李曉帆 王玨 李玲

·實(shí)驗(yàn)研究·

麻瘋樹(shù)種子的HPLC圖譜研究

李曉帆 王玨 李玲

目的建立麻瘋樹(shù)種子的高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜。方法采用高效液相色譜法測(cè)定麻瘋樹(shù)種子95%乙醇提取物中的正丁醇層的圖譜, 并通過(guò)質(zhì)譜檢測(cè)對(duì)主要色譜峰進(jìn)行指認(rèn)。結(jié)果對(duì)HPLC圖譜中6個(gè)色譜峰進(jìn)行指認(rèn), 指認(rèn)出其中8種化合物, 占總峰面積的50.9%。結(jié)論對(duì)麻瘋樹(shù)種子藥材質(zhì)量的控制及綜合開(kāi)發(fā)利用提供了理論基礎(chǔ)。

麻瘋樹(shù)種子；正丁醇提取物；高效液相色譜

麻瘋樹(shù)(Jatrophacurcas L)為大戟科(Euphorbiaceae)麻瘋樹(shù)屬植物, 性味澀、微寒、有毒, 在民間常被用于消腫、鎮(zhèn)痛、止血、消毒、殺蟲(chóng)等［1］。據(jù)報(bào)道, 從麻瘋樹(shù)中分離得到萜類、香豆素類、黃酮類、蛋白質(zhì)多肽類、脂肪酸類等多種化合物［2］。本課題組從麻風(fēng)果中分離得到多種化合物, 已報(bào)道了活性部位中分離的6種木質(zhì)素類化合物及其抗氧化活性［3］。利用上述分離的化合物作為標(biāo)準(zhǔn)品, 本論文運(yùn)用現(xiàn)代HPLC分離手段對(duì)麻瘋樹(shù)種子的正丁醇提取物進(jìn)行了分離, 并對(duì)其中的特征色譜峰進(jìn)行了指認(rèn), 為后續(xù)質(zhì)量的控制研究奠定了一定的基礎(chǔ), 并對(duì)麻瘋樹(shù)種子綜合開(kāi)發(fā)利用提供了理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料 麻瘋樹(shù)種子采于云南, 由深圳市藥檢所熊英藥師鑒定為麻瘋樹(shù)(Jatrophacurcas L)的種子, 標(biāo)本保存于深圳清華大學(xué)研究院創(chuàng)新中藥及天然藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.2正丁醇提取物樣品制備 麻瘋樹(shù)的種子, 去除種皮, 使用95%乙醇2 h回流提取三次合并濾液減壓濃縮得到提取物浸膏。浸膏用水混懸, 依次用等體積石油醚、正丁醇萃取,減壓濃縮得到正丁醇層萃取物。取正丁醇層萃取物30.0 mg,加入1.0 ml甲醇超聲溶解, 上清液過(guò)微孔濾膜即得。

1.3對(duì)照品處理 取對(duì)照品(前期分離所得各化合物)1.0 mg,加入1.0 ml甲醇, 超聲溶解, 上清液過(guò)微孔濾膜即得單一對(duì)照品溶液。

1.4液質(zhì)條件 色譜柱：Phenomenex Luna C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm)；柱溫：30℃；泵：Agilent 1100Series；流動(dòng)相：A相, 1‰的乙酸水溶液；B相, 甲醇；梯度：0～50 min(35%～70% B)；流速：0.8 ml/min；進(jìn)樣量為20 μl。檢測(cè)器：DAD檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm。

質(zhì)譜條件：分流至質(zhì)譜的流速為0.4 ml/min, 毛細(xì)管溫度300℃, 毛細(xì)管電壓4.0 kV, 干燥氣流速 10 L/min, 霧化氣壓力 30 Psi(1 Psi=6.89476 kPa), 掃描范圍m/z：50～1000, 檢測(cè)模式：負(fù)離子。

2 結(jié)果

2.1主要色譜峰的指認(rèn) 按“1.2～1.4”的樣品處理方法和分離條件, 將麻瘋樹(shù)種子正丁醇提取物進(jìn)行HPLC 分析, 按“1.4”的液質(zhì)聯(lián)用條件, 對(duì)所得到的色譜圖中的主要色譜峰進(jìn)行解析。通過(guò)與前期研究中分離得到的對(duì)照品的色譜峰保留時(shí)間及其質(zhì)荷比［M-H］-相擬合, 從而確認(rèn)出峰物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。根據(jù)質(zhì)譜比對(duì)的結(jié)果, 共指認(rèn)得到6個(gè)色譜峰共計(jì)8種化合物［3］。見(jiàn)表1。

表1 麻瘋樹(shù)種子正丁醇提取物指認(rèn)成分及其比例

2.2主要成分量值關(guān)系 利用HPLC-MS 聯(lián)用的方法, 對(duì)正丁醇萃取物中所指認(rèn)的色譜峰進(jìn)行峰面積歸一化分析, 這8個(gè)被指認(rèn)出的色譜峰占總峰面積的50.9%。

3 討論

采用HPLC高效液相獲得了麻瘋樹(shù)種子95%乙醇提取物的正丁醇層部位的HPLC圖譜, 通過(guò)與分離得到的單體化合物的對(duì)比, 對(duì)色譜圖中的主要峰進(jìn)行了指認(rèn)。根據(jù)與分離得到的單體化合物進(jìn)行對(duì)照以及液-質(zhì)聯(lián)用等方法, 對(duì)該萃取層圖譜中6個(gè)色譜峰進(jìn)行了指認(rèn), 結(jié)果指認(rèn)出8個(gè)化合物。通過(guò)面積歸一法計(jì)算得到指認(rèn)出來(lái)的峰的面積占總峰面積的50.9%, 較系統(tǒng)的反映了該活性部位的主要物質(zhì)基礎(chǔ), 并為建立麻瘋樹(shù)種子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定了基礎(chǔ)。

［1］ 江蘇新中醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(下冊(cè)).上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 2001:2227.

［2］ Adolf W, Opferkuch HJ, Hecker E, et al.Irritant phorbol derivatives from four Jatropha species.Phytochem, 1988, 23(1): 129-132.

［3］ 李玲, 李曉帆, 吳慧星, 等.麻瘋樹(shù)種子中抗氧化活性成分的研究.中草藥, 2010, 41(12): 1932-1936.

2014-06-18］

518060 深圳大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/深圳市微生物基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(李曉帆)；深圳市藥品檢驗(yàn)所(王玨)；深圳清華大學(xué)研究院/深圳市創(chuàng)新中藥及天然藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(李玲)