齊迎春

·實(shí)驗(yàn)研究·

連翹中蘆丁和連翹酯苷A的含量測(cè)定方法分析

齊迎春

目的對(duì)連翹中蘆丁和連翹酯苷A的含量測(cè)定方法進(jìn)行分析探討, 為今后的研究工作提供可靠的參考依據(jù)。方法采取反相高效液相色譜法, 選用ThermoODS C18色譜柱, 流動(dòng)相為甲醇-濃度為2 g/L冰醋酸(20:80), 波長(zhǎng)為329 nm。結(jié)果蘆丁與連翹酯苷A的進(jìn)樣量在0.0210～0.4219 μg和0.0152～0.3058 μg之間存在良好的線性關(guān)系, 蘆丁與連翹酯苷A的平均回收率為102.6%和103.4%。結(jié)論采取反相高效液相色譜法對(duì)連翹中蘆丁與連翹酯苷A的含量進(jìn)行測(cè)定時(shí)具有操作簡(jiǎn)單, 結(jié)果準(zhǔn)確可靠, 穩(wěn)定性與精密度良好等優(yōu)勢(shì), 值得關(guān)注并推廣。

連翹；蘆丁；連翹酯苷A ；含量測(cè)定；反相高效液相色譜法

已有研究證實(shí)［1］, 連翹中的主要有效成分有黃酮類、木質(zhì)素類、苯乙醇苷類以及揮發(fā)油等, 現(xiàn)代藥理研究結(jié)果顯示,連翹中的連翹酯苷A具有顯著的抗菌、抗病毒活性, 蘆丁則具有顯著的抗氧化活性。本次研究中出于對(duì)連翹中蘆丁和連翹酯苷A的含量測(cè)定方法進(jìn)行分析探討的目的, 采取反相高效液相色譜法對(duì)連翹中上述兩種成分的含量展開了測(cè)定, 現(xiàn)報(bào)告結(jié)果如下。

1 儀器與試藥

1.1實(shí)驗(yàn)儀器 實(shí)驗(yàn)中所需儀器為L(zhǎng)C-20A高效液相色譜儀、KQ-300超聲波提取器。

1.2實(shí)驗(yàn)試藥與試劑 實(shí)驗(yàn)所需制劑包括：甲醇為色譜純、超純水, 冰醋酸為分析純。實(shí)驗(yàn)所需試藥包括：蘆丁、連翹酯苷A對(duì)照品, 連翹藥材。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件［2］色譜柱選用ThermoODS C18柱, 規(guī)格為4.6 mm×250 mm, 5 μm, 柱溫為30℃, 流動(dòng)相配比為：甲醇-濃度為2 g/L的冰醋酸溶液(20:80), 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇329 nm, 進(jìn)樣量為10 μl, 流速為1.0 ml/min。

2.2對(duì)照品溶液制備 分別精密稱定蘆丁與連翹酯苷A對(duì)照品適量, 經(jīng)500 g/L的甲醇溶解后, 配制成濃度分別為21.1 mg/L和15.3 mg/L的混合溶液, 經(jīng)0.45微孔濾膜濾過后混勻,制成混合對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液制備 取連翹藥材, 粉碎, 過40目篩, 精密稱定0.1 g, 放置在具塞錐形瓶中, 精密加入50 ml濃度為500 g/L的甲醇溶液, 稱定質(zhì)量, 超聲條件下提取30 min, 冷卻至室溫后, 再次稱定質(zhì)量, 經(jīng)濃度為500 g/L的甲醇溶液對(duì)損失重量進(jìn)行補(bǔ)充, 搖勻后過濾, 濾液過0.45微孔濾膜后制得供試品溶液。

2.4線性關(guān)系考察 精密吸取2.2所制混合對(duì)照品溶液1、2、5、10、15、20 μl, 注入到液相色譜儀中, 以2.1所示色譜條件進(jìn)行測(cè)定, 以峰面積作為縱坐標(biāo), 以進(jìn)樣量作為橫坐標(biāo), 作線性回歸方程, 結(jié)果為：Y蘆丁=590209X-732.33, r=0.9999, Y連翹酯苷A=653571X+686.79, r=0.9999。蘆丁與連翹酯苷A的進(jìn)樣量在0.0210～0.4219 μg和0.0152～0.3058 μg之間存在良好的線性關(guān)系。

2.5精密度考察 精密吸取2.2所制備的混合對(duì)照品溶液,10 μl進(jìn)樣, 連續(xù)測(cè)定5次, 對(duì)峰面積進(jìn)行記錄, 計(jì)算RSD值,結(jié)果為：蘆丁的RSD值為1.20%, 連翹酯苷A的RSD值為1.15%。證實(shí)儀器精密度良好。

2.6重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 精密稱定同一批次的連翹粉末0.1 g, 分成5份, 在2.3所示條件下制成供試品溶液, 在2.1所示色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè), 記錄峰面積, 計(jì)算RSD值, 結(jié)果為：蘆丁的RSD值為1.51%, 連翹酯苷A的RSD值為1.48%, 證實(shí)該方法的重現(xiàn)性良好。

2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密稱定0.1 g連翹粉末, 如2.3所示條件制成供試品溶液, 室溫下放置0、2、4、6、8、12、24 h后, 在2.1所示色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè), 記錄峰面積, 計(jì)算RSD值, 結(jié)果為：蘆丁的RSD值為1.32%, 連翹酯苷A的峰面積為1.37%, 證實(shí)供試品溶液在24 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.8加樣回收實(shí)驗(yàn) 精密稱定已知含量的連翹樣品粉末0.1 g,蘆丁的含量為2.54 mg/g, 連翹酯苷A的含量為4.88 mg/g, 共分成6份, 分別精密加入濃度為500 g/L的甲醇溶液進(jìn)行溶解,制成20 ml蘆丁質(zhì)量分?jǐn)?shù)為21.1 mg/L和15.3 mg/L的混合對(duì)照品溶液, 而后精密加入30 ml 500 g/L的甲醇溶液, 按照2.3所示條件制備加樣回收實(shí)驗(yàn)供試品溶液, 在2.1所示色譜條件下10 μl進(jìn)樣檢測(cè), 記錄峰面積, 計(jì)算蘆丁與連翹酯苷A的回收率。結(jié)果詳見表1。

表1 連翹中蘆丁與連翹酯苷A加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

2.9樣品測(cè)定 取3個(gè)批次的連翹樣品粉末, 在2.3所示條件下制成供試品溶液, 在2.1所示色譜條件下10 μl進(jìn)樣檢測(cè),記錄峰面積, 計(jì)算蘆丁與連翹酯苷A含量, 結(jié)果為：蘆丁的含量分別為2.61、2.56、2.41 mg/g, 連翹酯苷A的含量分別為4.95、4.89、4.69 mg/g。

3 討論

近幾年隨著中藥領(lǐng)域的發(fā)展, 使得中藥有效成分研究不斷深入, 已有研究證實(shí), 蘆丁與連翹酯苷為連翹的主要活性成分, 在連翹定性與定量研究中可作為重要觀察指標(biāo)。本次研究中采取反相高效液相色譜法對(duì)連翹中蘆丁與連翹酯苷A含量進(jìn)行了測(cè)定, 結(jié)果發(fā)現(xiàn), 該方法具有操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、精密度與穩(wěn)定性良好等諸多優(yōu)勢(shì), 值得關(guān)注并推廣。

［1］ 郭強(qiáng), 王智民, 林麗美, 等.連翹屬藥用植物化學(xué)成分研究進(jìn)展.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2009, 15(5):74-79.

［2］ 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典:一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社, 2010:159-160.

2014-04-04］

130022 長(zhǎng)春, 解放軍第二○八醫(yī)院四六一臨床部