姚素艷，李全勝，鄭德宇

(1. 遼寧醫(yī)學院病理生理學教研室，遼寧錦州 121001；2. 盤錦市中心醫(yī)院耳鼻喉科，遼寧盤錦 124000；3. 遼寧醫(yī)學院解剖學教研室，遼寧錦州 121001)

◇中醫(yī)藥研究◇

綠原酸對體外培養(yǎng)的人鼻咽癌細胞株CNE-1的作用

姚素艷1，李全勝2，鄭德宇3

(1. 遼寧醫(yī)學院病理生理學教研室，遼寧錦州 121001；2. 盤錦市中心醫(yī)院耳鼻喉科，遼寧盤錦 124000；3. 遼寧醫(yī)學院解剖學教研室，遼寧錦州 121001)

目的 探討綠原酸(chlorogenic acid, CHA)對體外培養(yǎng)狀態(tài)下人鼻咽癌細胞株CNE-1的作用及其機制。方法 在無菌狀態(tài)下復蘇人鼻咽癌細胞株CNE-1，取傳4代的細胞，向培養(yǎng)基內(nèi)加入CHA，使其終濃度達到0、25、50、100、200、500 μmol/L，應用CCK-8體外抑制實驗進行篩選CHA的最佳抑癌濃度。選擇CHA最佳抑癌濃度，作用于CNE-1細胞系。檢測人鼻咽癌細胞株CNE-1中端粒酶活性、抑癌基因p27和p16的表達、細胞周期蛋白(cyclin D1)和細胞周期蛋白依賴激酶(CDK4)的表達。結(jié)果 經(jīng)CCK-8體外抑制實驗進行篩選CHA的最佳抑癌濃度為100 μmol/L。人鼻咽癌細胞株CNE-1的培養(yǎng)基中加入終濃度為100 μmol/L的CHA，維持10 d，CNE-1細胞株中其端粒酶活性為1.621，遠低于試劑盒中的陽性對照和未處理的CNE-1細胞株，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。應用CHA處理CNE-1細胞株10 d后，抑癌基因p27和p16均有少量的表達，而在陽性對照組(HT1080細胞)和未處理的CNE-1細胞幾乎沒有表達。應用CHA處理CNE-1細胞株10 d后，cyclin D1和CDK4的表達量與陽性對照組(HT1080細胞)和未處理的CNE-1細胞相比明顯降低。結(jié)論 應用100 μmol/L CHA 10 d，可以降低CNE-1細胞株端粒酶活性、增加抑癌基因的表達，降低細胞周期蛋白的表達。CHA對人鼻咽癌細胞株CNE-1的作用是通過活化抑癌基因和抑制細胞周期蛋白的表達來實現(xiàn)的。

綠原酸；鼻咽癌；抑癌基因；細胞周期蛋白；端粒酶；p27；p16

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)是我國最常見頭頸部惡性腫瘤，是威脅人類健康的十大惡性腫瘤之一[1-2]。由于鼻咽部特殊的解剖學位置，發(fā)病時多為中晚期，手術根治非常困難[3-4]。臨床上手術治療只是一種輔助治療手段，放療或放化綜合治療已成為鼻咽癌的主要治療手段。研究發(fā)現(xiàn)p27和p16均為抑癌基因，在各種類型的腫瘤細胞中，幾乎都有p27蛋白的表達降低[5]。p16蛋白能抑制細胞由G0/G1期向S期轉(zhuǎn)變。細胞周期蛋白(cyclin)和細胞周期素依賴激酶4、6(cyclin dependent kinases, CDK 4，6)結(jié)合后[6]，促進細胞由G0/G1期向S期轉(zhuǎn)變。由于p16蛋白氨基末端具有與Cyclin D1的周期素編碼區(qū)同源的區(qū)域，故p16可能與Cyclin D1競爭CDK4/CDK6的結(jié)合位點，抑制其激活酶活性，從而達到抑制細胞由G0/G1期向S期轉(zhuǎn)變。在NPC組織中，p27和p16陰性表達率分別為61%～85%和71%～88%，Cyclin D1和CDK4的陽性表達率分別為56%～58%和61%～75%[7-8]。

綠原酸(chlorogenic acid, CHA)是金銀花(houneysuckle flowers)的生物活性提取物，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤等作用[9-10]。以往的研究發(fā)現(xiàn)金銀花的抑癌作用主要體現(xiàn)在CHA對肉瘤180及艾氏腹水癌有明顯的細胞毒作用。CHA對于鼻咽癌的作用尚沒有明確的報道。如果人鼻咽癌細胞株CNE-1在一定濃度的CHA的作用下，出現(xiàn)p27表達上調(diào)，CDK4下調(diào)，p16表達上調(diào)，cyclin D1的表達降低，則可以初步說明CHA具有一定的抑制人鼻咽癌的作用，可能為鼻咽癌的治療提供一個新的選擇。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 鼻咽癌細胞株CNE-1(中科院上海細胞庫)；CHA(金銀花提取物，分子質(zhì)量為354.30，純度>98%，購自山東金宇桐生物有限公司)。高糖DMEM、胰蛋白酶和二甲基亞砜(DMSO)(Gibco公司)、新生牛血清(Hyclone)、CCK8試劑盒、p27單克隆抗體、CDK4單克隆抗體、Cyclin D1單克隆抗體、p16單克隆抗體(Sigma公司)、端粒酶ELISA檢測試劑盒(武漢博士德)。

1.2 鼻咽癌細胞株的復蘇及培養(yǎng) 從液氮罐中取出鼻咽癌細胞株CNE-1細胞凍存管，常規(guī)方法復蘇，以106/mL的濃度接種于培養(yǎng)瓶中，在37 ℃、50 mL/L CO2飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。待細胞長滿培養(yǎng)瓶后，即細胞達到80%融合時，吸棄培養(yǎng)基，加入5 mL 的PBS(0.1 mol/L，pH=7.4)緩沖液洗滌細胞，然后吸棄PBS緩沖液，加入胰蛋白酶(含0.2 g/L EDTA)后置于室溫消化細胞，倒置顯微鏡下觀察細胞大部分突起回縮，加入上述培養(yǎng)基終止消化。將細胞移到一個15 mL離心管中以1 000 r/min離心5 min，吸棄上清，加入5 mL完全培養(yǎng)基，調(diào)整細胞濃度，按1×105/mL接種于培養(yǎng)瓶中，放置于37 ℃、50 mL/L CO2飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進行傳代培養(yǎng)。根據(jù)實驗的要求取傳4代的細胞進行實驗。

1.3 CHA最適濃度的篩選

①細胞培養(yǎng)。將CNE-1細胞分為6組：陰性對照組(未加任何處理，同期培養(yǎng)的同代次細胞)；CHA組1：在培養(yǎng)基中加入CHA，終濃度為25 μmol/L。CHA組2：在培養(yǎng)基中加入CHA，終濃度為50 μmol/L處理3 d。CHA組3：在培養(yǎng)基中加入CHA，終濃度為100 μmol/L處理3 d。CHA組4：在培養(yǎng)基中加入CHA，終濃度為200 μmol/L處理3 d。CHA組5：在培養(yǎng)基中加入CHA，終濃度為500 μmol/L處理3 d。陽性對照組：在培養(yǎng)基中加入雷公藤提取物，終濃度為100 μmol/L處理3 d。

②體外CCK-8細胞生長抑制實驗。收集對數(shù)生長期的CNE-1細胞，接種于96孔板中，每孔約100 μL(2 000個細胞/孔)，向培養(yǎng)基內(nèi)加入CHA原液，使終濃度分別為0、25、50、100、200、500 μmol/L，每個濃度重復3次，將細胞放置于50 mL/L CO2、飽和濕度的37 ℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)72 h(即細胞在不同濃度的CHA作用下維持藥物濃度6 d，根據(jù)文獻和預實驗結(jié)果，6 d時作用效果達到最佳)。向每孔中加入CCK-8 10 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，待完全顯色，用酶聯(lián)免疫檢測儀于450 nm波長檢測每孔的吸光度A值。按公式計算出增殖率：細胞增殖率(%)=[實驗組平均A值/對照組平均A值]×100%。通過增殖率，可以初步判定CHA對CNE-1的最適抑制濃度，后續(xù)實驗選擇此濃度為實驗濃度。

③繪制細胞生長曲線。根據(jù)上一結(jié)果獲得的濃度，為了進一步確定最佳的抑制濃度，選取對數(shù)生長期的CNE-1細胞，接種于24孔培養(yǎng)板，每孔接種500 μL細胞懸液(5×103個細胞/孔)，每組設4個平行孔。常規(guī)細胞培養(yǎng)條件下培養(yǎng)加入0、75、100、125、150 μmol/L不同濃度CHA溶液，加入CCK8進行檢測，連測7 d。繪制細胞生長曲線，進一步確定CHA抑制CNE-1生長的最佳濃度。其中：增殖率=CHA組吸光度值/對照組平均吸光度值×100%。

1.4 CHA對CNE-1增殖的影響

①應用ELISA檢測方法檢測端粒酶活性。取傳4代的CNE-1，向培養(yǎng)基中加入CHA至其終濃度為100 μmol/L，對細胞進行正常的傳代培養(yǎng)，維持該濃度10 d。收集細胞進行端粒酶活性PCR-ELISA檢測。陽性對照組采用人纖維肉瘤HT1080細胞株(中科院細胞庫)，陰性對照為試劑盒自備樣品。

②抑癌基因p27、p16和CDK4及Cyclin D1的檢測。取傳4代的CNE-1，向培養(yǎng)基中加入CHA至其終濃度為100 μmol/L，對細胞進行正常的傳代培養(yǎng)，維持該濃度10 d。陽性對照組采用人纖維肉瘤HT1080細胞株，空白對照組采用未經(jīng)處理的人鼻咽癌細胞株CNE-1，實驗對照細胞CNE-1應用雷公藤作用10 d的細胞，取各種細胞各1×106，提取細胞總蛋白質(zhì)，按Bradford法測定蛋白含量。按試劑盒的要求應用Western blot方法檢測p27、p16、CDK4和Cyclin D1的表達。

2 結(jié) 果

2.1 CNE-1培養(yǎng)及形態(tài)學觀察 細胞復蘇后，復蘇第一代生長較為緩慢，約為4 d才能鋪滿培養(yǎng)瓶。在傳二代后，細胞生長迅速，1∶3傳代，約72 h就能長滿培養(yǎng)瓶，細胞呈近似球形或多邊形，聚集在一起。在生長稀疏的部位有的有長的突起，中間部分也近似球形(圖1)。

2.2 CHA對CNE-1最佳抑癌濃度的篩選 體外CCK-8細胞生長抑制實驗：與對照組細胞相比，CHA作用組細胞增殖均被不同程度的抑制，CHA的濃度從25 μmol/L開始，處理組與未處理的對照組相比，CNE-1細胞的增殖率就開始明顯下降(P<0.05)，隨著劑量的增大，細胞增殖率的下降越來越明顯，呈劑量效應關系。到100 μmol/L時，CHA對CNE-1的作用達到最大。從200 μmol/L開始CHA對細胞的抑制作用開始減弱(圖2)。100 μmol/L的CHA對CNE-1的抑制作用與其他各組相比差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

圖1 傳代培養(yǎng)70 h的CNE-1細胞(bar=50 μm)

Fig.1 The subculture of CNE-1 for 70 h (bar=50 μm)

細胞呈多角形或類圓形，稀疏的部位可見有長的突起。

圖2 不同濃度的綠原酸對鼻咽癌細胞株CNE-1的抑制作用

Fig.2 Inhibition on CNE-1 growth induced by different concentration of CHA

與0 μmol/L比較，*P<0.05，**P<0.01；與100 μmol/L 比較，&P<0.05，##P<0.01。

細胞的生長曲線：從CNE-1細胞株生長曲線可知，從75 μmol/L到150 μmol/L的各個濃度，CHA均能有效的抑制鼻咽癌細胞的生長(F=28.75，P<0.05)，且隨著CHA作用時間的延長，對CNE-1的抑制作用也增強，CHA作用到第6天時，抑制作用達到最佳，以后維持在較高的水平，呈時間依賴性(F=202.131，P<0.05，圖3)。再結(jié)合上一個結(jié)果，CHA從25 μmol/L到500 μmol/L各個濃度中，對CNE-1的生長增殖均有不同程度的抑制作用，但以100 μmol/L的CHA的抑制作用最強。為了篩選更確切的濃度，設計并比較了從75到150 μmol/L的CHA對CNE-1的生長抑制作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與其他濃度相比，以100 μmol/L在6 d時抑制作用最強(P<0.05)。時間與濃度之間無交互作用(F=0.733，P=0.768)。通過增殖率，可以初步判定CHA對CNE-1的最適抑制濃度為100 μmol/L，后續(xù)實驗選擇此濃度為實驗濃度。

圖3 綠原酸對人鼻咽癌細胞株CNE-1的增長抑制作用

Fig.3 Inhibition of CHA on CNE-1 growth

2.3 CHA對CNE-1細胞株的抑制作用 經(jīng)過TRAP PCR ELISA檢測結(jié)果顯示陰性對照組的端粒酶活性為0.037，陽性對照組的端粒酶活性為3.126。正常培養(yǎng)的CNE-1細胞株的端粒酶活性為3.076，而應用CHA(100 μmol/L)處理10 d后的CNE-1細胞株的端粒酶活性為1.621，盡管其仍高于正常細胞，但與陽性對照組或正常培養(yǎng)CNE-1(0 μmol/L CHA)相比均具有顯著性差異(P<0.01，圖4)。說明人鼻咽癌細胞株CNE-1應用100 μmol/L的CHA處理10 d后，能有效的抑制其生長，但其仍然具有較快的生長特性。對于一般的細胞，端粒酶的活性都小于1.5，可以認為是正常范圍。

圖4 端粒酶活性的測定

Fig.4 Detection of telomerase activity

100 μmol/L CHA作用10 d后，與陽性對照組相比，**P<0.01；與正常培養(yǎng)的(0 μmol/L)CNE-1相比，##P<0.01。

從Western blot的結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，p27蛋白在100 μmol/L的CHA處理后的人鼻咽癌細胞株CNE-1中有較明顯的表達，而在正常培養(yǎng)的CNE-1細胞中和陽性對照組(人纖維肉瘤細胞株HT1080)，p27蛋白幾乎檢測不到(圖5)，偶爾能看到淡淡的條帶，在實驗對照組中，應用雷公藤作用10 d的CNE-1細胞中，也能看到p27蛋白的表達(圖5)。說明在人鼻咽癌細胞株CNE-1中，抑癌基因p27的表達受到抑制，導致細胞癌性變，而應用100 μmol/L的CHA處理10 d后，p27的蛋白開始有較明顯的表達，說明CHA通過激活抑癌基因p27，從而達到抑制鼻咽癌細胞生長的目的。

圖5 綠原酸對CNE-1中p27表達的作用

Fig.5 Effects of CHA on the expression of p27 in CNE-1

泳道1：100 μmol/L CHA處理CNE-1；泳道2：0 μmol/L CHA處理CNE-1；泳道3：雷公藤處理CNE-1；泳道4：HT1080。

對于p27的Western blot的結(jié)果進行灰度掃描，再與β-actin的條帶灰度進行對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，p27在CNE-1(100 μmol/L的CHA處理組)中的表達量明顯高于CNE-1(0 μmol/L的CHA處理組)和陽性對照組(P<0.01)，但與雷公藤組相比沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05，表1)。

表1 p27表達的相對灰度值

Tab.1 Relative gray scale value of p27 expression (±s，n=4)

與陽性對照組相比，**P<0.01；與0 μmol/LCHA組相比，##P<0.01。

抑癌基因p16的表達水平和趨勢與p27基因相似，在100 μmol/L的CHA處理后的人鼻咽癌細胞株CNE-1中有較明顯的表達，而在正常培養(yǎng)的CNE-1細胞中和陽性對照組(人纖維肉瘤細胞株HT1080)，p16蛋白只有少量的表達，個別樣品幾乎檢測不到(圖6)，偶爾能看到淡淡的條帶，在實驗對照組中，應用雷公藤作用10 d的CNE-1細胞中，也能看到p16蛋白的表達(圖6)。

圖6 綠原酸對CNE-1中p16表達的作用

Fig.6 Effects of CHA on the expression of p16 in CNE-1

泳道1：100 μmol/L CHA處理CNE-1；泳道2：0 μmol/L CHA處理CNE-1；泳道3：雷公藤處理CNE-1；泳道4：HT1080。

對于p16的Western blot的結(jié)果進行灰度掃描，再與β-actin的條帶灰度進行對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，p16在CNE-1(100 μmol/L的CHA處理組)中的表達量明顯高于CNE-1(0 μmol/L的CHA處理組)和陽性對照組(P<0.01)，略高于雷公藤處理組，但二者間沒有統(tǒng)計學意義(表2)。

表2 p16表達的相對灰度值

Tab.2 Relative gray scale value of p16 expression (±s，n=4)

與陽性對照組相比，**P<0.01；與0 μmol/L的CHA組比，##P<0.01。

應用100 μmol/L的CHA處理后的人鼻咽癌細胞株CNE-1，Cyclin D1和CDK4的表達與對照組的CNE-1細胞相比，明顯呈現(xiàn)出下調(diào)的趨勢(圖7、圖8)。說明100 μmol/L的CHA對于鼻咽癌細胞株CNE-1具有抑制作用，其機制是通過延緩CNE-1細胞株通過G1期進入S期從而達到對CNE-1的生長抑制作用。

圖7 綠原酸對CNE-1 中CDK4表達的抑制作用

Fig.7 CHA’s inhibition on the expression of CDK4 in CNE-1

泳道1：100 μmol/L CHA處理CNE-1；泳道2：0 μmol/L CHA處理CNE-1；泳道3：雷公藤處理CNE-1；泳道4：HT1080。

圖8 綠原酸對CNE-1中Cyclin D1表達的抑制作用

Fig.8 CHA’s inhibition on the expression of Cyclin D1 in CNE-1

泳道1：100 μmol/L CHA處理CNE-1；泳道2：0 μmol/L CHA處理CNE-1；泳道3：雷公藤處理CNE-1；泳道4：HT1080。

對于cyclin D1和CDK4的Western blot的結(jié)果進行灰度掃描，再與β-actin的條帶灰度進行對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，cyclin D1和CDK4在CNE-1(100 μmol/L的CHA處理組)中的表達量明顯低于CNE-1(0 μmol/L的CHA處理組)和陽性對照組(P<0.01)，但與雷公藤處理組相比差異沒有統(tǒng)計學意義(表3)。

表3 cyclin D1和CDK4表達的相對灰度值的比較

Tab.3 Relative gray value scale of cyclin D1 and CDK4 expressions (±s，n=4)

與陽性對照組相比，**P<0.01；與0 μmol/L的CHA組比，##P<0.01。

3 討 論

中藥金銀花的特征活性成分為CHA，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、升高白細胞、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血壓、降血脂等作用[11-12]。文獻報道CHA對肉瘤180及艾氏腹水癌有明顯的細胞毒作用。本研究采用CCK-8吸收法觀察了CHA對鼻咽癌細胞株CNE-1的抑制率，從而進行初步篩選CHA的最適抑制濃度。從本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著CHA濃度的增加(從25 μmol/L到100 μmol/L)，CHA對CNE-1的抑制作用明顯增強，CHA濃度達到100 μmol/L時為最大值，若超過該值，抑制作用增加不明顯，甚至出現(xiàn)對鼻咽癌細胞株CNE-1的抑制作用降低的現(xiàn)象。說明一定濃度的CHA對于鼻咽癌細胞株CNE-1生長具有明顯的抑制作用。之后進一步對CHA的濃度進行篩選，通過繪制CNE-1細胞株的增殖率(相對生長曲線)對CHA的濃度進行精細篩選，最后確定其最佳的藥物濃度為100 μmol/L。從生長曲線上，從第1天到第6天，幾個不同濃度的CHA對于鼻咽癌細胞株CNE-1均具有抑制作用，其中終濃度達到100 μmol/L的CHA作用后的CNE-1細胞株，細胞增殖率最低。由此可以確定100 μmol/L是CHA發(fā)揮其抑制CNE-1細胞株的最適濃度，此后的實驗均采用這一濃度。

以往的研究發(fā)現(xiàn)，抑癌基因的表達下調(diào)，是多數(shù)惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的基礎。在肝癌、前列腺癌、子宮癌等組織中，抑癌基因p27[13]、p53[14]、p16[15]等表達明顯降低。鼻咽癌細胞株CNE-1中抑癌基因p27和p16的表達呈現(xiàn)出下調(diào)的趨勢，抑癌基因的表達受到強烈的抑制，導致癌基因的作用增強，引起正常細胞的惡性變。在本實驗中，人鼻咽癌細胞株CNE-1細胞系應用CHA(100 μmol/L)作用10 d后，p27基因和p16基因的表達量均明顯升高，說明CHA發(fā)揮其抑制CNE-1細胞株生長增殖的作用與增加抑癌基因的表達相關。也有研究表明，Cyclin D1、CDK4表達上調(diào)的程度與某些腫瘤的惡性程度呈正相關[16]。本實驗中檢測了人鼻咽癌細胞株CNE-1細胞周期蛋白和細胞周期素依賴激酶的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細胞周期蛋白Cyclin D1呈高表達，而CDK4也呈高表達的趨勢，說明細胞更加易于通過細胞周期的關卡，細胞增殖周期縮短，呈現(xiàn)出細胞癌性變的特性。在應用CHA(100 μmol/L)作用10d后，無論是cyclin D1還是CDK4均有明顯的下降，說明一定濃度的CHA(100 μmol/L)能顯著的降低細胞周期蛋白的表達，抑制CNE-1細胞快速的通過細胞關卡，達到抑制CNE-1增殖的作用。

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(編輯 韓維棟)

Effects of chlorogenic acid on cultured human nasopharyngealcarcinoma cell line CNE-1invitro

YAOSu-yan1,LIQuan-sheng2,ZHENGDe-yu3

(1.DepartmentofPathophysiology,Jinzhou121001; 2.DepartmentofOtorhinolaryngology,PanjinCentralHospital,Panjin124000;3.DepartmentofAnatomy,LiaoningMedicalCollege,Jinzhou121001,China)

Objective To explore the effects and mechanisms of chlorogenic acid (CHA) on the human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-1 culturedinvitro. Methods The human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-1 underwent resuscitation in sterile conditions. CHA was added into the CNE-1 culture media at the concentrations of 0, 25, 50, 100, 200 and 500 μmol/L for 7 days. The optimal concentration of CHA which inhibited the CNE-1 was determined by CCK8 inhibition experimentinvitro. After CNE-1 was cultured at the optimal concentration of CHA for 10 days, telomerase activation was detected by ELISA method. The expressions of anti-oncogene p27 and p16 as well as cyclin D1 and CDK4 were determined by Western blot. Results The optimal concentration of CHA for inhibiting CNE-1 cell line was 100 μmol/L determined by CCK8 inhibition experiment. Telomerase activation of CNE-1 was decreased to 1.621 after CNE-1 was treated with 100 μmol/L CHA for 10 days. The activation was significantly lower than that in the positive group and the normal cultured CNE-1 group (P<0.01). Anti-oncogene p27 and p16 were expressed in a low quantity after CNE-1 was treated with 100 μmol/L CHA for 10 days. But there was hardly any p27 or p16 expression in the positive group (HT1080) and the normal cultured CNE-1 group (CHA concentration being 0 μmol/L) determined by Western blot method. The expressions of cyclin D1 and cyclin dependence kinase 4 (CDK4) were lower after CNE-1

100 μmol/L CHA for 10 days than those in the HT1080 cell line and the normal cultured CNE-1 (CHA concentration being 0 μmol/L). Conclusion CHA has the functions of decreasing telomerase activation of CNE-1 cell line, increasing the anti-oncogene expression and decreasing cyclin D1 expression. The inhibitory function of CHA on CNE-1 cell line is realized by activating the expression of anti-oncogene and inhibiting the expression of cyclin D1.

chlorogenic acid; nasopharyngeal carcinoma; anti-oncogene; cyclin D; telomerase; p27; p16

2014-01-25

2014-05-10

遼寧省自然科學基金資助項目(No.2013022066，2013022048) Supported by the Natural Science Foundation of Liaoning Province (No.2013022066 and 2013022048)

鄭德宇，博士，碩士研究生導師，主要從事神經(jīng)退行性疾病的實驗治療方面的研究. E-mail: Zdy4673349@163.com

姚素艷(1971-)，碩士，主要從事阿爾茨海默病的實驗治療和中藥金銀花提取物綠原酸的藥理作用的研究. E-mail: ysyzdy@163.com

時間：2014-06-04 15∶01 網(wǎng)絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20140922.0828.002.html

R766.3

A

10.7652/jdyxb201406022