黃洋 趙志龍

注射用泮托拉唑鈉細菌內(nèi)毒素檢查方法的建立

黃洋 趙志龍

目的建立注射用泮托拉唑鈉細菌內(nèi)毒素檢查方法。方法按《中國藥典》2005 年版二部附錄細菌內(nèi)毒素檢查法, 對不同批號的樣品進行了干擾試驗和細菌內(nèi)毒素檢查。結(jié)果注射用泮托拉唑鈉水溶液對TAL與細菌內(nèi)毒素的凝集反應有干擾作用, 經(jīng)稀釋后可排除干擾。結(jié)論本品不干擾濃度為2 mg/ml可采用細菌內(nèi)毒素檢查法進行質(zhì)量控制。

注射用泮托拉唑鈉；細菌內(nèi)毒素；鱟試劑；干擾試驗

泮托拉唑鈉為質(zhì)子泵抑制劑, 通過與胃壁細胞的H+-K+-ATP酶系統(tǒng)的兩個位點共價結(jié)合而抑制胃酸產(chǎn)生的最后步驟。該作用呈劑量依賴性, 并使基礎(chǔ)和刺激狀態(tài)下的胃酸分泌均受抑制。臨床用于十二指腸潰瘍、胃潰瘍、急性胃黏膜病變, 復合性胃潰瘍等急性上消化道出血; 根據(jù)國家藥典委員會關(guān)于注射劑質(zhì)量標準提高專項工作有關(guān)精神和“注射劑安全性檢查法應用指導原則(修訂稿)”的要求, 將“熱原”檢查法修訂為“細菌內(nèi)毒素檢查法”?！吨袊幍洹?2005 年版二部未對其細菌內(nèi)毒素進行控制, 為保證臨床用藥安全參照《中國藥典》2005 年版二部附錄細菌內(nèi)毒素檢查法進行干擾試驗研究, 為《中國藥典》2010 年版注射用泮托拉唑鈉細菌內(nèi)毒素檢查提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 HH-1型恒溫水浴鍋, ZH-2 型自動漩渦混合器。

1.2鱟試劑 湛江博康海洋生物有限公司, 靈敏度：0.5 EU/ml；湛江安度斯生物有限公司, 靈敏度：0.25 EU/ml；福州新北生化工業(yè)有限公司, 靈敏度：0.25 EU/ml。

1.3細菌內(nèi)毒素工作標準品 中國藥品生物制品檢定所 批號：2006-5 效價：120EU/支。

1.4細菌內(nèi)毒素檢查用水 湛江安度斯生物有限公司。①規(guī)格：50 ml ；批號：0510120；②規(guī)格：2 ml 批號：0706020。

2 試驗方法與結(jié)果

2.1供試品細茵內(nèi)毒素限值的確定 公式：L=K/M M為80 mg/60(kg·h), K為5 EU/(kg·h), 擬定限值L=3.75 EU/mg因此擬定本品內(nèi)毒素限值為 每1 mg注射用泮托拉唑鈉含內(nèi)毒素的量應＜3.75 EU。

2.2供試品有效稀釋倍數(shù)(MVD)的計算 公式C=λ/L其中L為供試品的細菌內(nèi)毒素限值3.75 EU/mg, λ為鱟試劑標示靈敏度, 目前市售鱟試劑靈敏度λ通常在0.5～0.06 EU/ ml, 則供試品對應的有效稀釋濃度為：C0.5=0.5 EU/ml /3.75 EU/mg = 0.133mg/ml；C0.25=0.25 EU/ml /3.75 EU/mg =0.067 mg/ ml；C0.125=0.125 EU/ml /3.75 EU/mg =0.033 mg/ml；C0.06=0.06 EU/ml /3.75 EU/mg =0.016 mg/ml。

2.3細菌內(nèi)毒素干擾試驗預試驗 由于供試品的4 mg/ml稀釋液加入鱟試劑后, 溶液顯混濁, 所以預試驗供試液濃度采用2 mg/ml的濃度, 該濃度加入鱟試劑后溶液澄清。按《中國藥典》2005年版二部附錄(Ⅺ E)—細菌內(nèi)毒素檢查法檢查。陰性對照為細菌內(nèi)毒素檢查用水, 陽性對照為1.0 EU/ml內(nèi)毒素溶液, 供試品陽性對照為以供試液稀釋的1.0 EU/ml內(nèi)毒素溶液, 結(jié)果表明, 注射用泮托拉唑鈉在稀釋至2 mg/ml時,使用兩個廠家的鱟試劑檢查均無干擾。

2.4干擾試驗 按《中國藥典》2005年版附錄(Ⅺ E)-細菌內(nèi)毒素檢查法進行干擾試驗。將細菌內(nèi)毒素工作標準品用細菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋至1.0、0.5、0.25、0.125 EU/ml；根據(jù)預試驗結(jié)果, 確定將供試品稀釋至2 mg/ml, 代替細菌內(nèi)毒素檢查用水將細菌內(nèi)毒素工作標準品稀釋至上述濃度, 結(jié)果見表1。

正式干擾試驗表明：ES均在0.5～2λ, 且Et均在0.5～2 ES；確認注射用泮托拉唑鈉的細菌內(nèi)毒素檢查在2 mg/ml以下濃度時進行, 無干擾作用。

2.5細菌內(nèi)毒素檢查 按《中國藥典》2005年版二部附錄Ⅺ E 細菌內(nèi)毒素檢查法檢查。陰性對照為細菌內(nèi)毒素檢查用水, 陽性對照為0.5 EU/ml內(nèi)毒素溶液, 供試液為0.067 mg/ml的供試品稀釋液, 供試品陽性對照為以供試液稀釋的0.5 EU/ ml內(nèi)毒素溶液, 結(jié)果見表2。

表1注射用泮托拉唑鈉干擾試驗(λ=0.5 EU/ml)

3 討論

本品濃度為2 mg/ml或以下濃度時均不干擾細菌內(nèi)毒素檢查；內(nèi)毒素擬定限值為每1 mg中含細菌內(nèi)毒素量應＜3.75 EU；按此標準檢驗, 本品細菌內(nèi)毒素檢查均符合規(guī)定。注射用泮托拉唑鈉臨床每次靜脈注射最大用量為80 mg。經(jīng)對12個生產(chǎn)單位20批產(chǎn)品進行干擾試驗, 確認本品在2 mg/ml或以下濃度下對細菌內(nèi)毒素檢查無干擾；根據(jù)擬定限值對20批樣品進行細菌內(nèi)毒素檢查, 結(jié)果均符合規(guī)定。綜合以上結(jié)果, 擬將注射用泮托拉唑鈉熱原檢查項修改為細菌內(nèi)毒素檢查, 本品在2 mg/ml濃度下不干擾細菌內(nèi)毒素檢查, 本試驗為《中國藥典》2010 年版修訂時增加注射用泮托拉唑鈉細菌內(nèi)毒素檢查項提供了依據(jù)。

Establishment of bacterial endotoxin test of pantoprazole sodium for injection

HUANG Yang, ZHAO Zhilong.
Jinzhou Institute for Food and Drug Control, Jinzhou 121000, China

ObjectiveTo establish a method for bacterial endotoxin test of pantoprazole sodium for injection.MethodsAccording to appendix of "Chinese pharmacopoeia" 2005 edition, the interference test and bacterial endotoxin test of different batches of samples were carried out.ResultsThere was interference in the agglutinate reaction between the sample and the relative TAL with pantoprazole Sodium for Injection, and the interference was eliminated after diluted.ConclusionThe noninterference concentration of pantoprazole sodium for injection is 2 mg/ml.The bacterial endotoxin test can be used for the quality control of pantoprazole sodium for injection.

Pantoprazole sodium for injection; Bacterial endotoxin; TAL; Interference test

121000 錦州市食品藥品檢驗所(黃洋)；遼寧省食品藥品檢驗所(趙志龍)