劉 沛，葉金云，邵仙萍，張易祥，吳成龍，明建華，等

（1.大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，遼寧大連 116023；2.浙江省水生生物資源養(yǎng)護(hù)與開(kāi)發(fā)技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖州師范學(xué)院，浙江湖州 313000；3.溫州醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，浙江溫州 325000）

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，對(duì)魚(yú)粉的需求量日益增加，而魚(yú)粉供應(yīng)量卻由于受到環(huán)境污染、過(guò)度捕撈、不良?xì)夂虻纫蛩氐挠绊懭遮呄陆?，同時(shí)由于魚(yú)粉中磷含量較高，而大多數(shù)魚(yú)類(lèi)對(duì)其利用率較低，未被魚(yú)體吸收的磷會(huì)導(dǎo)致水體富營(yíng)養(yǎng)化[1]。鑒于此，合理開(kāi)發(fā)并利用新型蛋白源來(lái)替代魚(yú)粉一直以來(lái)是國(guó)內(nèi)外水產(chǎn)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。與其它植物蛋白源相比，各種大豆蛋白源具有較高的蛋白質(zhì)含量、較平衡的氨基酸組成，因此，在水產(chǎn)飼料中被廣泛應(yīng)用。一些研究者已經(jīng)在虹鱒Oncorhynchus mykiss[2-3]、牙鲆Paralichthys olivaceus[4]、大西洋鱈 Gadus morhua[5]、南美白對(duì)蝦 Penaeus vannamei[6-7]、白鯨 Huso huso[8]等水產(chǎn)動(dòng)物上進(jìn)行了大量的關(guān)于大豆蛋白替代魚(yú)粉的研究。小肽豆粕作為一種豆粕深度開(kāi)發(fā)產(chǎn)品，是發(fā)酵豆粕技術(shù)與酶解豆粕技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物，具有抗?fàn)I養(yǎng)因子含量低、蛋白質(zhì)降解率高、小肽品質(zhì)好、含有菌體蛋白、有機(jī)酸、B族維生素及未知生長(zhǎng)因子等優(yōu)點(diǎn)。近年來(lái)，已有一些研究表明，在飼料中添加一定比例的小肽可以提高草魚(yú)Ctenopharyngodon idella[9-11]、舌齒鱸Dicentrarchus labrax[12]、大西洋鮭Salmo salar[13]等魚(yú)類(lèi)對(duì)蛋白質(zhì)的利用率，進(jìn)而提高其生長(zhǎng)性能。青魚(yú)Mylopharyngodon piceus是我國(guó)傳統(tǒng)淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)，但有關(guān)小肽豆粕對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)及魚(yú)體組成影響的研究還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)用小肽豆粕部分或全部替代魚(yú)粉，通過(guò)對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能及體成分進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，探討飼料中小肽豆粕替代魚(yú)粉的適宜比例，為小肽豆粕在青魚(yú)幼魚(yú)飼料中的高效、合理利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料的配制

試驗(yàn)飼料以魚(yú)粉（粗蛋白含量為66.69%，粗脂肪含量為9.10%）及血粉為動(dòng)物性蛋白源，以小肽豆粕（粗蛋白含量為47.70%，粗脂肪含量為0.42%）、玉米蛋白粉等為植物性蛋白源。試驗(yàn)所用原料均由浙江一星飼料股份有限公司提供。小肽豆粕由浙江省環(huán)農(nóng)微生物研究所提供。用小肽豆粕分別替代0（D1）、25%（D2）、50%（D3）、75%（D4）、100%（D5）的魚(yú)粉，配制成 5種等氮（粗蛋白為 40%）等能（總能為 17.80 KJ/g）的試驗(yàn)飼料。所有原料經(jīng)粉碎過(guò)40目篩，過(guò)篩的原料按配方準(zhǔn)確稱(chēng)量，采用逐級(jí)擴(kuò)大法混勻后加水，再次混勻，經(jīng)單螺桿制粒機(jī)制成粒徑為1.0 mm的顆粒飼料，50℃烘干后，于-20℃保存，備用。試驗(yàn)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)組成見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)組成(%，風(fēng)干基礎(chǔ))Tab.1 Formulation and proximate composition of the experimental diets(%,air-dry basis）

1.2 試驗(yàn)魚(yú)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)魚(yú)為浙江省湖州市吳興區(qū)豐溢現(xiàn)代水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)同一批人工培育的青魚(yú)幼魚(yú)，平均初始體重為（2.00±0.08）g。養(yǎng)殖試驗(yàn)在室內(nèi)養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行（500 L），試驗(yàn)周期為8周。用對(duì)照組飼料馴化10 d后，挑選體格健康、大小基本一致的幼魚(yú)450尾進(jìn)行分組試驗(yàn)，隨機(jī)分成5組，每組3個(gè)重復(fù)，每重復(fù)30尾魚(yú)，分別放于柱形養(yǎng)殖桶中。每天按魚(yú)體重的3-5%的投喂量定時(shí)（08：00，17：00）、定點(diǎn)投喂2次，投餌1 h后吸出殘餌及糞便，日換水量約 1/4-1/3。養(yǎng)殖過(guò)程中水溫 26～31 ℃，pH 6.6～7.2，溶解氧高于 5.5 mg/L，采用自然光照。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，饑餓24 h，對(duì)各組試驗(yàn)魚(yú)統(tǒng)計(jì)數(shù)量并稱(chēng)重。每缸隨機(jī)抽取13尾魚(yú)，其中5尾用于全魚(yú)的體成分分析，另外8尾分別測(cè)定體長(zhǎng)及體重后，將魚(yú)體解剖取其肝胰臟及腸道，去除腸道內(nèi)容物及附屬物，稱(chēng)重，后取背部肌肉用于常規(guī)成分分析，將樣品于-80℃保存。

1.4 指標(biāo)測(cè)定與方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能指標(biāo)

增重率(weight gain ratio,WGR,%)=100×(Wt-W0)/W0；

特定生長(zhǎng)率(specific growth ratio,SGR,%/d)=100×(LnWt-LnW0)/t；

蛋白質(zhì)效率(protein efficiency ratio,PER,%)=100×(Wt-W0)/Wp；

飼料系數(shù)(feed conversion ratio,FCR)=F/(Wt-W0)；

成活率(survival rate,SR,%)=100×Nf/Ni；

肥滿(mǎn)度(condition factor,CF,g/cm3)=100×Wt/L3；

肝體比(hepatosomatic index,HIS,%)=100×Wh/Wt；

臟體比(viscerosomatic index,VSI,%)=100×Wv/Wt；

腸體指數(shù)(intestine weight index,%)=100×Wi/Wt；

腸長(zhǎng)指數(shù)(intestine length index,%)=100×Li/L

式中，W0為平均初始體重（g）；Wt為平均終末體重（g）；Wh為平均肝重（g）；Wv為平均內(nèi)臟重（g）；Wi為平均腸重（g）；t為飼養(yǎng)周期（d）；Nf為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚(yú)尾數(shù)；Ni為試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)魚(yú)尾數(shù)；F 為攝入飼料量（g）；Wp為攝入蛋白質(zhì)總量（g）；L為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚(yú)體長(zhǎng)（cm）；Li為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚(yú)腸長(zhǎng)（cm）。

1.4.2 常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分

飼料、全魚(yú)及肌肉的粗蛋白含量按國(guó)標(biāo)GB/T6432-1994測(cè)定；粗脂肪含量按國(guó)標(biāo)GB/T6433-1994測(cè)定；灰分含量按國(guó)標(biāo)GB/T6438-1992測(cè)定；水分含量按國(guó)標(biāo)GB/T6435-1986測(cè)定；總能量采用氧氮量熱儀測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用 Excel和 SPSS 19.0對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVY)，差異顯著時(shí)（P＜0.05）用Duncan’s進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)以Mean±SD表示。

2 結(jié)果

2.1 飼料中小肽豆粕替代魚(yú)粉對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、飼料利用及形體指標(biāo)的影響

青魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能、飼料利用及形體指標(biāo)見(jiàn)表2與表3。飼料中不同比例小肽豆粕替代魚(yú)粉對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)的成活率不產(chǎn)生顯著影響（P＞0.05），但對(duì)其末重、增重率、特定生長(zhǎng)率、蛋白質(zhì)效率及飼料系數(shù)影響顯著（P＜0.05）。隨著飼料中小肽豆粕替代魚(yú)粉比例的升高，增重率呈逐漸下降的趨勢(shì)，D2組比D1組降低了3.62%，但差異不顯著（P＞0.05），D3、D4 及 D5 組分別比 D1 組顯著降低了 7.14%、46.29%及 49.28%（P＜0.05），D4 與 D5 組無(wú)顯著差異（P＞0.05），但均顯著低于 D3 組（P＜0.05）。特定生長(zhǎng)率與增重率變化趨勢(shì)一致。蛋白質(zhì)效率也隨著小肽豆粕含量的增加而降低，D2、D3、D4及D5組分別比D1組顯著降低了2.81%、5.34%、24.66%及 26.05%（P＜0.05）,D4 與 D5 組差異不顯著（P＞0.05），D1、D2 及 D3 各組間差異顯著（P＜0.05）。飼料系數(shù)隨小肽豆粕替代魚(yú)粉比例的增加而升高，D2組比D1組增加了2.44%，但二者之間差異不顯著（P＞0.05），D3、D4 及 D5 組分別比 D1 組顯著增加了 5.69%、32.52%及 35.77%（P＜0.05）,D3 與 D4組，D4與 D5組無(wú)顯著差異（P＜0.05）。飼料中小肽豆粕的含量顯著影響了肝體比和肥滿(mǎn)度（P＜0.05），而對(duì)臟體比、腸體指數(shù)、腸長(zhǎng)指數(shù)的影響不顯著（P＞0.05）。肝體比隨著替代量的增加而增大，D3、D4及D5組顯著高于 D1 組（P＜0.05），D1 與 D2，D3、D4 與 D5 組間差異不顯著（P＞0.05）；肥滿(mǎn)度隨著替代量的增加而下降，D3、D4及 D5組顯著低于 D1組，D1與 D2，D4與 D5間差異不顯著（P＞0.05）。

表2 小肽豆粕替代魚(yú)粉對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)、存活及飼料利用的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)Tab.2 Effects of dietary fish meal replaced by fermented soybean meal on growth performance,survival and feed utilization of the juvenile black carp(Means±SD)

表3 飼料中小肽豆粕替代魚(yú)粉對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)形體指標(biāo)的影響(以濕重計(jì))Tab.3 Effects of dietary fish meal replaced by fermented soybean meal on the morphological measurements of the junivel black carp(wet weight basis)

2.2 飼料中小肽豆粕替代魚(yú)粉對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)全魚(yú)及肌肉組成的影響

青魚(yú)幼魚(yú)全魚(yú)及肌肉的營(yíng)養(yǎng)組成見(jiàn)表4和表5。隨著飼料中小肽豆粕替代魚(yú)粉比例的增加，全魚(yú)的水分含量顯著升高（P＜0.05），D3、D4、D5 組顯著高于 D1 組（P＜0.05），但 D1 與 D2 組，D2 與 D3 組，D3、D4 與D5 組之間差異不顯著（P＞0.05）；全魚(yú)粗蛋白含量顯著下降（P＜0.05），D3、D4、D5 組顯著低于 D1 組（P＜0.05），但 D1 與 D2 組，D2 與 D3 組，D4 與 D5 組之間差異不顯著（P＞0.05）；全魚(yú)粗脂肪及灰分含量無(wú)顯著變化（P＞0.05），但粗脂肪呈逐漸下降趨勢(shì)，D5組最低。各試驗(yàn)組肌肉的水分、粗蛋白、粗脂肪及灰分含量與飼料中小肽豆粕的含量無(wú)顯著相關(guān)性（P＞0.05）。

表4 飼料中小肽豆粕替代魚(yú)粉對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)全魚(yú)組成的影響（%，以濕重計(jì)）Tab.4 Effects of dietary fish meal replaced by fermented soybean meal on composition of whole body of the juvenile black carp(%,wet weight basis)

3 討論

3.1 飼料中小肽豆粕替代魚(yú)粉對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、飼料利用及形體指標(biāo)的影響

經(jīng)過(guò)微生物發(fā)酵處理后的豆粕，其中原有的多種抗?fàn)I養(yǎng)因子含量顯著降低，部分徹底消除[14]，且在發(fā)酵過(guò)程中由蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生的一些小分子肽及有機(jī)酸，有助于動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，極大的提高了豆粕的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及可利用性[15]。

目前，有關(guān)飼料中發(fā)酵豆粕替代水產(chǎn)動(dòng)物飼料中的魚(yú)粉已有一些報(bào)道。LUO等[16]研究表明，在石斑魚(yú)Epinephelus coioides配合飼料中，發(fā)酵豆粕替代14%白魚(yú)粉時(shí)，其增重率、特定生長(zhǎng)率、體組成、蛋白質(zhì)效率及飼料效率均不受影響，但隨著發(fā)酵豆粕替代量的增加，其生長(zhǎng)性能顯著下降。程成榮等[17]對(duì)雜交羅非魚(yú)Oreochromis niloticus飼料中發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉的研究顯示，替代比例低于43.3%時(shí)對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的生長(zhǎng)無(wú)顯著影響，當(dāng)替代比例高于43.4%時(shí)，其增重率和特定生長(zhǎng)率顯著下降。本試驗(yàn)中用小肽豆粕替代25%魚(yú)粉時(shí)，對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)的增重率、特定生長(zhǎng)率及飼料系數(shù)均無(wú)顯著影響，當(dāng)替代比例高于25%時(shí)，其生長(zhǎng)性能隨著替代比例的增加顯著降低，飼料系數(shù)則顯著升高。這與上述研究結(jié)果相似，說(shuō)明飼料中適量添加發(fā)酵豆粕或小肽豆粕對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)無(wú)不良影響，同時(shí)可降低飼料成本，但過(guò)量添加則會(huì)抑制其生長(zhǎng)并降低飼料轉(zhuǎn)化率。分析其原因可能是：①小肽豆粕中氨基酸組成的平衡性不及魚(yú)粉。雖然小肽豆粕較其它植物蛋白源氨基酸組成相對(duì)平衡、蛋白質(zhì)品質(zhì)較好，但其中蛋氨酸及賴(lài)氨酸的含量低于魚(yú)粉中的含量，小肽豆粕的添加量越多，飼料中所含的蛋氨酸與賴(lài)氨酸的量與魚(yú)粉的差異也越大，因此，隨著小肽豆粕替代魚(yú)粉比例的升高，飼料中必需氨基酸間以及必需氨基酸與非必需氨基酸間的比例差異越來(lái)越大，對(duì)生長(zhǎng)的抑制作用也越來(lái)越明顯；②由于幼魚(yú)對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求較高，過(guò)量添加小肽豆粕后，飼料的適口性會(huì)降低且發(fā)酵過(guò)程中未除去的抗?fàn)I養(yǎng)因子的含量增多，也會(huì)影響試驗(yàn)魚(yú)的生長(zhǎng)。此外，大量的研究也表明,與魚(yú)粉相比,大豆蛋白在飼料中大量使用會(huì)降低魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)性能。類(lèi)似的結(jié)果已在多種魚(yú)類(lèi)的研究中得到證實(shí)，如軍曹魚(yú)Rachycentron canadum[18-19]、大鱗大麻哈魚(yú)Oncorhynchus tshawytscha[20]、大西洋鮭魚(yú)[21]、點(diǎn)籃子魚(yú) Siganus guttatus[22]、鮸狀黃姑魚(yú) Nibea miichthioides[23]及鯉魚(yú) Cyprinus carpio[24]等。

本試驗(yàn)中，小肽豆粕替代魚(yú)粉對(duì)試驗(yàn)魚(yú)肝體比和肥滿(mǎn)度影響顯著，而對(duì)臟體比、腸體指數(shù)及腸長(zhǎng)指數(shù)無(wú)顯著影響。隨著飼料中小肽豆粕含量的增加，肝體比呈逐漸增大趨勢(shì)，與KAUSHIK等[25]的研究結(jié)果一致，但當(dāng)替代比例為25%時(shí)，試驗(yàn)魚(yú)的肝體比與對(duì)照組差異不顯著，替代比例高于25%時(shí)，肝體比顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明替代比例在一定范圍內(nèi)時(shí)，小肽豆粕不影響青魚(yú)幼魚(yú)的肝胰臟發(fā)育，但替代比例較高時(shí)，可能會(huì)由于植物蛋白源中某些熱穩(wěn)定抗?fàn)I養(yǎng)因子的存在，使得消化酶分泌的增加，從而加重肝臟的代謝負(fù)荷，引起肝臟代償性增大[26]。

3.2 飼料中小肽豆粕替代魚(yú)粉對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)全魚(yú)及肌肉組成的影響

用小肽豆粕替代飼料中的魚(yú)粉，不但影響試驗(yàn)魚(yú)的生長(zhǎng)性能，還對(duì)其體成分產(chǎn)生顯著影響。本研究中，當(dāng)替代比例為25%時(shí)，魚(yú)體的水分、粗蛋白、粗脂肪及灰分含量與對(duì)照組差異均不顯著，這與LUO等[16]對(duì)石斑魚(yú)的研究結(jié)果一致，在石斑魚(yú)的飼料中分別用7%、14%、21%及28%的發(fā)酵豆粕替代白魚(yú)粉，對(duì)各試驗(yàn)組全魚(yú)的水分、粗蛋白、粗脂肪及灰分均未產(chǎn)生顯著影響。當(dāng)替代比例超過(guò)25%時(shí)，青魚(yú)幼魚(yú)全魚(yú)水分含量顯著高于對(duì)照組，粗蛋白含量顯著降低，且隨著小肽豆粕添加量的增加，粗脂肪含量呈逐漸下降趨勢(shì)，但差異不顯著。該結(jié)果與另外一些關(guān)于大豆蛋白替代魚(yú)粉對(duì)魚(yú)體組成的影響研究結(jié)果相似。徐奇友等[27]對(duì)哲羅魚(yú)Hucho taimen稚魚(yú)的研究結(jié)果顯示，大豆分離蛋白在飼料中的應(yīng)用，顯著影響了其體成分，隨著替代比例的增加，魚(yú)體水分含量顯著升高，而粗蛋白及粗脂肪含量則顯著下降。艾慶輝等[28]用不同比例的大豆蛋白替代魚(yú)粉飼喂南方鲇Silurus meridionalis，結(jié)果表明魚(yú)體水分含量升高，粗蛋白和脂肪含量逐漸下降，灰分含量無(wú)明顯變化趨勢(shì)。隨著豆粕替代魚(yú)粉比例的增加，牙鲆的魚(yú)體水分含量逐漸上升，而粗蛋白含量與脂肪含量逐漸下降，灰分在各試驗(yàn)組間差異不顯著[29]。本試驗(yàn)中導(dǎo)致蛋白質(zhì)含量下降的原因可能是：一方面，與魚(yú)粉相比，小肽豆粕中蛋氨酸、賴(lài)氨酸含量較低，當(dāng)小肽豆粕用量過(guò)高時(shí)，使得飼料中必需氨基酸的比例不平衡，導(dǎo)致過(guò)多的氨基酸被分解，從而降低了魚(yú)體對(duì)蛋白質(zhì)的利用率以及蛋白質(zhì)的合成速度；另一方面，小肽豆粕中含有部分抗?fàn)I養(yǎng)因子，會(huì)引起動(dòng)物腸道中蛋白酶活力的下降[30-31]，從而降低對(duì)蛋白質(zhì)的消化吸收。本研究中脂肪含量隨著替代比例的升高，呈下降趨勢(shì)，但差異不顯著，說(shuō)明飼料中添加小肽豆粕可能有降低體脂肪沉積的作用。

4 結(jié)論

小肽豆粕替代魚(yú)粉對(duì)青魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng)、飼料利用及體成分均有一定的影響。在本試驗(yàn)條件下，綜合考慮生長(zhǎng)性能指標(biāo)、形體指標(biāo)以及全魚(yú)和肌肉的營(yíng)養(yǎng)組成，小肽豆粕替代青魚(yú)幼魚(yú)飼料中魚(yú)粉的比例以25%為宜。

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