王岳 劉敏彥 蘇平菊

高效液相色譜法測(cè)定參松養(yǎng)心膠囊中馬錢(qián)苷的含量

王岳 劉敏彥 蘇平菊

目的 建立采用高效液相色譜法測(cè)定參松養(yǎng)心膠囊中馬錢(qián)苷含量的方法。方法 采用C18色譜柱, 甲醇-乙腈-0.05%磷酸(5:9:86)為流動(dòng)相, 檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm。結(jié)果 馬錢(qián)苷在37.824～756.48 ng濃度范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。馬錢(qián)苷平均回收率為100.7%(n=9), RSD=1.47%。結(jié)論 該法操作簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、專(zhuān)屬性強(qiáng), 可作為參松養(yǎng)心膠囊的質(zhì)量控制方法。

高效液相色譜法；參松養(yǎng)心膠囊；馬錢(qián)苷；含量測(cè)定

參松養(yǎng)心膠囊由人參、麥冬、山茱萸、丹參等12味藥組成。益氣養(yǎng)陰, 活血通絡(luò), 清心安神。本品種收載于中國(guó)藥典2010年版第二增補(bǔ)本, 馬錢(qián)苷為處方中山茱萸的主要成分之一, 因此采用高效液相色譜法對(duì)本品馬錢(qián)苷的含量測(cè)定進(jìn)行了研究。

1 儀器與試藥

1.1儀器 高效液相色譜儀(Waters 2695)。

1.2試藥 馬錢(qián)苷對(duì)照品(購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)：111640-200503), 乙腈為色譜純, 其它試驗(yàn)所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相甲醇-乙腈-0.05%磷酸(5:9:86)；流速1 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm；理論塔板數(shù)按馬錢(qián)苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2供試品溶液制備 取供試品(批號(hào)100301), 傾出內(nèi)容物, 研細(xì), 約1 g, 精密稱(chēng)定, 精密加入甲醇25 ml, 稱(chēng)定重量,超聲提取30 min, 放冷, 再稱(chēng)定重量, 用甲醇補(bǔ)足減失的重量, 搖勻, 濾過(guò), 精密吸取續(xù)濾液10 ml, 加在中性氧化鋁柱(100～200目, 7 g, 內(nèi)徑1.5 cm, 干法裝柱)上, 用50%甲醇60 ml洗脫, 收集流出液和洗脫液, 蒸干, 殘?jiān)?0%甲醇溶解,并定容至25 ml, 搖勻, 即得。

2.3對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取馬錢(qián)苷對(duì)照品11.82 mg,置50 ml量瓶中, 加甲醇溶解, 并定容至刻度, 搖勻, 即得。再精密吸取上述對(duì)照品溶液2 ml, 置25 ml量瓶中, 加50%甲醇稀釋至刻度, 搖勻, 即得。濃度：18.912 μg/ml。

2.4陰性試驗(yàn) 按處方比例稱(chēng)取除山茱萸外的其它方中藥材, 按制備工藝制得陰性樣品, 按供試品溶液的方法進(jìn)行處理, 得陰性供試品溶液。分別吸取陰性供試品溶液、對(duì)照品溶液及供試品溶液, 按照選定測(cè)定條件進(jìn)行檢測(cè), 結(jié)果表明：在馬錢(qián)苷相應(yīng)的保留時(shí)間, 陰性樣品無(wú)相應(yīng)波峰出現(xiàn), 陰性樣品不干擾測(cè)定。

2.5線(xiàn)性范圍考察 精密吸取濃度為18.912 μg/ml的對(duì)照品溶液2 μl、5 μl、10 μl、20 μl、40 μl, 注入液相色譜儀, 測(cè)定峰面積見(jiàn)表1。以峰面積積分值為縱坐標(biāo), 進(jìn)樣量為橫坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。結(jié)果表明：馬錢(qián)苷濃度在37.824～756.48 ng范圍內(nèi)呈良好線(xiàn)性關(guān)系, 回歸方程為：y=1627.7326x=5711.6561, r=1.0000。

2.6進(jìn)樣精密度考察 吸取對(duì)照品溶液, 連續(xù)進(jìn)樣5次, 馬錢(qián)苷對(duì)照品5次測(cè)定的RSD為0.28%, 說(shuō)明儀器性能良好。

2.7供試品溶液穩(wěn)定性考察 精密吸取供試品溶液, 每隔一定時(shí)間進(jìn)樣, 考察了16 h內(nèi)的穩(wěn)定性, 結(jié)果見(jiàn)表2。

從以上結(jié)果可見(jiàn), 供試品峰面積 RSD值2.11%,表明在測(cè)定的16 h內(nèi), 供試品穩(wěn)定。

2.8重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批供試品(批號(hào)100301), 按高、中、低劑量取樣, 每個(gè)劑量取3份, 按供試品含量測(cè)定項(xiàng)下方法,進(jìn)行提取, 制備, 測(cè)定結(jié)果, 馬錢(qián)苷的平均含量1.01 mg/g, RSD為1.37%。表明方法重現(xiàn)性良好。

2.9回收率試驗(yàn) 采用加樣回收試驗(yàn), 取同一批供試品(批號(hào)100301)9份, 分別加入低、中、高3個(gè)濃度的馬錢(qián)苷對(duì)照品溶液, 按供試品含量測(cè)定項(xiàng)下方法, 進(jìn)行提取, 制備, 測(cè)定,計(jì)算回收率。馬錢(qián)苷的平均回收率為100.70%(n=9), RSD為1.47%, 結(jié)果見(jiàn)表3。

2.10樣品含量測(cè)定 按上述方法測(cè)定3批樣品含量, 結(jié)果見(jiàn)表4。

表1線(xiàn)性考察結(jié)果

表2穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3回收率試驗(yàn)結(jié)果

表4樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)含量測(cè)定中供試品溶液的制備方法進(jìn)行了研究。

3.1提取溶媒選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 50%甲醇、75%甲醇和甲醇對(duì)馬錢(qián)苷的提取含量影響不大, 但50%甲醇過(guò)濾較困難,以甲醇為提取溶媒時(shí)雜質(zhì)峰較75%甲醇小, 為更好地保護(hù)色譜柱, 因此選擇甲醇為提取溶媒。

3.2超聲提取時(shí)間考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 超聲提取15 min、 30 min和45 min對(duì)馬錢(qián)苷的含量影響不大, 但為保證充分提取, 選定超聲提取時(shí)間為30 min。

3.3中性氧化鋁用量考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 中性氧化鋁用量4～8 g對(duì)馬錢(qián)苷的含量影響不大, 但隨著中性氧化鋁用量的增加, 雜質(zhì)峰在減小, 7 g和8 g用量的雜質(zhì)峰基本相當(dāng), 因此選擇氧化鋁用量為7 g。

3.4洗脫溶媒用量考察結(jié)果表明, 采用50 ml 50%甲醇基本洗脫完全, 考慮到樣品批間差異, 為將馬錢(qián)苷充分洗脫完全,洗脫溶媒用量選定為60 ml。

［1］ 中華人民共和國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.2010年版.一部, 2010:597-598.

［2］ 中華人民共和國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.2010年版.第二增補(bǔ)本, 2013:51-53.

050035 石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司