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        針刺對(duì)慢性腦缺血腦皮質(zhì)區(qū)自由基相關(guān)指標(biāo)影響及其機(jī)制

        2014-07-09 01:42:00張文麗詹宇豪沈俊明等
        關(guān)鍵詞:自由基針刺

        張文麗+詹宇豪+沈俊明等

        【摘要】 目的:明確針刺對(duì)慢性腦缺血的腦皮質(zhì)區(qū)自由基相關(guān)指標(biāo)影響及其機(jī)制。方法:將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為正常、慢性腦缺血(IR)和針刺組,對(duì)比觀察各組動(dòng)物慢性腦缺血5周時(shí)腦皮質(zhì)病理變化及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)含量的影響。結(jié)果:IR組SOD 值較正常組顯著降低,針刺組的SOD活性表達(dá)明顯高于IR組,ROS、XOD活性低于IR組,而MDA的活性明顯低于IR組(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論:針刺對(duì)慢性腦缺血有一定保護(hù)作用,此作用機(jī)制可能是針刺通過(guò)清除自由基,降低脂質(zhì)過(guò)氧化應(yīng)激而保護(hù)慢性腦缺血的神經(jīng)功能損傷。

        【關(guān)鍵詞】 針刺; 自由基; 慢性腦缺血

        慢性腦缺血表現(xiàn)為頭痛、頭暈、失眠、記憶力減退、健忘等癥狀,是臨床常見(jiàn)病、多發(fā)病之一;近年來(lái)呈逐年上升并有年輕化的趨勢(shì),嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量。在人類(lèi)對(duì)抗腦血管疾病的歷史進(jìn)程中,針刺發(fā)揮了非常重要作用,為中華民族的醫(yī)療衛(wèi)生做出了不可磨滅的貢獻(xiàn),是中國(guó)腦血管病防治的特色所在[1-3]。現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)針刺能不同程度提高腦耐缺血缺氧能力,而且對(duì)慢性腦缺血多偏重于臨床治療觀察[4-5],本文從基礎(chǔ)研究入手旨在探討針刺對(duì)慢性腦缺血腦皮質(zhì)區(qū)自由基相關(guān)指標(biāo)影響及其機(jī)制。

        1 材料與方法

        1.1 材料 30只Wistar 健康雄性大鼠體重250~320 g;購(gòu)于北京維通利華公司。SOD、ROS、MDA、XOD試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

        1.2 動(dòng)物分組 動(dòng)物隨機(jī)分成正常組、慢性腦缺血組(IR)、針刺組,每組10只;針刺組于第一次腦缺血后2 h內(nèi)立即針刺,以后每日一次針刺大椎、百會(huì)穴30 min。各組均常規(guī)飼養(yǎng)。

        1.3 模型制備 通過(guò)兩血管法即雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎建立腦缺血模型,模型大鼠在1周內(nèi)分2次結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈(分別在第1天和第7天)。術(shù)前禁食12 h、禁水4 h。仰臥位,10%水合氯醛0.3 mL/100 g腹腔注射麻醉,頸部消毒后正中切開(kāi),鈍性分離出一側(cè)迷走神經(jīng)與頸總動(dòng)脈,用4號(hào)絲線雙重結(jié)扎一側(cè)頸總動(dòng)脈,縫合時(shí)切口內(nèi)注慶大霉素注射液4萬(wàn)單位預(yù)防感染。該側(cè)結(jié)扎后間隔7 d行第二次手術(shù),同法結(jié)扎該側(cè)頸總動(dòng)脈。大鼠術(shù)后放保溫毯上使其肛溫保持在36.5~37.0 ℃至蘇醒。制作模型過(guò)程中未有死亡動(dòng)物。

        1.4 針刺方法 針刺參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》中大鼠的常用針灸穴位定位方法,自制針刺鼠裝置;選取“百會(huì)、大椎”?!鞍贂?huì)”穴在頂骨正中,“大椎”穴在背部正中第7頸椎與第1胸椎間。刺法:以30號(hào)1寸毫針(天協(xié)牌,蘇州天協(xié)針灸器械有限公司生產(chǎn))向前斜刺入“百會(huì)”5 mm,直刺入“大椎”5 mm。捻轉(zhuǎn)1 min后,留針30 min,每隔5分鐘捻針一次。每天1次,均在上午10點(diǎn)左右進(jìn)行,連續(xù)治療5周。針刺組大鼠于末次進(jìn)針后4 h內(nèi)用10%水合氯醛腹腔麻醉后迅速斷頭取腦。

        1.5 腦皮質(zhì)病理變化 取額葉皮質(zhì)多聚甲醛內(nèi)固定,然后進(jìn)行HE染色觀察病理變化。

        1.6 腦皮質(zhì)自由基相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定 取解凍后腦皮質(zhì),用天平稱(chēng)重,按照1:9 w/v加入生理鹽水,組織在水浴中勻漿,低溫離心機(jī)中離心10 min取上清液(2000 r/min),采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定腦組織超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力;硫代巴比妥酸法測(cè)定腦丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量?;钚匝酰╮eactive oxygen species,ROS)、黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)活力含量測(cè)定采用比色法。具體操作按照南京建成生物工程研究所提供的試劑盒內(nèi)操作指南進(jìn)行。

        1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料以(x±s)表示,采用方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 各組大鼠腦皮質(zhì)區(qū)病理學(xué)改變 正常組額葉皮層細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列整齊,皮層神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞正常。IR組時(shí)額葉皮層細(xì)胞固縮、壞死,小血管水腫明顯、有的管腔出現(xiàn)閉塞;神經(jīng)元變性壞死,數(shù)量明顯減少,排列稀疏,錐體細(xì)胞層變薄,核變淺,基質(zhì)疏松及空泡形成。針刺組額葉皮層,神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常,出現(xiàn)少量錐體細(xì)胞脫失,部分錐體細(xì)胞缺血明顯改善,可見(jiàn)膠質(zhì)細(xì)胞和小血管增生。

        2.2 各組大鼠腦組織ROS、MDA、XOD、SOD的變化 如表1所示,與正常組比較,慢性腦缺血組SOD 值顯著降低(P<0.05), 而ROS、XOD、MDA均顯著升高(P<0.01)。與IR 組比較,針刺組SOD 顯著升高(P<0.05),ROS、XOD、MDA均顯著降低(P<0.05或P<0.01)。

        3 討論

        慢性腦缺血是通過(guò)各種原因引起長(zhǎng)期的腦灌注不足,腦發(fā)生組織病理改變,國(guó)內(nèi)外大量研究發(fā)現(xiàn)大多數(shù)腦梗死和老年癡呆癥的發(fā)病前期都曾有長(zhǎng)期慢性腦缺血的存在[6]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)1周內(nèi)分2次手術(shù)進(jìn)行永久性結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈,制備慢性腦缺血的動(dòng)物模型,這種方法實(shí)質(zhì)上是以慢性低灌注引起腦缺血缺氧,最終導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的功能下降、學(xué)習(xí)記憶功能障礙。此模型能較好地模擬人類(lèi)因動(dòng)脈管腔狹窄、動(dòng)脈粥樣硬化等因素導(dǎo)致的血管性腦卒中。有人認(rèn)為大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎后2.5 h腦血流量減少25%~90%,1周后仍下降并持續(xù)數(shù)月。且結(jié)扎1周皮層葡萄糖利用下降20%~30%,海馬葡萄糖利用下降15%。雙側(cè)頸總動(dòng)脈術(shù)后3周即為慢性缺血期[7]。氧化應(yīng)激損傷被認(rèn)為是引起慢性腦缺血后神經(jīng)細(xì)胞損傷的重要因素之一。神經(jīng)細(xì)胞對(duì)氧自由基極為敏感,產(chǎn)生一系列自由基連鎖反應(yīng),攻擊灰質(zhì)的神經(jīng)元等富含脂質(zhì)的腦組織,造成嚴(yán)重的氧化應(yīng)激狀態(tài),誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡,并使初始缺血損傷不嚴(yán)重的神經(jīng)元也發(fā)生壞死[8]。endprint

        根據(jù)傳統(tǒng)理論,針刺可以疏通經(jīng)絡(luò),調(diào)和氣血,治療疾病。其治療機(jī)理也越來(lái)越成為研究的熱點(diǎn)。Tanaka等[9]發(fā)現(xiàn)雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)后1 d至6周,SOD活性較對(duì)照組下降明顯;其他實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)電針能降低大鼠腦組織內(nèi)MDA含量, 增強(qiáng)SOD活性[10-11]。這與筆者的部分結(jié)果相一致。在慢性腦缺血過(guò)程中,自由基直接攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸,使其發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),從而導(dǎo)致神經(jīng)元的損傷[8]。MDA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物,其含量的變化間接的反應(yīng)了腦組織中氧自由基含量的變化。SOD對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用,是機(jī)體清除氧自由基、防止生成羥自由基、阻斷自由基病理性連鎖反應(yīng)最重要的防御酶,保護(hù)細(xì)胞免受損傷。XOD屬需氧脫氫酶類(lèi),是體內(nèi)核酸代謝中的重要酶。并且在缺氧過(guò)程中其對(duì)自由基的產(chǎn)生起了重要作用。ROS通過(guò)細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡甚至導(dǎo)致其壞死。本研究結(jié)果顯示,針刺后腦組織中ROS、MDA 和XOD 水平降低,而抗氧化酶SOD活性升高,說(shuō)明針刺減輕慢性腦缺血的損傷與其抗氧化作用有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究顯示針刺可以改善慢性腦缺血大鼠額葉皮層神經(jīng)細(xì)胞、錐體細(xì)胞變性、壞死,血管水腫等不可逆的病理生理?yè)p傷,其一系列變化與氧化應(yīng)激密切相關(guān)。因此針刺可以挽救瀕死的神經(jīng)元、啟動(dòng)應(yīng)激機(jī)制、防止腦細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化、減輕自由基對(duì)機(jī)體的損傷。但較多環(huán)節(jié)較多靶點(diǎn)的參與機(jī)制還需進(jìn)一步深入研究。

        參考文獻(xiàn)

        [1] 李寶棟,志勇,白晶,等.頭穴叢刺對(duì)大鼠缺血腦組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[J].世界針灸雜志,2008,18(1):38-44.

        [2]楊秋匯.頭針治療急性期缺血性中風(fēng)194例血液流變學(xué)觀察[J].山西中醫(yī),2007,23(4):54.

        [3]孫文華,馬雄英.水針針刺并用對(duì)腦血栓患者血液流變學(xué)的影響[J].中外醫(yī)療,2010,29(1) :118.

        [4]唐曦,劉小衛(wèi),殷堅(jiān),等.全經(jīng)針刺法對(duì)恢復(fù)期腦梗死腦血流動(dòng)力學(xué)影響的臨床研究[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2011,8(17) :102-105.

        [5] Schalow G,Jaigma P.Cerebral palsy improvement achieved by coordination dynamics therapy[J].Electrom yogr Clin Neurophysiol,2005,45(7-8):433-445.

        [6]正公樸, 陳醒言, 朱桐君. 慢性腦缺血與癡呆[J].中國(guó)臨床康復(fù), 2005,9(5):129-131.

        [7] Tanaka K, Wada N, Ogawa N. Chronic cerebral hypoperfusion induces transient reversible monoaminergic changes in the rat brain[J].Neurochem Res,2000,25(2):313-320.

        [8]張瑞,付秀英.熱處理在腦缺血再灌注損傷中的作用及其機(jī)制[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2013,10(33):6-7.

        [9] Tanaka K, Wada N, Miyazaki I, et a1. Chronic cerebral hypoperfusion induces stiatal alterations due to the transient increase of NO production and the depression of glutathnione content [J]. Neurochem Res,2002,27(13):331-336.

        [10] 張?zhí)焐瑮盥?,胡榮,等.不同時(shí)程電針對(duì)大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注區(qū)腦組織興奮性氨基酸含量的影響[J].針刺研究,2007,32(4):234-236.

        [11] Gan Y,Huang G,Zhang M.Effect of acupuncture on neuronal apoptosis after focal cerebral ischemic reperfusion Injury in Rats[J].World Journal of Acupuncture-Moxibustion,2007,17(3):13-16.

        (收稿日期:2014-03-04) (本文編輯:陳丹云)endprint

        根據(jù)傳統(tǒng)理論,針刺可以疏通經(jīng)絡(luò),調(diào)和氣血,治療疾病。其治療機(jī)理也越來(lái)越成為研究的熱點(diǎn)。Tanaka等[9]發(fā)現(xiàn)雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)后1 d至6周,SOD活性較對(duì)照組下降明顯;其他實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)電針能降低大鼠腦組織內(nèi)MDA含量, 增強(qiáng)SOD活性[10-11]。這與筆者的部分結(jié)果相一致。在慢性腦缺血過(guò)程中,自由基直接攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸,使其發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),從而導(dǎo)致神經(jīng)元的損傷[8]。MDA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物,其含量的變化間接的反應(yīng)了腦組織中氧自由基含量的變化。SOD對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用,是機(jī)體清除氧自由基、防止生成羥自由基、阻斷自由基病理性連鎖反應(yīng)最重要的防御酶,保護(hù)細(xì)胞免受損傷。XOD屬需氧脫氫酶類(lèi),是體內(nèi)核酸代謝中的重要酶。并且在缺氧過(guò)程中其對(duì)自由基的產(chǎn)生起了重要作用。ROS通過(guò)細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡甚至導(dǎo)致其壞死。本研究結(jié)果顯示,針刺后腦組織中ROS、MDA 和XOD 水平降低,而抗氧化酶SOD活性升高,說(shuō)明針刺減輕慢性腦缺血的損傷與其抗氧化作用有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究顯示針刺可以改善慢性腦缺血大鼠額葉皮層神經(jīng)細(xì)胞、錐體細(xì)胞變性、壞死,血管水腫等不可逆的病理生理?yè)p傷,其一系列變化與氧化應(yīng)激密切相關(guān)。因此針刺可以挽救瀕死的神經(jīng)元、啟動(dòng)應(yīng)激機(jī)制、防止腦細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化、減輕自由基對(duì)機(jī)體的損傷。但較多環(huán)節(jié)較多靶點(diǎn)的參與機(jī)制還需進(jìn)一步深入研究。

        參考文獻(xiàn)

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        [4]唐曦,劉小衛(wèi),殷堅(jiān),等.全經(jīng)針刺法對(duì)恢復(fù)期腦梗死腦血流動(dòng)力學(xué)影響的臨床研究[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2011,8(17) :102-105.

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        [10] 張?zhí)焐瑮盥?,胡榮,等.不同時(shí)程電針對(duì)大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注區(qū)腦組織興奮性氨基酸含量的影響[J].針刺研究,2007,32(4):234-236.

        [11] Gan Y,Huang G,Zhang M.Effect of acupuncture on neuronal apoptosis after focal cerebral ischemic reperfusion Injury in Rats[J].World Journal of Acupuncture-Moxibustion,2007,17(3):13-16.

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        根據(jù)傳統(tǒng)理論,針刺可以疏通經(jīng)絡(luò),調(diào)和氣血,治療疾病。其治療機(jī)理也越來(lái)越成為研究的熱點(diǎn)。Tanaka等[9]發(fā)現(xiàn)雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)后1 d至6周,SOD活性較對(duì)照組下降明顯;其他實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)電針能降低大鼠腦組織內(nèi)MDA含量, 增強(qiáng)SOD活性[10-11]。這與筆者的部分結(jié)果相一致。在慢性腦缺血過(guò)程中,自由基直接攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸,使其發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),從而導(dǎo)致神經(jīng)元的損傷[8]。MDA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物,其含量的變化間接的反應(yīng)了腦組織中氧自由基含量的變化。SOD對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用,是機(jī)體清除氧自由基、防止生成羥自由基、阻斷自由基病理性連鎖反應(yīng)最重要的防御酶,保護(hù)細(xì)胞免受損傷。XOD屬需氧脫氫酶類(lèi),是體內(nèi)核酸代謝中的重要酶。并且在缺氧過(guò)程中其對(duì)自由基的產(chǎn)生起了重要作用。ROS通過(guò)細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡甚至導(dǎo)致其壞死。本研究結(jié)果顯示,針刺后腦組織中ROS、MDA 和XOD 水平降低,而抗氧化酶SOD活性升高,說(shuō)明針刺減輕慢性腦缺血的損傷與其抗氧化作用有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究顯示針刺可以改善慢性腦缺血大鼠額葉皮層神經(jīng)細(xì)胞、錐體細(xì)胞變性、壞死,血管水腫等不可逆的病理生理?yè)p傷,其一系列變化與氧化應(yīng)激密切相關(guān)。因此針刺可以挽救瀕死的神經(jīng)元、啟動(dòng)應(yīng)激機(jī)制、防止腦細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化、減輕自由基對(duì)機(jī)體的損傷。但較多環(huán)節(jié)較多靶點(diǎn)的參與機(jī)制還需進(jìn)一步深入研究。

        參考文獻(xiàn)

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        (收稿日期:2014-03-04) (本文編輯:陳丹云)endprint

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