劉思言等

摘要：以3個(gè)基因型大豆無(wú)菌實(shí)生苗的真葉和胚軸為外植體，在MS培養(yǎng)基上附加不同濃度的TDZ、NAA、6-BA以及2，4-D，研究不同激素濃度對(duì)大豆愈傷組織誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)的影響，結(jié)果表明：在愈傷組織誘導(dǎo)階段，以真葉為外植體時(shí)，吉農(nóng)28+1.5 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA+200 mg/L 活性炭為最佳組合；以胚軸為外植體，吉農(nóng)17+1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+200 mg/L 活性炭為最佳組合。在繼代組織培養(yǎng)階段，對(duì)真葉誘導(dǎo)形成的愈傷組織而言，吉農(nóng)17+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+3.0 mg/L2，4-D為最佳組合；對(duì)胚軸誘導(dǎo)的愈傷組織而言，吉農(nóng)17+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+2.0 mg/L2，4-D為最佳組合。

關(guān)鍵詞：大豆；愈傷組織；激素；繼代培養(yǎng)

中圖分類號(hào)： S565.104 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）04-0040-02

收稿日期：2013-08-19

基金項(xiàng)目：吉林省科技發(fā)展計(jì)劃（編號(hào)：201101111）；吉林省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（編號(hào)：2011-41）；吉林省科技廳項(xiàng)目（編號(hào)：20120215）；吉林省科技成果轉(zhuǎn)化補(bǔ)助項(xiàng)目（編號(hào)：20095044）；吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)科研啟動(dòng)基金（編號(hào)：201242）。

作者簡(jiǎn)介：劉思言（1979—），女，吉林四平人，碩士，講師，主要從事作物生物技術(shù)研究。E-mail：siyan_2001@163.com。

通信作者：王丕武，教授，博士生導(dǎo)師。E-mail：peiwuw@yahoo.com.cn。大豆是全世界重要的糧食和經(jīng)濟(jì)作物，也是人類主要的食用蛋白和工業(yè)原料來(lái)源，與人們的日常生活息息相關(guān)[1-2]。大豆的組織培養(yǎng)技術(shù)起步較晚，直到20世紀(jì)80年代的中后期大豆組織培養(yǎng)技術(shù)才取得了突破性的進(jìn)展，大豆的原生質(zhì)體培養(yǎng)、子葉節(jié)培養(yǎng)和胚尖培養(yǎng)相繼取得了成功[3-13]。但大豆愈傷組織誘導(dǎo)的研究相對(duì)較少，而愈傷組織誘導(dǎo)具有外植體來(lái)源廣泛，擴(kuò)繁量大等優(yōu)點(diǎn)[14]。尤其是隨著近些年來(lái)大豆遺傳轉(zhuǎn)化的研究越來(lái)越多，能通過(guò)愈傷組織誘導(dǎo)建立一個(gè)高效的遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)更具有重要的意義。本試驗(yàn)以TDZ、NAA、6-BA、2，4-D為供試激素作為生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，以吉農(nóng)28、吉農(nóng)27、吉農(nóng)17 3種基因型為材料，進(jìn)行大豆愈傷組織的誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)，以期找到最適合誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)大豆愈傷組織的培養(yǎng)基，為建立一個(gè)高效的大豆愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

吉農(nóng)28、 吉農(nóng)27、 吉農(nóng)17的種子均由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生物技術(shù)中心提供。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1種子的萌發(fā)挑取成熟飽滿的大豆種子，先用75%的乙醇消毒30 s，再用0.1%的升汞溶液消毒10 min，無(wú)菌水沖洗3～5次，接種到MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)7 d后取胚軸，14 d后取真葉作為外植體材料。

1.2.2愈傷組織的誘導(dǎo)以無(wú)菌實(shí)生苗的胚軸、真葉為外植體，分別接種于添加不同濃度激素的MS愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，采用四因素三水平的L9（34）正交設(shè)計(jì)（表1），將各處理放置于黑暗條件下培養(yǎng)7 d，然后置于恒溫的黑暗12 h，光照12 h的培養(yǎng)箱中，于20 d后統(tǒng)計(jì)其愈傷組織誘導(dǎo)情況。

傷組織的誘導(dǎo)多以一定濃度的2，4-D和6-BA配合使用，朱學(xué)藝等[15]在培養(yǎng)基中添加6-BA后，愈傷組織出愈率低，形成的愈傷組織結(jié)構(gòu)緊密，呈小顆粒狀；NAA和6-BA結(jié)合使用誘導(dǎo)出的大豆愈傷組織也呈現(xiàn)質(zhì)地堅(jiān)硬的特點(diǎn)，愈傷組織量也相對(duì)較少[16]。TDZ是一種苯基脲衍生物，具有類細(xì)胞分裂素活性，已被廣泛用于大豆組織培養(yǎng)，在孫明杰[24]等的研究中使用低濃度TDZ和6-BA配比，通過(guò)愈傷組織途徑獲得再生植株，提高了植株再生效率。本研究以3種不同基因型大豆的真葉及胚軸為外植體，不同的激素配比進(jìn)行大豆愈傷組織誘導(dǎo)和繼代研究，結(jié)果表明，在愈傷組織誘導(dǎo)階段：以真葉為外植體時(shí)，最佳的組合為吉農(nóng)28+1.5 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA+200 mg/L 活性炭；當(dāng)以胚軸作為外植體時(shí)，誘導(dǎo)愈傷組織最佳組合為吉農(nóng)17+1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+200 mg/L 活性炭。在愈傷組織繼代培養(yǎng)階段：以真葉作為外植體時(shí)，最佳的組合為吉農(nóng)17+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+3.0 mg/L 2，4-D；以胚軸為外植體時(shí)，最佳的組合為吉農(nóng)17+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+2.0 mg/L 2，4-D。

參考文獻(xiàn)：

[1]Wang H J，Murphy P A. Isoflavone content in commercial soybean foods[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，1994，42：1666-1673.

[2]楊超. 大豆植株再生和遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)體系的研究[D]. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

[3]Cheng T Y，Saka H，Voqui-Dinh T H. Plant regeneration from soybean cotyledonary node segments in culture[J]. Plant Science Letters，1980，19：91-99.

[4]肖文言，王連錚. 大豆幼莢子葉原生質(zhì)體培養(yǎng)及植株再生[J]. 作物學(xué)報(bào)，1994，20（6）：665-669，769.

[5]王升吉，吳元華，王洪巖，等. 大豆不同外植體組織培養(yǎng)及再生研究[J]. 沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，30（3）：255-259.

[6]Yoshida T. Adventitious shoot formation from hypocotyls sections of mature soybean seeds[J]. Breeding Science，2002，52：1-8.

[7]邱承祥，武天龍. 6-BA對(duì)大豆莖尖誘導(dǎo)再生植株的研究[J]. 大豆科學(xué)，2003，22（1）：32-35.

[8]Wang P，Wang G，Jing J I，et al. A novel systerm for proliferation，maintenance and plantlet germination from somatic embryo of soybean[J]. Acta Botanica Sinica，2004，46（2）：154-158.

[9]林樹(shù)柱，曹越平，衛(wèi)志明，等. 6-BA誘導(dǎo)大豆子葉節(jié)和莖尖出芽的研究[J]. 上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)：農(nóng)業(yè)科學(xué)版，2005，23（2）：138-142.

[10]李海燕，武小霞，劉淼，等. 大豆子葉節(jié)、胚尖再生植株的研究[J]. 大豆科學(xué)，2007，26（5）：709-712.

[11]孫文麗，劉昱輝，吳元華，等. 大豆胚尖再生體系的建立及轉(zhuǎn)基因初步研究[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，47（6）：615-618.

[12]張東旭，張潔，商蕾，等. 大豆胚尖再生體系的研究[J]. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，31（4）：7-13.

[13]武小霞，李靜，姜成濤，等. 大豆子葉節(jié)再生中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度及基因型篩選[J]. 中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)，2011，33（2）：123-129.

[14]謝從華，柳俊. 植物細(xì)胞工程[M]. 北京：高等教育出版社，2004：236.

[15]朱學(xué)藝，梁曉芳，李紅芳. 激素對(duì)大豆懸浮細(xì)胞系愈傷組織誘導(dǎo)的影響[J]. 廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2008，47（4）：562-566.

[16]李大瑋，Schmid J，Keller E R. 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的使用和大豆愈傷組織的誘導(dǎo)及保持[J]. 遺傳，1989，11（2）：1-4，49.

摘要：以3個(gè)基因型大豆無(wú)菌實(shí)生苗的真葉和胚軸為外植體，在MS培養(yǎng)基上附加不同濃度的TDZ、NAA、6-BA以及2，4-D，研究不同激素濃度對(duì)大豆愈傷組織誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)的影響，結(jié)果表明：在愈傷組織誘導(dǎo)階段，以真葉為外植體時(shí)，吉農(nóng)28+1.5 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA+200 mg/L 活性炭為最佳組合；以胚軸為外植體，吉農(nóng)17+1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+200 mg/L 活性炭為最佳組合。在繼代組織培養(yǎng)階段，對(duì)真葉誘導(dǎo)形成的愈傷組織而言，吉農(nóng)17+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+3.0 mg/L2，4-D為最佳組合；對(duì)胚軸誘導(dǎo)的愈傷組織而言，吉農(nóng)17+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+2.0 mg/L2，4-D為最佳組合。

關(guān)鍵詞：大豆；愈傷組織；激素；繼代培養(yǎng)

中圖分類號(hào)： S565.104 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）04-0040-02

收稿日期：2013-08-19

基金項(xiàng)目：吉林省科技發(fā)展計(jì)劃（編號(hào)：201101111）；吉林省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（編號(hào)：2011-41）；吉林省科技廳項(xiàng)目（編號(hào)：20120215）；吉林省科技成果轉(zhuǎn)化補(bǔ)助項(xiàng)目（編號(hào)：20095044）；吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)科研啟動(dòng)基金（編號(hào)：201242）。

作者簡(jiǎn)介：劉思言（1979—），女，吉林四平人，碩士，講師，主要從事作物生物技術(shù)研究。E-mail：siyan_2001@163.com。

通信作者：王丕武，教授，博士生導(dǎo)師。E-mail：peiwuw@yahoo.com.cn。大豆是全世界重要的糧食和經(jīng)濟(jì)作物，也是人類主要的食用蛋白和工業(yè)原料來(lái)源，與人們的日常生活息息相關(guān)[1-2]。大豆的組織培養(yǎng)技術(shù)起步較晚，直到20世紀(jì)80年代的中后期大豆組織培養(yǎng)技術(shù)才取得了突破性的進(jìn)展，大豆的原生質(zhì)體培養(yǎng)、子葉節(jié)培養(yǎng)和胚尖培養(yǎng)相繼取得了成功[3-13]。但大豆愈傷組織誘導(dǎo)的研究相對(duì)較少，而愈傷組織誘導(dǎo)具有外植體來(lái)源廣泛，擴(kuò)繁量大等優(yōu)點(diǎn)[14]。尤其是隨著近些年來(lái)大豆遺傳轉(zhuǎn)化的研究越來(lái)越多，能通過(guò)愈傷組織誘導(dǎo)建立一個(gè)高效的遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)更具有重要的意義。本試驗(yàn)以TDZ、NAA、6-BA、2，4-D為供試激素作為生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，以吉農(nóng)28、吉農(nóng)27、吉農(nóng)17 3種基因型為材料，進(jìn)行大豆愈傷組織的誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)，以期找到最適合誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)大豆愈傷組織的培養(yǎng)基，為建立一個(gè)高效的大豆愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

吉農(nóng)28、 吉農(nóng)27、 吉農(nóng)17的種子均由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生物技術(shù)中心提供。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1種子的萌發(fā)挑取成熟飽滿的大豆種子，先用75%的乙醇消毒30 s，再用0.1%的升汞溶液消毒10 min，無(wú)菌水沖洗3～5次，接種到MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)7 d后取胚軸，14 d后取真葉作為外植體材料。

1.2.2愈傷組織的誘導(dǎo)以無(wú)菌實(shí)生苗的胚軸、真葉為外植體，分別接種于添加不同濃度激素的MS愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，采用四因素三水平的L9（34）正交設(shè)計(jì)（表1），將各處理放置于黑暗條件下培養(yǎng)7 d，然后置于恒溫的黑暗12 h，光照12 h的培養(yǎng)箱中，于20 d后統(tǒng)計(jì)其愈傷組織誘導(dǎo)情況。

傷組織的誘導(dǎo)多以一定濃度的2，4-D和6-BA配合使用，朱學(xué)藝等[15]在培養(yǎng)基中添加6-BA后，愈傷組織出愈率低，形成的愈傷組織結(jié)構(gòu)緊密，呈小顆粒狀；NAA和6-BA結(jié)合使用誘導(dǎo)出的大豆愈傷組織也呈現(xiàn)質(zhì)地堅(jiān)硬的特點(diǎn)，愈傷組織量也相對(duì)較少[16]。TDZ是一種苯基脲衍生物，具有類細(xì)胞分裂素活性，已被廣泛用于大豆組織培養(yǎng)，在孫明杰[24]等的研究中使用低濃度TDZ和6-BA配比，通過(guò)愈傷組織途徑獲得再生植株，提高了植株再生效率。本研究以3種不同基因型大豆的真葉及胚軸為外植體，不同的激素配比進(jìn)行大豆愈傷組織誘導(dǎo)和繼代研究，結(jié)果表明，在愈傷組織誘導(dǎo)階段：以真葉為外植體時(shí)，最佳的組合為吉農(nóng)28+1.5 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA+200 mg/L 活性炭；當(dāng)以胚軸作為外植體時(shí)，誘導(dǎo)愈傷組織最佳組合為吉農(nóng)17+1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+200 mg/L 活性炭。在愈傷組織繼代培養(yǎng)階段：以真葉作為外植體時(shí)，最佳的組合為吉農(nóng)17+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+3.0 mg/L 2，4-D；以胚軸為外植體時(shí)，最佳的組合為吉農(nóng)17+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+2.0 mg/L 2，4-D。

參考文獻(xiàn)：

[1]Wang H J，Murphy P A. Isoflavone content in commercial soybean foods[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，1994，42：1666-1673.

[2]楊超. 大豆植株再生和遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)體系的研究[D]. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

[3]Cheng T Y，Saka H，Voqui-Dinh T H. Plant regeneration from soybean cotyledonary node segments in culture[J]. Plant Science Letters，1980，19：91-99.

[4]肖文言，王連錚. 大豆幼莢子葉原生質(zhì)體培養(yǎng)及植株再生[J]. 作物學(xué)報(bào)，1994，20（6）：665-669，769.

[5]王升吉，吳元華，王洪巖，等. 大豆不同外植體組織培養(yǎng)及再生研究[J]. 沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，30（3）：255-259.

[6]Yoshida T. Adventitious shoot formation from hypocotyls sections of mature soybean seeds[J]. Breeding Science，2002，52：1-8.

[7]邱承祥，武天龍. 6-BA對(duì)大豆莖尖誘導(dǎo)再生植株的研究[J]. 大豆科學(xué)，2003，22（1）：32-35.

[8]Wang P，Wang G，Jing J I，et al. A novel systerm for proliferation，maintenance and plantlet germination from somatic embryo of soybean[J]. Acta Botanica Sinica，2004，46（2）：154-158.

[9]林樹(shù)柱，曹越平，衛(wèi)志明，等. 6-BA誘導(dǎo)大豆子葉節(jié)和莖尖出芽的研究[J]. 上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)：農(nóng)業(yè)科學(xué)版，2005，23（2）：138-142.

[10]李海燕，武小霞，劉淼，等. 大豆子葉節(jié)、胚尖再生植株的研究[J]. 大豆科學(xué)，2007，26（5）：709-712.

[11]孫文麗，劉昱輝，吳元華，等. 大豆胚尖再生體系的建立及轉(zhuǎn)基因初步研究[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，47（6）：615-618.

[12]張東旭，張潔，商蕾，等. 大豆胚尖再生體系的研究[J]. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，31（4）：7-13.

[13]武小霞，李靜，姜成濤，等. 大豆子葉節(jié)再生中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度及基因型篩選[J]. 中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)，2011，33（2）：123-129.

[14]謝從華，柳俊. 植物細(xì)胞工程[M]. 北京：高等教育出版社，2004：236.

[15]朱學(xué)藝，梁曉芳，李紅芳. 激素對(duì)大豆懸浮細(xì)胞系愈傷組織誘導(dǎo)的影響[J]. 廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2008，47（4）：562-566.

[16]李大瑋，Schmid J，Keller E R. 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的使用和大豆愈傷組織的誘導(dǎo)及保持[J]. 遺傳，1989，11（2）：1-4，49.

摘要：以3個(gè)基因型大豆無(wú)菌實(shí)生苗的真葉和胚軸為外植體，在MS培養(yǎng)基上附加不同濃度的TDZ、NAA、6-BA以及2，4-D，研究不同激素濃度對(duì)大豆愈傷組織誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)的影響，結(jié)果表明：在愈傷組織誘導(dǎo)階段，以真葉為外植體時(shí)，吉農(nóng)28+1.5 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA+200 mg/L 活性炭為最佳組合；以胚軸為外植體，吉農(nóng)17+1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+200 mg/L 活性炭為最佳組合。在繼代組織培養(yǎng)階段，對(duì)真葉誘導(dǎo)形成的愈傷組織而言，吉農(nóng)17+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+3.0 mg/L2，4-D為最佳組合；對(duì)胚軸誘導(dǎo)的愈傷組織而言，吉農(nóng)17+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+2.0 mg/L2，4-D為最佳組合。

關(guān)鍵詞：大豆；愈傷組織；激素；繼代培養(yǎng)

中圖分類號(hào)： S565.104 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）04-0040-02

收稿日期：2013-08-19

基金項(xiàng)目：吉林省科技發(fā)展計(jì)劃（編號(hào)：201101111）；吉林省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（編號(hào)：2011-41）；吉林省科技廳項(xiàng)目（編號(hào)：20120215）；吉林省科技成果轉(zhuǎn)化補(bǔ)助項(xiàng)目（編號(hào)：20095044）；吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)科研啟動(dòng)基金（編號(hào)：201242）。

作者簡(jiǎn)介：劉思言（1979—），女，吉林四平人，碩士，講師，主要從事作物生物技術(shù)研究。E-mail：siyan_2001@163.com。

通信作者：王丕武，教授，博士生導(dǎo)師。E-mail：peiwuw@yahoo.com.cn。大豆是全世界重要的糧食和經(jīng)濟(jì)作物，也是人類主要的食用蛋白和工業(yè)原料來(lái)源，與人們的日常生活息息相關(guān)[1-2]。大豆的組織培養(yǎng)技術(shù)起步較晚，直到20世紀(jì)80年代的中后期大豆組織培養(yǎng)技術(shù)才取得了突破性的進(jìn)展，大豆的原生質(zhì)體培養(yǎng)、子葉節(jié)培養(yǎng)和胚尖培養(yǎng)相繼取得了成功[3-13]。但大豆愈傷組織誘導(dǎo)的研究相對(duì)較少，而愈傷組織誘導(dǎo)具有外植體來(lái)源廣泛，擴(kuò)繁量大等優(yōu)點(diǎn)[14]。尤其是隨著近些年來(lái)大豆遺傳轉(zhuǎn)化的研究越來(lái)越多，能通過(guò)愈傷組織誘導(dǎo)建立一個(gè)高效的遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)更具有重要的意義。本試驗(yàn)以TDZ、NAA、6-BA、2，4-D為供試激素作為生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，以吉農(nóng)28、吉農(nóng)27、吉農(nóng)17 3種基因型為材料，進(jìn)行大豆愈傷組織的誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)，以期找到最適合誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)大豆愈傷組織的培養(yǎng)基，為建立一個(gè)高效的大豆愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

吉農(nóng)28、 吉農(nóng)27、 吉農(nóng)17的種子均由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生物技術(shù)中心提供。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1種子的萌發(fā)挑取成熟飽滿的大豆種子，先用75%的乙醇消毒30 s，再用0.1%的升汞溶液消毒10 min，無(wú)菌水沖洗3～5次，接種到MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)7 d后取胚軸，14 d后取真葉作為外植體材料。

1.2.2愈傷組織的誘導(dǎo)以無(wú)菌實(shí)生苗的胚軸、真葉為外植體，分別接種于添加不同濃度激素的MS愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，采用四因素三水平的L9（34）正交設(shè)計(jì)（表1），將各處理放置于黑暗條件下培養(yǎng)7 d，然后置于恒溫的黑暗12 h，光照12 h的培養(yǎng)箱中，于20 d后統(tǒng)計(jì)其愈傷組織誘導(dǎo)情況。

傷組織的誘導(dǎo)多以一定濃度的2，4-D和6-BA配合使用，朱學(xué)藝等[15]在培養(yǎng)基中添加6-BA后，愈傷組織出愈率低，形成的愈傷組織結(jié)構(gòu)緊密，呈小顆粒狀；NAA和6-BA結(jié)合使用誘導(dǎo)出的大豆愈傷組織也呈現(xiàn)質(zhì)地堅(jiān)硬的特點(diǎn)，愈傷組織量也相對(duì)較少[16]。TDZ是一種苯基脲衍生物，具有類細(xì)胞分裂素活性，已被廣泛用于大豆組織培養(yǎng)，在孫明杰[24]等的研究中使用低濃度TDZ和6-BA配比，通過(guò)愈傷組織途徑獲得再生植株，提高了植株再生效率。本研究以3種不同基因型大豆的真葉及胚軸為外植體，不同的激素配比進(jìn)行大豆愈傷組織誘導(dǎo)和繼代研究，結(jié)果表明，在愈傷組織誘導(dǎo)階段：以真葉為外植體時(shí)，最佳的組合為吉農(nóng)28+1.5 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA+200 mg/L 活性炭；當(dāng)以胚軸作為外植體時(shí)，誘導(dǎo)愈傷組織最佳組合為吉農(nóng)17+1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+200 mg/L 活性炭。在愈傷組織繼代培養(yǎng)階段：以真葉作為外植體時(shí)，最佳的組合為吉農(nóng)17+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+3.0 mg/L 2，4-D；以胚軸為外植體時(shí)，最佳的組合為吉農(nóng)17+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+2.0 mg/L 2，4-D。

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