劉海燕等
摘要:制糖是農(nóng)作物秸稈生產(chǎn)燃料乙醇、化工醇等工業(yè)產(chǎn)品的關(guān)鍵步驟,其中采用酶解法實(shí)現(xiàn)農(nóng)作物秸稈有效糖化是該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。簡(jiǎn)單介紹了酶解機(jī)理,并對(duì)直接酶解與預(yù)處理酶解的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。
關(guān)鍵詞:農(nóng)作物秸稈;酶解制糖;有效糖化
中圖分類(lèi)號(hào): TQ914.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2014)03-0010-03
我國(guó)是農(nóng)業(yè)大國(guó),每年可產(chǎn)生農(nóng)作物秸稈7億多t,近年來(lái),隨著我國(guó)農(nóng)村能源結(jié)構(gòu)的變化與集約化生產(chǎn)的發(fā)展,秸稈逐步成為一種無(wú)用的負(fù)擔(dān)物,秸稈就地焚燒日趨嚴(yán)重,產(chǎn)生的煙霧已成為一大社會(huì)公害[1]。每年有大量的秸稈被就地燃燒,既污染環(huán)境,又浪費(fèi)資源[2]。秸稈的主要成分為纖維、半纖維和木質(zhì)素,以其為原料,通過(guò)酸解或酶解法結(jié)合生物轉(zhuǎn)化法制備2,3-二丁醇、乙醇、甘油三酯、化工醇等工業(yè)產(chǎn)品原料,既可避免環(huán)境污染,又可實(shí)現(xiàn)生物質(zhì)能源的高效利用,帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益[3]。然而,無(wú)論利用農(nóng)作物秸稈生產(chǎn)何種產(chǎn)品,纖維原料制糖(包括葡萄糖和木糖)率都是影響整條工藝生產(chǎn)線的重要因素[4]。只有當(dāng)木質(zhì)纖維素通過(guò)酶解作用轉(zhuǎn)化為葡萄糖、木糖等單糖后,才能通過(guò)發(fā)酵過(guò)程轉(zhuǎn)化為各種生物能源。因此,在木質(zhì)纖維素轉(zhuǎn)化能源的過(guò)程中,纖維素的酶解糖化是最關(guān)鍵的步驟,也是木質(zhì)纖維素能源化轉(zhuǎn)化過(guò)程中的限制性步驟。目前,纖維素水解糖化的主要途徑有化學(xué)法水解和酶法水解。酶法水解因其工藝條件溫和、設(shè)備要求簡(jiǎn)單、能耗低、副產(chǎn)物較少、對(duì)環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)得到廣泛的應(yīng)用[5],如何采用酶解方式實(shí)現(xiàn)玉米秸稈有效糖化仍然是該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[6]。
1 酶解機(jī)理
玉米秸稈、麥類(lèi)秸稈、水稻秸稈等均屬木質(zhì)纖維類(lèi)生物質(zhì),主要成分為纖維素(約占40%)、木質(zhì)素(20%~30%)和半纖維素(20%~30%),這3種成分的重量占植物纖維質(zhì)原料總重量的80%~95%[7]。纖維素降解木質(zhì)纖維素的酶主要有降解纖維素的纖維素酶、降解半纖維素的木聚糖酶和降解木質(zhì)素的漆酶[1]。
纖維素酶是將纖維素降解為葡萄糖過(guò)程中起作用的幾個(gè)酶的總稱(chēng),包括內(nèi)切葡聚糖酶(1,4-β-D-glucan glucanohydrolase,EC 3.2.1.4)、外切葡聚糖酶(1,4-β-D-glucan cellobiohydrolase,EC 3.2.1.91)和纖維二糖酶(1,4-β-D-glucosidase,EC 3.2.1.21)。纖維素酶水解纖維素的機(jī)制至今尚不十分清楚,普遍認(rèn)為是3 種酶組分的協(xié)同作用的結(jié)果,但各組分是如何作用的,尤其是對(duì)C1、Cx的作用方式,許多專(zhuān)家學(xué)者持有不同的看法。一種觀點(diǎn)是改進(jìn)的C1-Cx假說(shuō):C1酶首先作用于纖維素的結(jié)晶區(qū),使其膨脹變成無(wú)定型纖維素,再由Cx分解無(wú)定型纖維素為纖維二糖,最后由β-葡萄糖苷酶分解為葡萄糖;另一種觀點(diǎn)是順序作用的Cx-C1假說(shuō):首先由Cx酶在纖維素的非結(jié)晶區(qū)部位切割,產(chǎn)生帶有非還原性末端的小纖維素分子,再由C1酶以纖維二糖為單位,從末端進(jìn)行切割,最后由β-葡萄糖苷酶水解為葡萄糖[8]。
半纖維素的主要組成成分是木聚糖,半纖維素成分的復(fù)雜結(jié)構(gòu)也決定它們的降解需要多種酶的協(xié)同作用。降解酶包括內(nèi)切酶 β-木聚糖酶(1,4-β-D-xylanxylanohydrolase,EC 3.2.1.8)、β-甘露聚糖酶(1,4-β-D-mannanmannohydrolase,EC 32178),主要水解半纖維素中的甘露聚糖;β-木糖苷酶,主要作用于木聚糖,屬于外切酶,是一個(gè)多功能的酶,木二糖是β-木糖苷酶的最佳底物。首先由內(nèi)切β-木聚糖酶隨機(jī)短裂聚糖骨架,產(chǎn)生木聚糖,降低聚合度,然后由外切β-木糖苷酶將木寡糖和木二糖分解為木糖;在降解過(guò)程中同時(shí)也需要α-L-α-阿拉伯糖苷酶、α-D-葡萄糖醛酸酶、乙酸脂酶以及阿魏酸脂酶的協(xié)同作用,解除側(cè)鏈取代基對(duì)木聚糖酶的抑制作用[8]。
木質(zhì)素的降解酶系是個(gè)非常復(fù)雜的系統(tǒng),其中最主要也是研究最透的木質(zhì)素降解酶有3 種,即木質(zhì)素過(guò)氧化物酶(EC 1.11.1.14,LiP)、錳過(guò)氧化物酶(EC 1.11.1.13,MnP)和漆酶(EC 1.10.3.2,Lac)[1]。一般認(rèn)為,木質(zhì)素過(guò)氧化物酶、錳過(guò)氧化物酶、漆酶 和H2O2 產(chǎn)生系統(tǒng)構(gòu)成降解木質(zhì)素的主要成分。木質(zhì)素過(guò)氧化物酶直接與木質(zhì)素的芳環(huán)底物反應(yīng),從芳環(huán)上取得電子,使木質(zhì)素形成陽(yáng)離子自由基,從而發(fā)生一系列的裂解反應(yīng)。
2 農(nóng)作物秸稈酶解研究進(jìn)展
2.1 直接酶解
在對(duì)秸稈進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí),為了提高糖化率,一般要對(duì)秸稈進(jìn)行預(yù)處理,但是預(yù)處理工藝存在處理成本高、環(huán)境污染嚴(yán)重等缺點(diǎn),因此直接對(duì)秸稈進(jìn)行糖化是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。為了減少環(huán)境污染,目前對(duì)秸稈不經(jīng)預(yù)處理直接轉(zhuǎn)化成糖的首選方法是酶解,然而對(duì)于酶解糖化秸稈的研究主要集中在用單一纖維素酶進(jìn)行酶解糖化,個(gè)別添加半纖維素酶,因而存在糖化效率低的問(wèn)題。宋安東等利用雙酶(纖維素酶、木聚糖酶)對(duì)秸稈直接糖化的條件進(jìn)行研究,在優(yōu)化條件下,作用 72 h 的秸稈糖化率達(dá)到10.815%[9]。易錦瓊等研究發(fā)現(xiàn),纖維素酶酶解玉米秸稈的最佳條件為:反應(yīng)時(shí)間48 h,酶解溫度為55 ℃,底物濃度20 g/L,速度130 r/min,酶用量為 200 U/g[10]。有研究發(fā)現(xiàn),水稻秸稈最佳酶解工藝為:酶用量150 U/g,固液比1 g ∶ 20 mL,酶解時(shí)間48 h,酶解溫度 50 ℃[11]。有學(xué)者采用響應(yīng)面分析法對(duì)秸稈酶解條件進(jìn)行優(yōu)化,得到最佳工藝條件,糖化率可達(dá)到42.15%[12]、還原糖最大產(chǎn)率為42.97%[13]。
2.2 預(yù)處理酶解
近年來(lái),酶解工藝發(fā)展迅速,但由于天然纖維素結(jié)構(gòu)復(fù)雜的特性,降低了纖維素酶系與纖維素的有效接觸,增加了酶解的難度,未經(jīng)處理的玉米秸稈直接進(jìn)行酶解的效率很低,纖維素酶解得率為24.18%,半纖維素酶解得率為14.76%,總糖得率僅為20.20%,因此需要在酶解之前進(jìn)行必要的預(yù)處理,以改變天然纖維素的結(jié)構(gòu),降低結(jié)晶度,脫去木質(zhì)素,從而提高酶解效率[14]。
2.2.1 物理方法 物理處理將部分半纖維素從生物質(zhì)秸稈中分離、降解,從而增加酶對(duì)纖維素的可觸及性,提高纖維素的酶解轉(zhuǎn)化率,目前研究較多的有蒸汽爆破、膨化、射線輻照、微波等方法。蒸汽爆破法是一種有效的預(yù)處理方法,其能耗低,對(duì)環(huán)境影響小。植物纖維素原料經(jīng)過(guò)蒸汽爆破,半纖維素降解,結(jié)構(gòu)遭到破壞,纖維素酶分子與底物的接觸位點(diǎn)增加,能顯著提高酶解效率[15-17]。黃之文采用蒸汽爆破法對(duì)玉米秸稈進(jìn)行預(yù)處理,結(jié)果表明,酸法汽爆固形物酶解72 h后,酶解率為77.0%;而直接汽爆法為68.3%[18]。李彬等的結(jié)果表明,原始水稻秸稈最大酶解還原糖產(chǎn)量約為9.7%,蒸汽爆破水稻秸稈最大酶解還原糖產(chǎn)量約為34.3%,蒸汽爆破預(yù)處理能夠顯著提高水稻秸稈的酶解還原糖產(chǎn)量,并縮短酶解反應(yīng)時(shí)間[19]。寧欣強(qiáng)等對(duì)玉米秸稈進(jìn)行蒸汽爆破預(yù)處理,酶解24 h的試驗(yàn)結(jié)果表明,與未處理秸稈相比,汽爆處理樣品的還原糖產(chǎn)率提高了97%,化學(xué)與物理分析結(jié)果表明,處理后的物料半纖維素及可溶性物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)減小,纖維素質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加29.7%,X射線衍射儀(XRD)和掃描電鏡(SEM)結(jié)果表明纖維素致密結(jié)構(gòu)被破壞[20]。
寇巍等采用膨化技術(shù)對(duì)玉米秸稈木質(zhì)纖維素進(jìn)行預(yù)處理,結(jié)果玉米秸稈的纖維素受到破壞,木質(zhì)素包裹作用減弱,纖維素酶的空間作用面積提高,有部分半纖維素和少量木質(zhì)素水解,纖維素結(jié)晶度降低了12.68%,與未處理的相比,膨化處理后原料酶解時(shí)間可縮短16 h,未經(jīng)膨化處理的原料還原糖酶解產(chǎn)率為13.48%,膨化處理后的原料還原糖酶解產(chǎn)率可達(dá)2491%[21]。倫曉中等的試驗(yàn)結(jié)果表明,在酶解最佳工藝條件下,還原糖轉(zhuǎn)化率達(dá)到28.98%,膨化后的玉米秸稈纖維素酶解充分[22]。
不同輻照劑量處理對(duì)玉米秸稈水解及酶解還原糖產(chǎn)量的影響結(jié)果表明,輻照后玉米秸稈易酶解,隨著輻照劑量的增大,酶解產(chǎn)糖量顯著增加,在較高劑量下,輻照-酶解復(fù)合降解玉米秸稈效果優(yōu)于單一的輻照處理和單一酶處理,輻照后的玉米秸稈和酶解后的玉米葉處理的還原糖含量均有所增加,提高了纖維素原料的利用率[23-24]。輻照-酶解復(fù)合降解能有效破壞稻草的纖維組織結(jié)構(gòu),特別是稻草表面硅晶結(jié)構(gòu)和纖維結(jié)構(gòu)[25]。
2.2.2 化學(xué)方法 化學(xué)處理可使纖維素、半纖維素和木質(zhì)素膨脹并破壞其結(jié)晶性,使天然纖維素溶解,從而增加其降解率,化學(xué)預(yù)處理研究開(kāi)展的時(shí)間早,且一直研究的有酸處理、堿處理,最近大多采用稀酸水解處理技術(shù),該方法可高效破壞植物纖維結(jié)構(gòu),提高木聚糖轉(zhuǎn)化成木糖的轉(zhuǎn)化率;堿處理可以移除玉米秸稈中的木質(zhì)素,破壞天然纖維素復(fù)雜的剛性結(jié)構(gòu),從而有益于酶解效率的提高和糖的利用[26]?;瘜W(xué)方法雖然存在弊端,但取得了較好的處理效果和研究進(jìn)展。
宋安東等用稀鹽酸預(yù)處理玉米秸稈,總糖產(chǎn)率達(dá)485%,纖維素和半纖維素的轉(zhuǎn)化率達(dá)80.8%[27]。在稀硫酸法-酶法結(jié)合處理小麥秸稈的最優(yōu)條件下,水解12 h,葡萄糖得率為34.5%,比未經(jīng)酸處理直接酶解葡萄糖的得率高50%[28],木糖得率達(dá)到84.90%,酶水解率達(dá)到91.71%[29]。曾青蘭首先在常壓溫和條件下用磷酸對(duì)小麥秸稈進(jìn)行預(yù)處理,結(jié)果表明,在最優(yōu)條件下,小麥秸稈酶解50 min時(shí),糖化率從未經(jīng)預(yù)處理的25.4%提高到預(yù)處理的70.3%;SEM分析結(jié)果表明,經(jīng)磷酸預(yù)處理后的小麥秸稈崩解為碎片[30]。然后曾青蘭等采用磷酸-丙酮對(duì)水稻秸稈進(jìn)行預(yù)處理的研究,預(yù)處理的水稻秸稈纖維素酶水解糖化率從未經(jīng)處理的18.6% 提高到預(yù)處理后的65.4%;SEM分析結(jié)果表明,經(jīng)磷酸-丙酮預(yù)處理的水稻秸稈晶狀結(jié)構(gòu)遭到破壞,并崩解為碎片,從而使后續(xù)的纖維素酶水解糖化率顯著提高[31]。
李輝勇等對(duì)水稻秸稈弱堿性過(guò)氧化預(yù)處理?xiàng)l件進(jìn)行了優(yōu)化,結(jié)果表明,在最優(yōu)預(yù)處理?xiàng)l件下,水稻秸稈的酶解糖化率達(dá)到了83.23%;而在相同酶解條件下,經(jīng)氫氧化鈉處理后的水稻秸稈的酶解糖化率為70.38%,弱堿性過(guò)氧化預(yù)處理水稻秸稈的糖化率明顯高于堿性預(yù)處理水稻秸稈的糖化率[32]。歐陽(yáng)嘉等研究了堿法-酶法制糖工藝,結(jié)果表明,水解48 h后纖維素酶解得率從24.18%上升至71.29%,半纖維素酶解得率達(dá)到78.85%,整個(gè)工藝總糖得率為66.86%,較未處理樣品提高46.66%[4]。
2.2.3 多種方法聯(lián)合 物理、化學(xué)預(yù)處理方法各有利弊,因此,有學(xué)者將其中2種或更多方法結(jié)合起來(lái)對(duì)秸稈進(jìn)行酶解前的預(yù)處理,以彌補(bǔ)單一預(yù)處理方法的缺陷??蚂o等初步比較了不同化學(xué)方法在促進(jìn)玉米秸稈酶解糖化方面的效果,得到最佳預(yù)處理方案,產(chǎn)糖量提高了83.51%,此時(shí)的木質(zhì)素降解量也最大,達(dá)到了49.8%[33]。宋安東等用鹽酸、亞硫酸、甲酸、氫氧化鈉、雙氧水與氫氧化鈉混合液、硫化鈉與碳酸氫鈉混合液對(duì)玉米秸稈進(jìn)行預(yù)處理,結(jié)果表明,在最優(yōu)條件下,糖化48 h后玉米秸稈的總糖產(chǎn)率達(dá)48.5%,纖維素和半纖維素的轉(zhuǎn)化率達(dá)80.8%[27],并能有效除去包裹在纖維素基質(zhì)外面的木質(zhì)素和半纖維素,提高基質(zhì)的酶解糖化效率[34]。
3 研究展望
農(nóng)作物秸稈纖維素的利用已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外一個(gè)熱門(mén)的研究課題,無(wú)論是用來(lái)生產(chǎn)燃料乙醇,還是用來(lái)生產(chǎn)生物化工醇,都會(huì)對(duì)工業(yè)生產(chǎn)、農(nóng)民收入、環(huán)境保護(hù)等帶來(lái)多方面的顯著效益,對(duì)能源的戰(zhàn)略發(fā)展也會(huì)是一個(gè)質(zhì)的飛躍。如何采用多種預(yù)處理方法相結(jié)合,最大化提高糖化率,降低生產(chǎn)成本,簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝,是農(nóng)作物秸稈酶解制糖技術(shù)所要解決的問(wèn)題,也是未來(lái)研究發(fā)展的趨勢(shì)。
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