出判斷，以免因判斷依據(jù)不足而影響檢測結(jié)果。在實驗過程中，應(yīng)設(shè)置陰、陽性對照，避免假陰性或假陽性結(jié)果出現(xiàn)而影響結(jié)果判斷。

綜上所述，能力驗證是證明實驗室檢測能力的一種科學(xué)有效的技術(shù)手段，是對實驗室檢測技術(shù)能力和管理狀況進行考核的客觀方法，是實驗室質(zhì)量控制的重要手段，對實驗室資質(zhì)認(rèn)定工作有效性的后續(xù)監(jiān)督有著非常重要的作用。實驗室能力驗證試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，與實驗室的工作技術(shù)水平直接相關(guān)。參加能力驗證計劃獲得滿意結(jié)果，能增強客戶及相關(guān)方對實驗室出具可靠數(shù)據(jù)的信心。通過能力驗證活動，實驗室能了解自身不足，有利于督促其加強自身能力建設(shè)，提高實驗室人員檢測技術(shù)水平，增加檢測結(jié)果的正確性和可靠性。

4參考文獻

[1]中國合格評定國家認(rèn)可委員會.能力驗證規(guī)則＼[S＼].2010.

[2]食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù). GB 4789.3—2010＼[S＼].

[3]McCrady MH.The numerical interpretation of fermentation- tube results＼[J＼].Infect Dis，1915，17：183-212.

[4]孫慧，李天添.大腸菌群MPN計數(shù)法與CFU計數(shù)法相關(guān)性初探＼[J＼].釀酒，2012，39（3）：93-94.

[5]黃瑤，崔邦炳，黃翠姬，等.利用真空冷凍干燥法保藏幾種常見細(xì)菌的研究＼[J＼].廣西工學(xué)院學(xué)報，2006，17（2）：20-22.

能力驗證（proficiency testing）即利用實驗室間比對，按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則評價參加者的能力。通過能力驗證能夠評定實驗室從事特定檢測或測量的能力，識別實驗室存在的問題并啟動改進措施，提高實驗室的檢測能力等。因此，參加能力驗證活動對實驗室質(zhì)量控制有著非常重要的意義。上海市閘北區(qū)疾病預(yù)防控制中心實驗室已連續(xù)多年參加遼寧出入境檢驗檢疫局食品微生物能力驗證計劃，現(xiàn)將從中收獲的一些經(jīng)驗教訓(xùn)介紹如下，供同行參考。

1.2.2操作步驟

① 按照PTC-T028參試指導(dǎo)書的要求進行樣品水化。從冰箱取出待測樣品，待其恢復(fù)至室溫后，無菌開啟裝有樣品的西林瓶，立即加入4 mL生理鹽水進行再水化，稀釋液合計40 mL，待溶解后，吸出放入無菌瓶中，反復(fù)用余下的稀釋液清洗西林瓶內(nèi)壁，回收清洗液放入上述無菌瓶中，此溶液即是待測樣品原液，全過程20 min內(nèi)完成。將上述制備的40 mL待測原液按照標(biāo)準(zhǔn)方法進行后續(xù)操作。

② 菌落總數(shù)檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL滅菌生理鹽水混勻，制成10-1稀釋液，取10-1稀釋液1 mL加9 mL滅菌生理鹽水混勻，制成10-2稀釋液，以此類推稀釋至10-4。每稀釋1次，換1次無菌吸管。每個稀釋度樣液各取1 mL加入到2個無菌平皿中，同時做空白對照。及時用15 mL冷卻至45℃左右的平板計數(shù)瓊脂傾注平皿，搖勻，待培養(yǎng)基凝固后倒置放入培養(yǎng)箱中，36℃培養(yǎng)48 h后進行菌落計數(shù)。

③ 大腸菌群檢測。采用最可能數(shù)（most probable number，MPN）法進行大腸菌群計數(shù)。將經(jīng)水化的待測樣品按照菌落總數(shù)檢測的方法制備10-1～10-6的稀釋液。每個稀釋度接種3管LST肉湯，每管接種1 mL，36℃培養(yǎng)48 h后，產(chǎn)氣者進行復(fù)發(fā)酵試驗，接種BGLB肉湯管36℃培養(yǎng)48 h后產(chǎn)氣者計為大腸菌群陽性，記錄每個稀釋度的BGLB產(chǎn)氣管數(shù)。

④ 金葡菌檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL 7.5%NaC1肉湯制成混懸液，于36℃培養(yǎng)20 h，轉(zhuǎn)種血平板和Baird-Parker平板，于36℃培養(yǎng)24 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

⑤ 沙門菌檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL BPW制成混懸液，于36℃培養(yǎng)18 h后，分別取1 mL轉(zhuǎn)種TTB 10 mL及SC 10 mL， TTB置42℃培養(yǎng)24 h，SC置36℃培養(yǎng)24 h，分別轉(zhuǎn)種BS平板內(nèi)于36℃培養(yǎng)48 h及沙門菌屬顯色平板，于36℃培養(yǎng)24 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

⑥ 單增檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL LB1制成混懸液，于30℃培養(yǎng)24 h后，吸取0.1 mL轉(zhuǎn)種于10 mL LB2中，置30℃培養(yǎng)24 h，轉(zhuǎn)種于PALCAM平板和李斯特菌顯色平板，36℃培養(yǎng)48 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

⑦ 志賀菌檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL志賀菌增菌液制成混懸液，于41.5℃厭氧培養(yǎng)20 h后轉(zhuǎn)種XLD及MAC平板，于36℃培養(yǎng)24 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

⑧ 副溶血性弧菌檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL APW制成混懸液，于36℃培養(yǎng)16 h，轉(zhuǎn)種TCBS及弧菌顯色平板，于36℃培養(yǎng)24 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

3討論

本實驗室參加的7項能力驗證試驗反饋結(jié)果均為滿意（《食品中微生物學(xué)能力驗證計劃PTC-T028結(jié)果報告》），表明本實驗室能很好地應(yīng)用國家標(biāo)準(zhǔn)（GB 4789，現(xiàn)行有效系列）開展相關(guān)項目的檢測。本次能力驗證的定量項目中，菌落總數(shù)和大腸菌群的滿意率分別為90.5%和89.7%；定性項目中金葡菌滿意率最高，78個結(jié)果反饋僅1個為不滿意，滿意率為98.7%；副溶血性弧菌滿意率最低，56個結(jié)果反饋中，49個為滿意，滿意率為87.5%。此外，組織方將每一個項目分成不同組別，本實驗室副溶血性弧菌項目被分配到指定值為陽性組，有26個結(jié)果反饋，只有20個為滿意，滿意率為76.9%。

在參加能力驗證活動時，需要注意以下幾方面：

實驗前要仔細(xì)閱讀參試指導(dǎo)書，按照其要求對樣品進行前處理。對于定量項目來說，西林瓶中的樣品是一個不可分割的整體，應(yīng)全部溶解用于檢測，不能只取一部分進行檢測而造成結(jié)果不準(zhǔn)確。樣品打開后應(yīng)立即水化，否則會導(dǎo)致樣品吸潮溶解困難，影響準(zhǔn)確計數(shù)。在樣品稀釋過程中要充分混勻，以免影響計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。采用傾注法對樣品計數(shù)的項目，在傾注培養(yǎng)基后應(yīng)搖動平板以保證細(xì)菌均勻分布，以免造成蔓延生長影響計數(shù)結(jié)果。由于MPN法是基于泊松分布的一種間接計數(shù)方法，其計數(shù)原理是將待測樣品作一系列稀釋，一直稀釋到將少量的稀釋液接種到新鮮培養(yǎng)基中沒有或極少出現(xiàn)細(xì)菌生長繁殖，然后根據(jù)沒有生長的最低稀釋度與出現(xiàn)生長的最高稀釋度，采用“最可能數(shù)”理論，查MPN表計算得出樣品單位體積中細(xì)菌數(shù)的近似值。所以采用MPN法對樣品計數(shù)的項目在操作時應(yīng)稀釋足夠的倍數(shù)，以達到出現(xiàn)生長的最高稀釋度，并謹(jǐn)慎選擇計數(shù)的稀釋度，即選擇的3個稀釋度既要包括所有重復(fù)都有菌液生長的最高稀釋度，又要包括出現(xiàn)生長的最高稀釋度，否則會影響MPN法的計數(shù)結(jié)果。

對于定性項目來說，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量，選擇適合的培養(yǎng)基，檢測人員的操作水平和經(jīng)驗判斷都非常重要。每批次培養(yǎng)基應(yīng)做好質(zhì)控，并在有效期內(nèi)使用。在首次分離培養(yǎng)時，建議使用弱選擇性培養(yǎng)基，這是因為冷凍干燥過程可能造成細(xì)胞內(nèi)核酸的損傷而誘導(dǎo)突變體的產(chǎn)生，可能導(dǎo)致目標(biāo)菌在強選擇性培養(yǎng)基上也無法生長。建議使用顯色培養(yǎng)基，更方便有效地將目標(biāo)菌和雜菌區(qū)分開來。在劃線分離時，要盡可能多的分出單個菌落。能準(zhǔn)確識別選擇性平板上的可疑菌落，進行后續(xù)鑒定時，應(yīng)挑取盡可能多的可疑菌落，以免因挑取的菌落數(shù)量太少沒有取到目標(biāo)菌而造成假陰性。認(rèn)真完成所有的鑒別試驗再做出判斷，以免因判斷依據(jù)不足而影響檢測結(jié)果。在實驗過程中，應(yīng)設(shè)置陰、陽性對照，避免假陰性或假陽性結(jié)果出現(xiàn)而影響結(jié)果判斷。

綜上所述，能力驗證是證明實驗室檢測能力的一種科學(xué)有效的技術(shù)手段，是對實驗室檢測技術(shù)能力和管理狀況進行考核的客觀方法，是實驗室質(zhì)量控制的重要手段，對實驗室資質(zhì)認(rèn)定工作有效性的后續(xù)監(jiān)督有著非常重要的作用。實驗室能力驗證試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，與實驗室的工作技術(shù)水平直接相關(guān)。參加能力驗證計劃獲得滿意結(jié)果，能增強客戶及相關(guān)方對實驗室出具可靠數(shù)據(jù)的信心。通過能力驗證活動，實驗室能了解自身不足，有利于督促其加強自身能力建設(shè)，提高實驗室人員檢測技術(shù)水平，增加檢測結(jié)果的正確性和可靠性。

4參考文獻

[1]中國合格評定國家認(rèn)可委員會.能力驗證規(guī)則＼[S＼].2010.

[2]食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù). GB 4789.3—2010＼[S＼].

[3]McCrady MH.The numerical interpretation of fermentation- tube results＼[J＼].Infect Dis，1915，17：183-212.

[4]孫慧，李天添.大腸菌群MPN計數(shù)法與CFU計數(shù)法相關(guān)性初探＼[J＼].釀酒，2012，39（3）：93-94.

[5]黃瑤，崔邦炳，黃翠姬，等.利用真空冷凍干燥法保藏幾種常見細(xì)菌的研究＼[J＼].廣西工學(xué)院學(xué)報，2006，17（2）：20-22.

能力驗證（proficiency testing）即利用實驗室間比對，按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則評價參加者的能力。通過能力驗證能夠評定實驗室從事特定檢測或測量的能力，識別實驗室存在的問題并啟動改進措施，提高實驗室的檢測能力等。因此，參加能力驗證活動對實驗室質(zhì)量控制有著非常重要的意義。上海市閘北區(qū)疾病預(yù)防控制中心實驗室已連續(xù)多年參加遼寧出入境檢驗檢疫局食品微生物能力驗證計劃，現(xiàn)將從中收獲的一些經(jīng)驗教訓(xùn)介紹如下，供同行參考。

1.2.2操作步驟

① 按照PTC-T028參試指導(dǎo)書的要求進行樣品水化。從冰箱取出待測樣品，待其恢復(fù)至室溫后，無菌開啟裝有樣品的西林瓶，立即加入4 mL生理鹽水進行再水化，稀釋液合計40 mL，待溶解后，吸出放入無菌瓶中，反復(fù)用余下的稀釋液清洗西林瓶內(nèi)壁，回收清洗液放入上述無菌瓶中，此溶液即是待測樣品原液，全過程20 min內(nèi)完成。將上述制備的40 mL待測原液按照標(biāo)準(zhǔn)方法進行后續(xù)操作。

② 菌落總數(shù)檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL滅菌生理鹽水混勻，制成10-1稀釋液，取10-1稀釋液1 mL加9 mL滅菌生理鹽水混勻，制成10-2稀釋液，以此類推稀釋至10-4。每稀釋1次，換1次無菌吸管。每個稀釋度樣液各取1 mL加入到2個無菌平皿中，同時做空白對照。及時用15 mL冷卻至45℃左右的平板計數(shù)瓊脂傾注平皿，搖勻，待培養(yǎng)基凝固后倒置放入培養(yǎng)箱中，36℃培養(yǎng)48 h后進行菌落計數(shù)。

③ 大腸菌群檢測。采用最可能數(shù)（most probable number，MPN）法進行大腸菌群計數(shù)。將經(jīng)水化的待測樣品按照菌落總數(shù)檢測的方法制備10-1～10-6的稀釋液。每個稀釋度接種3管LST肉湯，每管接種1 mL，36℃培養(yǎng)48 h后，產(chǎn)氣者進行復(fù)發(fā)酵試驗，接種BGLB肉湯管36℃培養(yǎng)48 h后產(chǎn)氣者計為大腸菌群陽性，記錄每個稀釋度的BGLB產(chǎn)氣管數(shù)。

④ 金葡菌檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL 7.5%NaC1肉湯制成混懸液，于36℃培養(yǎng)20 h，轉(zhuǎn)種血平板和Baird-Parker平板，于36℃培養(yǎng)24 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

⑤ 沙門菌檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL BPW制成混懸液，于36℃培養(yǎng)18 h后，分別取1 mL轉(zhuǎn)種TTB 10 mL及SC 10 mL， TTB置42℃培養(yǎng)24 h，SC置36℃培養(yǎng)24 h，分別轉(zhuǎn)種BS平板內(nèi)于36℃培養(yǎng)48 h及沙門菌屬顯色平板，于36℃培養(yǎng)24 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

⑥ 單增檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL LB1制成混懸液，于30℃培養(yǎng)24 h后，吸取0.1 mL轉(zhuǎn)種于10 mL LB2中，置30℃培養(yǎng)24 h，轉(zhuǎn)種于PALCAM平板和李斯特菌顯色平板，36℃培養(yǎng)48 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

⑦ 志賀菌檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL志賀菌增菌液制成混懸液，于41.5℃厭氧培養(yǎng)20 h后轉(zhuǎn)種XLD及MAC平板，于36℃培養(yǎng)24 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

⑧ 副溶血性弧菌檢測。取經(jīng)水化制備的待測原液25 mL，加入225 mL APW制成混懸液，于36℃培養(yǎng)16 h，轉(zhuǎn)種TCBS及弧菌顯色平板，于36℃培養(yǎng)24 h，挑取可疑菌落進行鑒定。

3討論

本實驗室參加的7項能力驗證試驗反饋結(jié)果均為滿意（《食品中微生物學(xué)能力驗證計劃PTC-T028結(jié)果報告》），表明本實驗室能很好地應(yīng)用國家標(biāo)準(zhǔn)（GB 4789，現(xiàn)行有效系列）開展相關(guān)項目的檢測。本次能力驗證的定量項目中，菌落總數(shù)和大腸菌群的滿意率分別為90.5%和89.7%；定性項目中金葡菌滿意率最高，78個結(jié)果反饋僅1個為不滿意，滿意率為98.7%；副溶血性弧菌滿意率最低，56個結(jié)果反饋中，49個為滿意，滿意率為87.5%。此外，組織方將每一個項目分成不同組別，本實驗室副溶血性弧菌項目被分配到指定值為陽性組，有26個結(jié)果反饋，只有20個為滿意，滿意率為76.9%。

在參加能力驗證活動時，需要注意以下幾方面：

實驗前要仔細(xì)閱讀參試指導(dǎo)書，按照其要求對樣品進行前處理。對于定量項目來說，西林瓶中的樣品是一個不可分割的整體，應(yīng)全部溶解用于檢測，不能只取一部分進行檢測而造成結(jié)果不準(zhǔn)確。樣品打開后應(yīng)立即水化，否則會導(dǎo)致樣品吸潮溶解困難，影響準(zhǔn)確計數(shù)。在樣品稀釋過程中要充分混勻，以免影響計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。采用傾注法對樣品計數(shù)的項目，在傾注培養(yǎng)基后應(yīng)搖動平板以保證細(xì)菌均勻分布，以免造成蔓延生長影響計數(shù)結(jié)果。由于MPN法是基于泊松分布的一種間接計數(shù)方法，其計數(shù)原理是將待測樣品作一系列稀釋，一直稀釋到將少量的稀釋液接種到新鮮培養(yǎng)基中沒有或極少出現(xiàn)細(xì)菌生長繁殖，然后根據(jù)沒有生長的最低稀釋度與出現(xiàn)生長的最高稀釋度，采用“最可能數(shù)”理論，查MPN表計算得出樣品單位體積中細(xì)菌數(shù)的近似值。所以采用MPN法對樣品計數(shù)的項目在操作時應(yīng)稀釋足夠的倍數(shù)，以達到出現(xiàn)生長的最高稀釋度，并謹(jǐn)慎選擇計數(shù)的稀釋度，即選擇的3個稀釋度既要包括所有重復(fù)都有菌液生長的最高稀釋度，又要包括出現(xiàn)生長的最高稀釋度，否則會影響MPN法的計數(shù)結(jié)果。

對于定性項目來說，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量，選擇適合的培養(yǎng)基，檢測人員的操作水平和經(jīng)驗判斷都非常重要。每批次培養(yǎng)基應(yīng)做好質(zhì)控，并在有效期內(nèi)使用。在首次分離培養(yǎng)時，建議使用弱選擇性培養(yǎng)基，這是因為冷凍干燥過程可能造成細(xì)胞內(nèi)核酸的損傷而誘導(dǎo)突變體的產(chǎn)生，可能導(dǎo)致目標(biāo)菌在強選擇性培養(yǎng)基上也無法生長。建議使用顯色培養(yǎng)基，更方便有效地將目標(biāo)菌和雜菌區(qū)分開來。在劃線分離時，要盡可能多的分出單個菌落。能準(zhǔn)確識別選擇性平板上的可疑菌落，進行后續(xù)鑒定時，應(yīng)挑取盡可能多的可疑菌落，以免因挑取的菌落數(shù)量太少沒有取到目標(biāo)菌而造成假陰性。認(rèn)真完成所有的鑒別試驗再做出判斷，以免因判斷依據(jù)不足而影響檢測結(jié)果。在實驗過程中，應(yīng)設(shè)置陰、陽性對照，避免假陰性或假陽性結(jié)果出現(xiàn)而影響結(jié)果判斷。

綜上所述，能力驗證是證明實驗室檢測能力的一種科學(xué)有效的技術(shù)手段，是對實驗室檢測技術(shù)能力和管理狀況進行考核的客觀方法，是實驗室質(zhì)量控制的重要手段，對實驗室資質(zhì)認(rèn)定工作有效性的后續(xù)監(jiān)督有著非常重要的作用。實驗室能力驗證試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，與實驗室的工作技術(shù)水平直接相關(guān)。參加能力驗證計劃獲得滿意結(jié)果，能增強客戶及相關(guān)方對實驗室出具可靠數(shù)據(jù)的信心。通過能力驗證活動，實驗室能了解自身不足，有利于督促其加強自身能力建設(shè)，提高實驗室人員檢測技術(shù)水平，增加檢測結(jié)果的正確性和可靠性。

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