顏升等

摘要：為了規(guī)范中藥藥材種子市場(chǎng)，保證梔子種子的質(zhì)量，研究建立梔子種子的檢驗(yàn)方法。參考國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程和中國(guó)農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程的方法，對(duì)梔子種子扦樣、真實(shí)性、凈度、發(fā)芽率、含水量、生活力及千粒質(zhì)量7項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行研究，確定可控指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法。結(jié)果表明：扦樣時(shí)種子批的最大總質(zhì)量可選為5 000 g，送檢樣品的質(zhì)量為 800 g；在進(jìn)行凈度、水分和真實(shí)性分析時(shí)扦樣樣品的質(zhì)量不應(yīng)超過(guò)100 g。其中的真實(shí)性鑒定可利用梔子種子外觀結(jié)構(gòu)、大小和顏色等形態(tài)特征進(jìn)行；凈度分析可按照GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 總則》中的相關(guān)方法進(jìn)行；發(fā)芽率的測(cè)定用濾紙，在30 ℃下進(jìn)行恒溫處理；種子含水量的測(cè)定在將未粉碎的種子高溫烘干1.5 h后進(jìn)行；生活力的測(cè)定用BTB法，浸種時(shí)間為2 h，濃度為0.1%，顯色時(shí)間為40 min；千粒質(zhì)量的測(cè)定用五百粒法。綜合研究結(jié)果，本規(guī)程可用作梔子種子質(zhì)量檢驗(yàn)的依據(jù)。

關(guān)鍵詞：梔子；種子；檢驗(yàn)規(guī)程

中圖分類(lèi)號(hào)： S339.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）03-0248-04

梔子又名黃梔子、山梔，為茜草科植物梔子（Gardenia jasminoides Ellis）的成熟干燥果實(shí)，具有瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒等功效，有著非常廣闊的市場(chǎng)前景[1-2]。梔子果實(shí)為倒卵形或橢圓形蒴果，熟時(shí)為金黃色或橘紅色，有5～8條翅狀縱棱，頂端有5～8條長(zhǎng)度與果體幾乎相等的窄披針形宿存花萼。梔子蒴果中含有種子多數(shù)，并與果肉緊密相連。梔子的繁殖方法主要為壓條或扦插，也可用種子繁殖。

中藥材種子大多是藥材生產(chǎn)中的副產(chǎn)品。由于我國(guó)無(wú)種子的質(zhì)量監(jiān)督、檢驗(yàn)和管理機(jī)構(gòu)[3]，絕大多數(shù)中藥材種子缺乏質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程和質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，而種子的檢驗(yàn)和質(zhì)量分級(jí)又是保證種子質(zhì)量的主要手段。本研究在綜合分析當(dāng)前種子檢驗(yàn)研究成果的基礎(chǔ)上，參照《1996國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程》[4]和GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 總則》對(duì)梔子種子的扦樣方法以及代表種子質(zhì)量的一系列指標(biāo)（包括種子真實(shí)性、凈度、發(fā)芽率、含水量、生活力、千粒質(zhì)量等）進(jìn)行了檢驗(yàn)和鑒定方法的研究，并在此基礎(chǔ)上制定了梔子種子的檢驗(yàn)規(guī)程。根據(jù)本檢驗(yàn)規(guī)程的試驗(yàn)結(jié)果，能夠達(dá)到對(duì)梔子種子質(zhì)量進(jìn)行客觀、科學(xué)評(píng)價(jià)的目的，從而可以為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中梔子的栽培與種植提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

本試驗(yàn)各個(gè)部分中所用的儀器及試劑材料見(jiàn)表1。

試驗(yàn)用藥材樣品為作者于2012年10—11月從江西省樟樹(shù)市、安徽省亳州市采集或直接從藥農(nóng)處購(gòu)買(mǎi)所得，經(jīng)過(guò)江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源學(xué)科組葛菲教授鑒定為茜草科植物梔子的干燥成熟果實(shí)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 扦樣 根據(jù)梔子種子的市場(chǎng)流通情況、生產(chǎn)水平和單次可能交易量，以及種子的形狀、大小、表面光滑度、散落性等因素[5]，查找并參照GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物檢驗(yàn)規(guī)程 總則》中所列的124種作物品種，確定梔子種子批的最大質(zhì)量和送驗(yàn)樣品的最小質(zhì)量，其中送驗(yàn)樣品的質(zhì)量因檢測(cè)項(xiàng)目的不同而不同。

1.2.2 真實(shí)性鑒定 手工隨機(jī)選取400粒種子，設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)100粒。采用種子外觀形態(tài)法[6]，通過(guò)對(duì)種子形態(tài)、大小、顏色等特征的觀察來(lái)鑒定檢驗(yàn)種子的真實(shí)性，結(jié)果用平均值表示，并保留1位小數(shù)。

1.2.3 凈度分析 凈度分析參照GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 總則》的方法執(zhí)行。所遵循的基本原則為：大于原大小的一半，并附著種皮的種子定義為凈種子；質(zhì)量大于種子質(zhì)量10倍以上的雜質(zhì)，定義為重型雜質(zhì)，其他破損或受損碎片列為雜質(zhì)。試樣稱重和百分率的計(jì)算精確度參照《1996國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程》[4]。

1.2.4 發(fā)芽試驗(yàn) 以2批不同產(chǎn)地的種子為試驗(yàn)材料，設(shè)計(jì)不同溫度、不同發(fā)芽床的發(fā)芽試驗(yàn)，觀察種子的發(fā)芽規(guī)律，總結(jié)得出最適的發(fā)芽溫度和發(fā)芽床種類(lèi)[7]。處理過(guò)程為：將2個(gè)產(chǎn)地的梔子種子于25 ℃恒溫浸種1 d后置于光照培養(yǎng)箱中，分別設(shè)置30、25、20、15 ℃恒溫處理和30 ℃/20 ℃、25 ℃/15 ℃變溫處理共6個(gè)發(fā)芽溫度處理。分別采用蛭石、紗布、濾紙、沙子等4種材料作為發(fā)芽床。每個(gè)處理重復(fù)3次，每次25粒種子。相關(guān)計(jì)算公式為：

發(fā)芽率=發(fā)芽種子數(shù)/供測(cè)種子數(shù)×100%

發(fā)芽勢(shì)=發(fā)芽過(guò)程中日發(fā)芽種子數(shù)的最高峰數(shù)/供測(cè)種子數(shù)×100%

1.2.5 水分的測(cè)定 種子含水量是按規(guī)定程序把種子樣品烘干后所失去的質(zhì)量占供檢樣品原始質(zhì)量的比例。本試驗(yàn)對(duì)比了低溫整粒法與高溫整粒法、整粒法與初磨法對(duì)梔子種子含水量測(cè)定的影響。

低溫整粒法：用小匙充分?jǐn)嚢铇悠?，并從中取?份種子樣品，對(duì)2份種子樣本均設(shè)9個(gè)時(shí)間處理：15、30、45、60、90、120、180、240、300 min，各3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5 g。預(yù)先將樣品盒烘干、冷卻、稱重，并記下盒號(hào)，然后放入試樣，再稱重（精確至0.001 g）；使烘箱通電并預(yù)熱至110～115 ℃，將樣品攤平放入烘箱內(nèi)的上層，迅速關(guān)閉烘箱門(mén)，使箱溫在5～10 min內(nèi)回至（103±2） ℃時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)；到預(yù)定時(shí)間后，戴上手套在箱內(nèi)蓋好盒蓋，取出后放入干燥器內(nèi)冷卻至室溫并稱重；根據(jù)烘干后失去的質(zhì)量計(jì)算種子水分，并通過(guò)所得數(shù)據(jù)選擇烘干時(shí)間。

高溫整粒法：方法步驟與低溫整粒法基本相同，區(qū)別是高溫整粒法要將烘箱預(yù)熱至140～145 ℃，打開(kāi)并關(guān)閉箱門(mén)5～10 min 后，烘箱內(nèi)的溫度須保持在130～133 ℃。對(duì)2份種子樣品共設(shè)置了8個(gè)時(shí)間處理：15、30、45、60、90、120、180、400 min，根據(jù)烘干后失去的質(zhì)量計(jì)算種子的水分百分率。

整粒法和初磨法的步驟分別為：隨機(jī)稱取5 g梔子種子，1份進(jìn)行研磨處理，記為粗磨法；另1份不作處理，記為整粒法。采用低溫整粒法測(cè)定水分，設(shè)置3個(gè)重復(fù)。endprint

1.2.6 生活力的測(cè)定 分別取2批不同產(chǎn)地的梔子種子 2 g，用濃硫酸酸蝕5min后去除外種皮，以避免種皮表面色素對(duì)染色觀察的干擾。處理后的種子分別用四氮唑染色法（TTC法） 、溴麝香草酚藍(lán)法（BTB法）、紅墨水染色法進(jìn)行生活力的測(cè)定。

TTC法：用單面刀片沿種胚中心線將種子縱切為兩半，取帶種胚的一半放入盛有四氮唑溶液的小燒杯中，四氮唑的濃度分別為0.1%、1.0%；放入30 ℃恒溫箱中，在黑暗下染色，染色時(shí)間分別為4、11、16、25 h。另外分別取2組種子，每組25粒，沸水蒸煮10 min后分別在四氮唑濃度0.1%、1.0% 條件下染色，作為空白對(duì)照。染色結(jié)束后，倒去四氮唑溶液，用雙蒸水清洗。由于TTC能夠?qū)⒒罘N子的胚染成紅色，對(duì)照死種子則不能著色，因此根據(jù)種子胚的著色程度、部位與空白對(duì)照的比較來(lái)鑒定種子的生活力，并計(jì)算有生活力種子的百分率。每個(gè)處理設(shè)4個(gè)重復(fù)。

BTB法：將經(jīng)濃硫酸處理的2批種子均隨機(jī)分為2組，每組25粒，一組用沸水蒸煮10 min，作為空白對(duì)照（死種子），另一組則不作處理。在培養(yǎng)皿中備好0.1% BTB凝膠，分別把2組種子整齊地包埋于凝膠中后放入30 ℃恒溫箱中染色，染色時(shí)間分別為10、20、40、60 min。觀察種子周?chē)霈F(xiàn)黃色暈圈的情況，出現(xiàn)暈圈表示有活力[8]。每個(gè)處理設(shè)4個(gè)重復(fù)。

紅墨水法：將經(jīng)濃硫酸處理的2批種子均隨機(jī)分為2組，每組25粒，取一組用沸水蒸煮10 min，作為空白對(duì)照（死種子），將2組種子用單面刀片沿種胚中心線縱切為二半，取帶種胚的一半放入盛有5%紅墨水溶液的小燒杯中。將燒杯放入30 ℃恒溫箱中染色，染色時(shí)間分別為10 min、30 min、1 h、2 h。由于活種子胚不著色或著色很淺，而死種子種胚的著色度和胚乳相同，根據(jù)這個(gè)原理鑒定種子的生活力，并計(jì)算百分率。每個(gè)處理設(shè)4個(gè)重復(fù)。

1.2.7 質(zhì)量測(cè)定 對(duì)梔子種子試樣采用百粒法、五百粒法和千粒法進(jìn)行質(zhì)量測(cè)定[9]。將凈度分析后所得的全部?jī)舴N子混勻后進(jìn)行如下分組：100粒種子，8個(gè)重復(fù)；500粒種子，3個(gè)重復(fù)；1000粒種子，2個(gè)重復(fù)。分組后稱重，小數(shù)位數(shù)的規(guī)定按照ISTA的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[10]。分別計(jì)算百粒法、五百粒法、千粒法的平均質(zhì)量、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)，并計(jì)算出各方法換算成 1 000 粒種子的質(zhì)量，重復(fù)10次。

2 結(jié)果與分析

2.1 扦樣

本研究采用的各批次種子批的最大總質(zhì)量為5 000 g，送檢樣品的質(zhì)量為800 g，進(jìn)行凈度分析、水分測(cè)定和真實(shí)性分析時(shí)扦樣質(zhì)量分別為80、50、80 g。

2.2 真實(shí)性鑒定

通過(guò)種子外觀形態(tài)法，筆者總結(jié)出梔子種子的形態(tài)特征，詳見(jiàn)表2。這些特征可以用作梔子種子真實(shí)性鑒定的形態(tài)指標(biāo)。

2.3 凈度分析

梔子種子凈度分析的主要難點(diǎn)在于劃分凈種子、重型雜質(zhì)、雜質(zhì)、其他植物種子。通過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，本研究所檢驗(yàn)的樣品中均無(wú)其他植物種子，因此不用記錄此項(xiàng)檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果表明，各批次凈種子比率97.82%，雜質(zhì)比率2.18%，增失差0.05%<5%，因此認(rèn)為凈度分析結(jié)果有效，本分析方法和程序切實(shí)可行。

2.4 發(fā)芽試驗(yàn)

不同溫度和發(fā)芽床對(duì)梔子種子的萌發(fā)有影響，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可見(jiàn)：梔子種子在較高溫度時(shí)的萌發(fā)效果較好，在25 ℃以上的溫度時(shí)有較高的發(fā)芽率；在25 ℃以下時(shí)，發(fā)芽勢(shì)很低，且溫度越低，發(fā)芽率也越低。對(duì)比30 ℃/20 ℃變溫處理和30 ℃恒溫處理，兩者的發(fā)芽率大都比較接近，但發(fā)芽勢(shì)相差較大。此外，研究發(fā)現(xiàn)恒溫處理的出芽比較早，能大致反映出梔子種子的整體發(fā)芽狀況。因此綜合研究結(jié)果，梔子種子發(fā)芽的適宜溫度條件為30 ℃恒溫。

2.5 水分測(cè)定

用低溫整粒法和高溫整粒法對(duì)種子水分進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知，整粒梔子種子在低溫下烘干4～5 h后，失水量保持穩(wěn)定，綜合2個(gè)產(chǎn)地各批次種子的情況，低溫烘干法的時(shí)間以4h為宜。整粒梔子種子在高溫烘干1.5 h后，失水量保持穩(wěn)定，且在1.5～4 h的烘干條件下失水量變化不明顯。綜合2個(gè)產(chǎn)地的種子情況，高溫烘干法的時(shí)間以1.5 h為宜。

整粒法和初磨法對(duì)梔子種子水分進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖2可知，雖然粗磨之后的種子失水量略高于不處理的種子，但差異不顯著。

此外，整粒法和初磨法檢測(cè)到的梔子種子失水量約為10%，與整粒種子經(jīng)高溫烘干1.5 h和低溫烘干4 h的種子失水量相近，且?guī)追N方法的測(cè)定值之間差異不顯著?？紤]到低溫烘干法所需時(shí)間較長(zhǎng)，且粉碎種子工作量較大，因此選擇整粒種子高溫烘干1.5 h作為梔子種子含水量測(cè)定方法。

2.6 生活力測(cè)定

分別用1%TTC法、0.1%TTC法、0.1%BTB法、5%紅墨水法對(duì)梔子種子生活力進(jìn)行檢測(cè)，染色效果見(jiàn)表4，結(jié)果表明這幾種方法均能成功地將活的梔子種子染色。

2.6.1 有生活力種子的比率 用不同方法測(cè)定梔子種子生活力的比率見(jiàn)表4。檢測(cè)結(jié)果表明，1%TTC染色法最靈敏，但需要較長(zhǎng)時(shí)間才能將梔子的活種子著色；其次為0.1%TTC；5%紅墨水染色法和0.1%BTB染色法所需時(shí)間較短。

2.6.2 最佳生活力測(cè)定方法的確定 以種子生活力測(cè)定數(shù)值高低作為衡量染色法效果的標(biāo)準(zhǔn)。表4結(jié)果表明：用TTC染色法測(cè)定生活力時(shí)，最佳TTC濃度為0.1%，染色的最適溫度為30 ℃，時(shí)間16 h；濃度為0.1% BTB法染色的最佳染色時(shí)間為40 min；濃度為5%紅墨水法染色的最適染色時(shí)間為 1 h。但是在利用紅墨水法對(duì)種子生活力進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，對(duì)活種子的判斷受操作過(guò)程中種子切口的影響，因?yàn)榍锌谔幍姆N子細(xì)胞很容易被染成紅色，并且由于梔子種子較小，因此容易造成判斷失誤而不宜采用。對(duì)比“2.4”節(jié)的相關(guān)數(shù)據(jù)，BTB 法所測(cè)的生活力數(shù)據(jù)均高于發(fā)芽率，而TTC法所測(cè)的生活力數(shù)據(jù)則低于發(fā)芽率，因此本試驗(yàn)采用BTB法，取0.1% BTB染色40 min為最佳方案。endprint

2.7 質(zhì)量測(cè)定

對(duì)各梔子種子質(zhì)量測(cè)定方法的比較分析見(jiàn)表5。由于梔子種子體積比較小，在用百粒法測(cè)定梔子種子千粒質(zhì)量時(shí)，10組當(dāng)中有5組變異系數(shù)大于4.0，系統(tǒng)誤差比較大。而利用五百粒法和千粒法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，系統(tǒng)誤差影響較小，因此排除百粒法。進(jìn)一步比較千粒法和五百粒法可知，變異系數(shù)均較小，且所得千粒質(zhì)量很接近。用SPSS 11.0軟件分析五百粒法和千粒法測(cè)定的種子千粒質(zhì)量結(jié)果，沒(méi)有顯著性差異，但是由于五百粒法更易操作，因此考慮到工作量和梔子種子屬于小種子的特點(diǎn)，選擇采用500粒法測(cè)定梔子種子千粒質(zhì)量。

3 討論與結(jié)論

梔子種皮呈棕紅色，為果肉中所含的色素成分，用清水不易洗凈，因此在進(jìn)行生活力測(cè)定時(shí)，會(huì)影響TTC法和紅墨水法染色結(jié)果的觀察。筆者采用濃硫酸酸蝕5 min的方法去除梔子外種皮便可以消除其影響，但此方法較為繁瑣，且濃硫酸處理有可能殺死種子而造成種子腐爛。BTB法測(cè)定梔子種子生活力的原理是種子活細(xì)胞通過(guò)呼吸作用產(chǎn)生的CO2溶于水，從而增加了胚周?chē)h(huán)境的酸度，因此BTB試劑可以測(cè)定酸度的變化，使活種子周?chē)沫傊z出現(xiàn)黃暈現(xiàn)象，從而可以檢測(cè)出有生活力的種子；同時(shí)BTB法不需要濃硫酸酸蝕，簡(jiǎn)便了操作，測(cè)定結(jié)果與種子發(fā)芽試驗(yàn)結(jié)果基本一致，因此采用BTB染色法作為最佳生活力測(cè)定方法。

種子中的水分按特性可分為自由水、束縛水和化合水[11]。自由水最易分離，它是種子貯藏時(shí)影響種子壽命的一個(gè)重要因素，因此在進(jìn)行種子含水量測(cè)定時(shí)主要測(cè)定自由水。種子形成過(guò)程中的水分來(lái)自植株，但被采收后，如果種子所處環(huán)境中的空氣相對(duì)濕度高，種子便從空氣中吸收水分使含水量上升。因此在進(jìn)行含水量測(cè)定時(shí)，應(yīng)選擇在空氣相對(duì)濕度低的房間內(nèi)進(jìn)行。在放冷至室溫的過(guò)程中應(yīng)把樣品放在干燥器中，且每次冷卻至室溫的時(shí)間應(yīng)保持一致。

種子凈度分析后的樣品將被用于測(cè)定種子生活力、發(fā)芽率、純度、重量[12]。由于某些種子存在缺陷，明顯小于正常種子，甚至小于正常種子的一半，在篩理的過(guò)程中與細(xì)小雜質(zhì)同時(shí)被篩下來(lái)，因此認(rèn)為此類(lèi)種子為一般雜質(zhì)。為了確保樣品凈度分析的準(zhǔn)確性，在篩理之后，將篩內(nèi)物質(zhì)嚴(yán)格地逐粒區(qū)分，同時(shí)借助放大鏡、毛刷等工具對(duì)區(qū)分后的不同部分進(jìn)行嚴(yán)格檢查，以減少誤差，避免樣品中各成分的缺失。不同大小、質(zhì)量的種子，重型雜質(zhì)的大小和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也不一樣，在本試驗(yàn)中，將質(zhì)量大于種子10倍以上的雜質(zhì)列為重型雜質(zhì)[13]。總的來(lái)說(shuō)，操作人員必須熟悉種子知識(shí)，嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作[14]。

筆者利用本研究建立的梔子種子檢驗(yàn)規(guī)程，先后測(cè)定了其他幾份不同產(chǎn)地梔子種子的發(fā)芽率、凈度和生活力，盡管結(jié)果表明不同產(chǎn)地和成熟度的種子，在發(fā)芽率、凈度和生活力等指標(biāo)上的測(cè)定結(jié)果有較大差異，但本檢驗(yàn)規(guī)程中各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)方法廣泛適用于梔子種子的質(zhì)量控制，能夠?yàn)橹兴幉臈d子的規(guī)范化生產(chǎn)提供依據(jù)。

本研究通過(guò)一系列試驗(yàn)確定了梔子種子檢驗(yàn)規(guī)程的合理操作方法，包括扦樣、真實(shí)性、凈度、發(fā)芽率、含水量、生活力和千粒質(zhì)量7項(xiàng)指標(biāo)。其中扦樣時(shí)種子批的最大總質(zhì)量可選為 5 000 g，送檢樣品質(zhì)量800 g；凈度、水分和真實(shí)性分析時(shí)扦樣樣品的質(zhì)量應(yīng)不超過(guò)100 g。在試驗(yàn)中可利用梔子種子外觀結(jié)構(gòu)、大小和顏色等形態(tài)特征進(jìn)行真實(shí)性鑒定，凈度分析可按照按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 總則》的方法進(jìn)行。發(fā)芽率測(cè)定最佳方法為用濾紙作為發(fā)芽床，30 ℃恒溫處理。種子含水量測(cè)定用不粉碎的種子高溫烘干1.5 h。生活力測(cè)定用BTB法，浸種時(shí)間2 h，濃度0.1%，顯色時(shí)間40 min。千粒質(zhì)量的測(cè)定用五百粒法。

參考文獻(xiàn)：

[1]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2005年版（一部）[M]. 北京：化工工業(yè)出版社，2005：231.

[2]Abdullah G R，Al-Khateeb A A，Serage M. Effect of different concentrations of growth regulators on Gardenia jasminoides cv. veitchii micropropagation by tissue culture technique[J]. Journal of Agriculture and Marine Sciences，2003（8）： 35-40.

[3]張麗萍，楊世林，楊春清，等. 我國(guó)藥材種子種苗產(chǎn)業(yè)存在的問(wèn)題及其對(duì)策[J]. 中國(guó)中藥雜志，1999，24（10）：3-5.

4]國(guó)際種子檢驗(yàn)協(xié)會(huì)（ISTA）. 1996國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1999.

[5]張 婕，魏建和，隋 春，等. 柴胡種子檢驗(yàn)規(guī)程研究[J]. 種子，2011，30（6）：112-118.

[6]劉長(zhǎng)江. 種子的形態(tài)鑒定：Ⅰ形態(tài)鑒定方法[J]. 種子，1989（3）：51-53，42.

[7]董青松，顏鐘亞，白隆華，等. 雞骨草種子發(fā)芽試驗(yàn)條件的研究[J]. 種子，2006，25（2）：81-84.

[8]孫榮進(jìn)，杜 婷，楊光義，等. 蔓荊子種子生活力的測(cè)定及其與發(fā)芽率的相關(guān)性研究[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（17）：130-133.

[9]GB/T 3543.3—1995. 農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 凈度分析[M]. 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，1995：12-13.

[10]浙江大學(xué)種子科學(xué)中心譯.國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程[M]. 北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1976：9-11.

[11]閆志剛，馬小軍，董青松，等. 青蒿種子檢驗(yàn)規(guī)程研究[J]. 中國(guó)種業(yè)，2011（1）：37-40.

[12]何建華. 種子凈度分析的三個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)[J]. 種子，2013，32（2）：124-126.

[13]董青松，何俊兵，蒙愛(ài)東，等. 廣州相思子種子檢驗(yàn)規(guī)程研究[J]. 種子，2012，31（5）：123-125.

[14]馬玉光，曹改萍. 對(duì)部分農(nóng)作物《種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》修訂的商榷[J]. 中國(guó)種業(yè)，2013（2）：37-38.endprint

2.7 質(zhì)量測(cè)定

對(duì)各梔子種子質(zhì)量測(cè)定方法的比較分析見(jiàn)表5。由于梔子種子體積比較小，在用百粒法測(cè)定梔子種子千粒質(zhì)量時(shí)，10組當(dāng)中有5組變異系數(shù)大于4.0，系統(tǒng)誤差比較大。而利用五百粒法和千粒法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，系統(tǒng)誤差影響較小，因此排除百粒法。進(jìn)一步比較千粒法和五百粒法可知，變異系數(shù)均較小，且所得千粒質(zhì)量很接近。用SPSS 11.0軟件分析五百粒法和千粒法測(cè)定的種子千粒質(zhì)量結(jié)果，沒(méi)有顯著性差異，但是由于五百粒法更易操作，因此考慮到工作量和梔子種子屬于小種子的特點(diǎn)，選擇采用500粒法測(cè)定梔子種子千粒質(zhì)量。

3 討論與結(jié)論

梔子種皮呈棕紅色，為果肉中所含的色素成分，用清水不易洗凈，因此在進(jìn)行生活力測(cè)定時(shí)，會(huì)影響TTC法和紅墨水法染色結(jié)果的觀察。筆者采用濃硫酸酸蝕5 min的方法去除梔子外種皮便可以消除其影響，但此方法較為繁瑣，且濃硫酸處理有可能殺死種子而造成種子腐爛。BTB法測(cè)定梔子種子生活力的原理是種子活細(xì)胞通過(guò)呼吸作用產(chǎn)生的CO2溶于水，從而增加了胚周?chē)h(huán)境的酸度，因此BTB試劑可以測(cè)定酸度的變化，使活種子周?chē)沫傊z出現(xiàn)黃暈現(xiàn)象，從而可以檢測(cè)出有生活力的種子；同時(shí)BTB法不需要濃硫酸酸蝕，簡(jiǎn)便了操作，測(cè)定結(jié)果與種子發(fā)芽試驗(yàn)結(jié)果基本一致，因此采用BTB染色法作為最佳生活力測(cè)定方法。

種子中的水分按特性可分為自由水、束縛水和化合水[11]。自由水最易分離，它是種子貯藏時(shí)影響種子壽命的一個(gè)重要因素，因此在進(jìn)行種子含水量測(cè)定時(shí)主要測(cè)定自由水。種子形成過(guò)程中的水分來(lái)自植株，但被采收后，如果種子所處環(huán)境中的空氣相對(duì)濕度高，種子便從空氣中吸收水分使含水量上升。因此在進(jìn)行含水量測(cè)定時(shí)，應(yīng)選擇在空氣相對(duì)濕度低的房間內(nèi)進(jìn)行。在放冷至室溫的過(guò)程中應(yīng)把樣品放在干燥器中，且每次冷卻至室溫的時(shí)間應(yīng)保持一致。

種子凈度分析后的樣品將被用于測(cè)定種子生活力、發(fā)芽率、純度、重量[12]。由于某些種子存在缺陷，明顯小于正常種子，甚至小于正常種子的一半，在篩理的過(guò)程中與細(xì)小雜質(zhì)同時(shí)被篩下來(lái)，因此認(rèn)為此類(lèi)種子為一般雜質(zhì)。為了確保樣品凈度分析的準(zhǔn)確性，在篩理之后，將篩內(nèi)物質(zhì)嚴(yán)格地逐粒區(qū)分，同時(shí)借助放大鏡、毛刷等工具對(duì)區(qū)分后的不同部分進(jìn)行嚴(yán)格檢查，以減少誤差，避免樣品中各成分的缺失。不同大小、質(zhì)量的種子，重型雜質(zhì)的大小和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也不一樣，在本試驗(yàn)中，將質(zhì)量大于種子10倍以上的雜質(zhì)列為重型雜質(zhì)[13]?？偟膩?lái)說(shuō)，操作人員必須熟悉種子知識(shí)，嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作[14]。

筆者利用本研究建立的梔子種子檢驗(yàn)規(guī)程，先后測(cè)定了其他幾份不同產(chǎn)地梔子種子的發(fā)芽率、凈度和生活力，盡管結(jié)果表明不同產(chǎn)地和成熟度的種子，在發(fā)芽率、凈度和生活力等指標(biāo)上的測(cè)定結(jié)果有較大差異，但本檢驗(yàn)規(guī)程中各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)方法廣泛適用于梔子種子的質(zhì)量控制，能夠?yàn)橹兴幉臈d子的規(guī)范化生產(chǎn)提供依據(jù)。

本研究通過(guò)一系列試驗(yàn)確定了梔子種子檢驗(yàn)規(guī)程的合理操作方法，包括扦樣、真實(shí)性、凈度、發(fā)芽率、含水量、生活力和千粒質(zhì)量7項(xiàng)指標(biāo)。其中扦樣時(shí)種子批的最大總質(zhì)量可選為 5 000 g，送檢樣品質(zhì)量800 g；凈度、水分和真實(shí)性分析時(shí)扦樣樣品的質(zhì)量應(yīng)不超過(guò)100 g。在試驗(yàn)中可利用梔子種子外觀結(jié)構(gòu)、大小和顏色等形態(tài)特征進(jìn)行真實(shí)性鑒定，凈度分析可按照按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 總則》的方法進(jìn)行。發(fā)芽率測(cè)定最佳方法為用濾紙作為發(fā)芽床，30 ℃恒溫處理。種子含水量測(cè)定用不粉碎的種子高溫烘干1.5 h。生活力測(cè)定用BTB法，浸種時(shí)間2 h，濃度0.1%，顯色時(shí)間40 min。千粒質(zhì)量的測(cè)定用五百粒法。

參考文獻(xiàn)：

[1]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2005年版（一部）[M]. 北京：化工工業(yè)出版社，2005：231.

[2]Abdullah G R，Al-Khateeb A A，Serage M. Effect of different concentrations of growth regulators on Gardenia jasminoides cv. veitchii micropropagation by tissue culture technique[J]. Journal of Agriculture and Marine Sciences，2003（8）： 35-40.

[3]張麗萍，楊世林，楊春清，等. 我國(guó)藥材種子種苗產(chǎn)業(yè)存在的問(wèn)題及其對(duì)策[J]. 中國(guó)中藥雜志，1999，24（10）：3-5.

4]國(guó)際種子檢驗(yàn)協(xié)會(huì)（ISTA）. 1996國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1999.

[5]張 婕，魏建和，隋 春，等. 柴胡種子檢驗(yàn)規(guī)程研究[J]. 種子，2011，30（6）：112-118.

[6]劉長(zhǎng)江. 種子的形態(tài)鑒定：Ⅰ形態(tài)鑒定方法[J]. 種子，1989（3）：51-53，42.

[7]董青松，顏鐘亞，白隆華，等. 雞骨草種子發(fā)芽試驗(yàn)條件的研究[J]. 種子，2006，25（2）：81-84.

[8]孫榮進(jìn)，杜 婷，楊光義，等. 蔓荊子種子生活力的測(cè)定及其與發(fā)芽率的相關(guān)性研究[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（17）：130-133.

[9]GB/T 3543.3—1995. 農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 凈度分析[M]. 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，1995：12-13.

[10]浙江大學(xué)種子科學(xué)中心譯.國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程[M]. 北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1976：9-11.

[11]閆志剛，馬小軍，董青松，等. 青蒿種子檢驗(yàn)規(guī)程研究[J]. 中國(guó)種業(yè)，2011（1）：37-40.

[12]何建華. 種子凈度分析的三個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)[J]. 種子，2013，32（2）：124-126.

[13]董青松，何俊兵，蒙愛(ài)東，等. 廣州相思子種子檢驗(yàn)規(guī)程研究[J]. 種子，2012，31（5）：123-125.

[14]馬玉光，曹改萍. 對(duì)部分農(nóng)作物《種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》修訂的商榷[J]. 中國(guó)種業(yè)，2013（2）：37-38.endprint

2.7 質(zhì)量測(cè)定

對(duì)各梔子種子質(zhì)量測(cè)定方法的比較分析見(jiàn)表5。由于梔子種子體積比較小，在用百粒法測(cè)定梔子種子千粒質(zhì)量時(shí)，10組當(dāng)中有5組變異系數(shù)大于4.0，系統(tǒng)誤差比較大。而利用五百粒法和千粒法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，系統(tǒng)誤差影響較小，因此排除百粒法。進(jìn)一步比較千粒法和五百粒法可知，變異系數(shù)均較小，且所得千粒質(zhì)量很接近。用SPSS 11.0軟件分析五百粒法和千粒法測(cè)定的種子千粒質(zhì)量結(jié)果，沒(méi)有顯著性差異，但是由于五百粒法更易操作，因此考慮到工作量和梔子種子屬于小種子的特點(diǎn)，選擇采用500粒法測(cè)定梔子種子千粒質(zhì)量。

3 討論與結(jié)論

梔子種皮呈棕紅色，為果肉中所含的色素成分，用清水不易洗凈，因此在進(jìn)行生活力測(cè)定時(shí)，會(huì)影響TTC法和紅墨水法染色結(jié)果的觀察。筆者采用濃硫酸酸蝕5 min的方法去除梔子外種皮便可以消除其影響，但此方法較為繁瑣，且濃硫酸處理有可能殺死種子而造成種子腐爛。BTB法測(cè)定梔子種子生活力的原理是種子活細(xì)胞通過(guò)呼吸作用產(chǎn)生的CO2溶于水，從而增加了胚周?chē)h(huán)境的酸度，因此BTB試劑可以測(cè)定酸度的變化，使活種子周?chē)沫傊z出現(xiàn)黃暈現(xiàn)象，從而可以檢測(cè)出有生活力的種子；同時(shí)BTB法不需要濃硫酸酸蝕，簡(jiǎn)便了操作，測(cè)定結(jié)果與種子發(fā)芽試驗(yàn)結(jié)果基本一致，因此采用BTB染色法作為最佳生活力測(cè)定方法。

種子中的水分按特性可分為自由水、束縛水和化合水[11]。自由水最易分離，它是種子貯藏時(shí)影響種子壽命的一個(gè)重要因素，因此在進(jìn)行種子含水量測(cè)定時(shí)主要測(cè)定自由水。種子形成過(guò)程中的水分來(lái)自植株，但被采收后，如果種子所處環(huán)境中的空氣相對(duì)濕度高，種子便從空氣中吸收水分使含水量上升。因此在進(jìn)行含水量測(cè)定時(shí)，應(yīng)選擇在空氣相對(duì)濕度低的房間內(nèi)進(jìn)行。在放冷至室溫的過(guò)程中應(yīng)把樣品放在干燥器中，且每次冷卻至室溫的時(shí)間應(yīng)保持一致。

種子凈度分析后的樣品將被用于測(cè)定種子生活力、發(fā)芽率、純度、重量[12]。由于某些種子存在缺陷，明顯小于正常種子，甚至小于正常種子的一半，在篩理的過(guò)程中與細(xì)小雜質(zhì)同時(shí)被篩下來(lái)，因此認(rèn)為此類(lèi)種子為一般雜質(zhì)。為了確保樣品凈度分析的準(zhǔn)確性，在篩理之后，將篩內(nèi)物質(zhì)嚴(yán)格地逐粒區(qū)分，同時(shí)借助放大鏡、毛刷等工具對(duì)區(qū)分后的不同部分進(jìn)行嚴(yán)格檢查，以減少誤差，避免樣品中各成分的缺失。不同大小、質(zhì)量的種子，重型雜質(zhì)的大小和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也不一樣，在本試驗(yàn)中，將質(zhì)量大于種子10倍以上的雜質(zhì)列為重型雜質(zhì)[13]?？偟膩?lái)說(shuō)，操作人員必須熟悉種子知識(shí)，嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作[14]。

筆者利用本研究建立的梔子種子檢驗(yàn)規(guī)程，先后測(cè)定了其他幾份不同產(chǎn)地梔子種子的發(fā)芽率、凈度和生活力，盡管結(jié)果表明不同產(chǎn)地和成熟度的種子，在發(fā)芽率、凈度和生活力等指標(biāo)上的測(cè)定結(jié)果有較大差異，但本檢驗(yàn)規(guī)程中各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)方法廣泛適用于梔子種子的質(zhì)量控制，能夠?yàn)橹兴幉臈d子的規(guī)范化生產(chǎn)提供依據(jù)。

本研究通過(guò)一系列試驗(yàn)確定了梔子種子檢驗(yàn)規(guī)程的合理操作方法，包括扦樣、真實(shí)性、凈度、發(fā)芽率、含水量、生活力和千粒質(zhì)量7項(xiàng)指標(biāo)。其中扦樣時(shí)種子批的最大總質(zhì)量可選為 5 000 g，送檢樣品質(zhì)量800 g；凈度、水分和真實(shí)性分析時(shí)扦樣樣品的質(zhì)量應(yīng)不超過(guò)100 g。在試驗(yàn)中可利用梔子種子外觀結(jié)構(gòu)、大小和顏色等形態(tài)特征進(jìn)行真實(shí)性鑒定，凈度分析可按照按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 總則》的方法進(jìn)行。發(fā)芽率測(cè)定最佳方法為用濾紙作為發(fā)芽床，30 ℃恒溫處理。種子含水量測(cè)定用不粉碎的種子高溫烘干1.5 h。生活力測(cè)定用BTB法，浸種時(shí)間2 h，濃度0.1%，顯色時(shí)間40 min。千粒質(zhì)量的測(cè)定用五百粒法。

參考文獻(xiàn)：

[1]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2005年版（一部）[M]. 北京：化工工業(yè)出版社，2005：231.

[2]Abdullah G R，Al-Khateeb A A，Serage M. Effect of different concentrations of growth regulators on Gardenia jasminoides cv. veitchii micropropagation by tissue culture technique[J]. Journal of Agriculture and Marine Sciences，2003（8）： 35-40.

[3]張麗萍，楊世林，楊春清，等. 我國(guó)藥材種子種苗產(chǎn)業(yè)存在的問(wèn)題及其對(duì)策[J]. 中國(guó)中藥雜志，1999，24（10）：3-5.

4]國(guó)際種子檢驗(yàn)協(xié)會(huì)（ISTA）. 1996國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1999.

[5]張 婕，魏建和，隋 春，等. 柴胡種子檢驗(yàn)規(guī)程研究[J]. 種子，2011，30（6）：112-118.

[6]劉長(zhǎng)江. 種子的形態(tài)鑒定：Ⅰ形態(tài)鑒定方法[J]. 種子，1989（3）：51-53，42.

[7]董青松，顏鐘亞，白隆華，等. 雞骨草種子發(fā)芽試驗(yàn)條件的研究[J]. 種子，2006，25（2）：81-84.

[8]孫榮進(jìn)，杜 婷，楊光義，等. 蔓荊子種子生活力的測(cè)定及其與發(fā)芽率的相關(guān)性研究[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（17）：130-133.

[9]GB/T 3543.3—1995. 農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 凈度分析[M]. 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，1995：12-13.

[10]浙江大學(xué)種子科學(xué)中心譯.國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程[M]. 北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1976：9-11.

[11]閆志剛，馬小軍，董青松，等. 青蒿種子檢驗(yàn)規(guī)程研究[J]. 中國(guó)種業(yè)，2011（1）：37-40.

[12]何建華. 種子凈度分析的三個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)[J]. 種子，2013，32（2）：124-126.

[13]董青松，何俊兵，蒙愛(ài)東，等. 廣州相思子種子檢驗(yàn)規(guī)程研究[J]. 種子，2012，31（5）：123-125.

[14]馬玉光，曹改萍. 對(duì)部分農(nóng)作物《種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》修訂的商榷[J]. 中國(guó)種業(yè)，2013（2）：37-38.endprint