趙 花，李軍民，張 紅

TP-ELISA法檢測(cè)梅毒抗體假陽性結(jié)果的影響因素

趙 花，李軍民，張 紅

目的 探討TP-ELISA法檢測(cè)梅毒特異性抗體假陽性結(jié)果的影響因素。方法 采用TP-ELISA法對(duì)2619例標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，初檢陽性者再行TRUST試驗(yàn)和TPPA確認(rèn)試驗(yàn)，結(jié)果判定以TPPA為準(zhǔn)，比較TP-ELISA法與TPPA法的符合率。結(jié)果 231例TP-ELISA法檢測(cè)陽性標(biāo)本中S/CO值>1.0者201例，經(jīng)TRUST復(fù)檢后陽性者169例，經(jīng)TPPA確認(rèn)陽性者196例，TP-ELISA法和TPPA的符合率為97.5%。在S/CO為0.70～1.0的30例標(biāo)本中，經(jīng)TRUST復(fù)檢后陽性者12例，經(jīng)TPPA確證為陽性者19例，TP-ELISA法和TPPA的符合率為63.3%。結(jié)論 TP-ELISA法檢測(cè)陽性標(biāo)本中S/CO值為0.70～1.0者應(yīng)采用TRUST和 TPPA法聯(lián)合檢驗(yàn)，以減少誤診及漏檢。

梅毒螺旋體；特異性抗體檢測(cè)；非特異性抗體檢測(cè)；確認(rèn)試驗(yàn)

梅毒是由梅毒螺旋體(treponema pallidum，TP)感染所引起的一種慢性性傳播疾病，人體感染后可造成全身多組織和器官的損傷和病變。近年來，在我國(guó)發(fā)病呈上升趨勢(shì)[1,2]。梅毒診斷除依據(jù)臨床癥狀和體征外，主要依靠實(shí)驗(yàn)室檢查。由于TP直接鏡檢法受實(shí)驗(yàn)室的條件限制，目前仍以血清學(xué)檢查為主，常用的檢測(cè)方法有特異性抗體檢測(cè)(TP-ELISA)、非特異性抗體檢測(cè)(TRUST)、確認(rèn)試驗(yàn)(TPPA)等。其中TP-ELISA法臨床應(yīng)用最為廣泛，但由于受不確定因素的影響，常會(huì)出現(xiàn)檢測(cè)值處于臨界區(qū)域(灰區(qū))的問題[3]。為此，筆者就TP-ELISA篩查梅毒抗體假陽性結(jié)果的影響因素進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 材料 2619份標(biāo)本來自本院2011-03至2013-04門診、住院患者及健康體檢者，年齡0～93歲，男1098例，女1521例。其中經(jīng)皮膚性病?？拼_診的梅毒患者113例，泌尿科確診的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎127例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE) 91例，老年人、孕婦、糖尿病、慢性肝病等696例，其余為正常送檢標(biāo)本。

1.2 儀器和試劑 RT3100洗板機(jī)，Stat Fax 2100酶標(biāo)分析儀。TP-ELISA試劑產(chǎn)自廈門新創(chuàng)生物公司；TRUST試劑產(chǎn)自上海榮盛；TPPA試劑產(chǎn)自日本富士株式會(huì)社。

1.3 檢測(cè)方法 所有受檢者清晨空腹抽靜脈血3 ml，常規(guī)分離血清。各項(xiàng)操作和結(jié)果判定嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。所有標(biāo)本先行TP-ELISA法檢測(cè)，每次試驗(yàn)設(shè)陽性對(duì)照1孔，陰性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照<0.05者以0.05計(jì)。初檢陽性者再行TRUST試驗(yàn)和TPPA確認(rèn)試驗(yàn)。結(jié)果判定以TPPA為準(zhǔn)，計(jì)算TP-ELISA法與TPPA法的符合率。

2 結(jié) 果

2.1 TP-ELISA法陽性標(biāo)本復(fù)檢結(jié)果 2619份標(biāo)本經(jīng)TP-ELISA法檢測(cè)陽性231例，其中S/CO值>1.0者201例；經(jīng)TRUST復(fù)檢后陽性者169例，后者經(jīng)TPPA確認(rèn)均為陽性；32例TRUST陰性標(biāo)本經(jīng)TPPA確認(rèn)陽性27例，TP-ELISA法和TPPA的符合率為97.5%(196/201)。TP-ELISA法S/CO值在0.70～1.0的陽性標(biāo)本30例，經(jīng)TRUST復(fù)檢后陽性標(biāo)本有12例，經(jīng)TPPA確認(rèn)陽性19例，符合率為63.3%(19/30，表1)。其中21例S/CO值在0.751～1.0的標(biāo)本經(jīng)TPPA確認(rèn)15例陽性，6例陰性，陽性率72.4%；9例S/CO值在0.7～0.750的標(biāo)本經(jīng)TPPA確認(rèn)4例陽性，5例陰性，陽性率44.4%。

表1 TP-ELISA法檢測(cè)梅毒抗體陽性標(biāo)本 TRUST和TPPA復(fù)檢結(jié)果

2.2 TP-ELISA法假陽性結(jié)果 16例TP-ELISA法陽性樣本經(jīng)TPPA確認(rèn)陰性者為風(fēng)濕4例，SLE 3例，其他9例。

3 討 論

目前，梅毒臨床實(shí)驗(yàn)診斷方法大致分為 TRUST、TP-ELISA及TPPA。TRUST檢測(cè)因其滴度與臨床癥狀呈正相關(guān)，一般用于梅毒的療效觀察、隨訪和復(fù)發(fā)的輔助診斷[4]。TPPA屬于梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，有著很高的敏感度和特異性，一般用于確認(rèn)試驗(yàn)[5]。TP-ELISA法因其操作簡(jiǎn)便，靈敏度、特異性均較高，可批量檢測(cè)等特點(diǎn)，是目前各實(shí)驗(yàn)室普遍采用的篩檢梅毒特異性抗體的常規(guī)檢測(cè)方法。

由于TP-ELISA法檢測(cè)受諸多不確定因素影響，常會(huì)導(dǎo)致假陽性。本研究結(jié)果顯示，TP-ELISA檢測(cè)S/CO值>1.0的陽性者201例中，經(jīng)TPPA確認(rèn)陽性者196例，符合率為97.5%，表明這兩種方法相符性較好；而S/CO值在0.70～1.0的30例ELISA陽性標(biāo)本，經(jīng)TPPA確認(rèn)后陽性僅有19例，符合率明顯偏低，僅63.3%。其原因可能與以下因素有關(guān)：(1)標(biāo)本因素，血清標(biāo)本在采集過程中受到污染；血液凝固不完全，血清有殘留的纖維蛋白原存在[6]；溶血標(biāo)本，具有類似辣根過氧化物酶作用。(2)操作因素，不同人員操作習(xí)慣差異，如加樣手法、洗滌時(shí)間及次數(shù)、試劑的反復(fù)凍融使酶的活性降低等原因均可造成結(jié)果判讀錯(cuò)誤[7]。(3)儀器因素，空白值異常，反應(yīng)孔污染或殘留物造成本底值過高，洗板機(jī)的拖帶污染現(xiàn)象等[8]，應(yīng)定期校準(zhǔn)酶標(biāo)儀。(4)“灰區(qū)”，指處于Cutoff值周圍一定范圍的測(cè)定結(jié)果，通常將Cutoff左右20%的檢測(cè)值視為“灰區(qū)”[9]。文獻(xiàn)[10]指出，由于一些不確定因素的影響，處在灰區(qū)范圍的結(jié)果重復(fù)性較差，容易造成假陽性或假陰性。因此，確定本實(shí)驗(yàn)室的“灰區(qū)”范圍，對(duì)“灰區(qū)”結(jié)果再行TPPA確認(rèn)試驗(yàn)可提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確率。

除了上述原因外，還有機(jī)體內(nèi)在因素的影響：(1)老年人假陽性率較高，本研究發(fā)現(xiàn)，16例假陽性標(biāo)本中，老年人占7例，可能原因：一是抗體免疫功能異?；蜷L(zhǎng)期服藥，產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體；二是體內(nèi)存在口腔螺旋體等誘導(dǎo)特異性抗原的交叉反應(yīng)抗體，可能引起假陽性[11]。(2)生理狀況改變，如妊娠，可能與自身基礎(chǔ)性疾病或免疫功能有關(guān)。(3)疾病導(dǎo)致的生物學(xué)假陽性反應(yīng)[12]，如急性猩紅熱、亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、呼吸道感染等疾病一般滴度較低，在6個(gè)月內(nèi)就會(huì)轉(zhuǎn)陰；慢性系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、溶血性貧血等一般滴度較高，通常持續(xù)半年以上或終身。

建議對(duì)TP-ELISA法檢測(cè)陽性、S/CO為0.70～1.0的標(biāo)本采用TRUST和 TPPA法聯(lián)合檢驗(yàn)，并建立適宜本實(shí)驗(yàn)室“灰區(qū)”的檢測(cè)范圍，以減少誤診及漏檢率。

[1] 彭明喜. 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)梅毒抗體假陽性的原因分析[J]. 現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2006，18(2): 127-128.

[2] 王長(zhǎng)海,呂長(zhǎng)坤. 梅毒螺旋體感染篩選方法的臨床研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，31(6):609-610.

[3] 曹樹正，王 斌.梅毒檢測(cè)“灰區(qū)”樣本分析[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010,26(3)：476-477.

[4] 林益振，陳愛金. TP-ELISA和RPR聯(lián)合檢查梅毒抗體的缺陷分析與對(duì)策[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，12(22)：2919-2921.

[5] 畢紅琳，馬 娟，朱中梁，等.3種方法檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的結(jié)果比較[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8(5)：582-583.

[6] 徐樹良，石 斌，談 唯，等.熒光定量PCR對(duì)ELISA-HBsAg“灰區(qū)”標(biāo)本的再分析[J].中國(guó)輸血雜志，2003，16(1):24-25.

[7] 容 瑩，孫秀雙. 乙型肝炎表面抗原檢測(cè)結(jié)果分析及灰區(qū)設(shè)置探討[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010,8(7):1593-1595.

[8] 武建國(guó).老年人抗梅毒螺旋體抗體測(cè)定[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2006，24(4):241-243.

[9] 鄧紅艷，赫蘭輝.老年患者血清梅毒抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)假陽性結(jié)果分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011,8(2)：151.

[10] 康淑霞，朱安友，王鳳超,等，ELISA法篩查聯(lián)合TRUST、TPPA在梅毒診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J]. 實(shí)用全科醫(yī)學(xué)，2007,6(5)：545-546.

[11] 華文浩，孫繼云，趙 輝,等.4種梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法評(píng)價(jià)[J]. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011,32(9):1704-1705.

[12] 劉曉敏，鄭 炘，曾秋耀. 探討ELISA方法中HBsAg弱陽性標(biāo)本復(fù)查方式及其意義[J]. 檢驗(yàn)與臨床，2010,48(11):84-85.

(2014-05-10收稿 2014-07-12修回)

(責(zé)任編輯 尤偉杰)

Uncertain factors of detectingTreponemapallidumantibody by enzyme linked immunosorbent assay

ZHAO Hua, LI Junmin, and ZHANG Hong.

Clinical Laboratory, Shaanxi Provincial Corps Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces, Xi’an 710054, China

Objective To study the uncertain factors of the false positive results ofTreponemapallidumspecific antibody(anti-TP) detected by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA). Methods Anti-TP was detected in 2619 samples by ELISA. The positive samples were examined again by tolulized red unheated serum test (TRUST) andT.pallidumparticle assay (TPPA). Results The S/CO>1.0 in 231 positive samples detected by ELISA were 201, The 201 positive samples were examined again by TRUST and confirmed positive by TPPA. The positive samples by TRUST were 169, and by TPPA were 196. The coincidence rate of ELISA and TPPA was 97.5%. In 30 samples’ S/CO between 0.7 and 1.0, the positive samples examined again by TRUST were 12, and confirmed positive by TPPA were 19. The coincidence rate of ELISA and TPPA was 63.3%. Conclusions The method of ELISA is affected by the uncertain factors, So false positive results exist. The sample’s S/CO between 0.7 and 1.0 should be examined by TRUST and TPPA jointly.

TP；ELISA；TRUST；TPPA

趙 花，本科學(xué)歷，主管技師，E-mail:wodelongfengbaobao@163.com

710054西安，武警陜西總隊(duì)醫(yī)院檢驗(yàn)科

R446.111；R759.1