亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        野菊花總黃酮對肺癌細(xì)胞A549作用研究*

        2014-07-09 03:15:28李岳華王麗麗施劍明
        關(guān)鍵詞:野菊花槲皮素抑制率

        李岳華 王麗麗 施劍明

        野菊花為菊科植物野菊 (Chrysanthemum indicum L.)干燥頭狀花序。味苦、辛、性微寒,歸肝心經(jīng)。具有清熱解毒、瀉火平肝之功效。用于治療疔瘡癰腫、目赤腫痛、頭痛眩暈[1]。主要含有萜類、揮發(fā)油、黃酮類化合物、多糖等成分[2]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其具有抗炎、抗腫瘤、保肝、保護(hù)心血管、等多種作用,且具有高效、低毒的特點(diǎn),有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值和研發(fā)潛力[3]。本研究以A549細(xì)胞為研究對象,明確野菊花總黃酮在肺癌細(xì)胞A549中的抗腫瘤效果。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 藥品及試劑 野菊花總黃酮:取自江西廬山野菊花經(jīng)提取純化后所得;肺癌細(xì)胞株A549由南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院江西省消化疾病研究所提供;Solarbio培養(yǎng)基購自 Beijing Solarbio Science&Technology Co,Ltd.;胎牛血清 (Hy clone):購自賽默飛世爾生物化學(xué)制品 (北京有限公司)

        1.1.2 儀器 超凈工作臺 (蘇州凈化設(shè)備有限公司);倒置相差顯微鏡 (NIKON公司);CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱 (SIM公司);多功能酶標(biāo)儀 (BIO-RAD公司);MTS檢測試劑 (普洛麥格<北京>生物技術(shù)有限公司);24孔板、96孔板 (CORNING公司)

        1.2 方法

        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 肺癌A549細(xì)胞接種于含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基 (含雙抗)中,在條件為37℃、5%CO2的孵箱中培養(yǎng),細(xì)胞長至瓶底90%以上開始傳代,且實(shí)驗(yàn)采用對數(shù)增長期細(xì)胞。

        1.2.2 細(xì)胞的藥物干擾及形態(tài)觀察 取對數(shù)增長期的細(xì)胞,用胰酶進(jìn)行常規(guī)消化后稀釋至一定濃度,按1×105個(gè)/毫升接種于24孔板,培養(yǎng)24h后將總黃酮母液用含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基 (含雙抗)稀釋成濃度 (μg/mL)為100、200、300、400、500的備用藥物組。設(shè)陰性對照組 (含0.1%DMSO的完全培養(yǎng)基)、陽性對照組 (濃度為2μg/mL的槲皮素),分別將各濃度藥物加入已種細(xì)胞的24孔板,每孔加至2mL,設(shè)置1個(gè)平行孔。連續(xù)作用3d,分別在1d、2d、3d置于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。

        1.2.3 MTS比色法檢測細(xì)胞增殖抑制及藥物IC50對數(shù)生長期的細(xì)胞A549 用0.25%的胰酶消化成細(xì)胞懸液,調(diào)整至一定的細(xì)胞濃度,按5000個(gè)/孔接種于96孔板,每孔200μL,均做4個(gè)平行孔,于37℃ 、5%CO2條件的孵箱中培養(yǎng)24h后換培養(yǎng)液,按1.2.2中的5個(gè)備用藥物組濃度加入野菊花總黃酮,設(shè)陰性對照組 (含0.1%DMSO的完全培養(yǎng)基)、陽性對照組 (濃度為2μg/ml的槲皮素),置于同條件的孵箱中培養(yǎng)。48h后每孔加入MTS 20μL,放回箱內(nèi)培養(yǎng)4h后在酶標(biāo)儀上測定490 nm處的吸光度 (A)值。計(jì)算不同濃度野菊花總黃酮對肺癌A549的生長抑制率 (IR):

        繪制量效曲線,求出藥物對A549細(xì)胞的 (IC 50)。

        1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理數(shù)據(jù),采用±s表示,采用單因素方差分析,當(dāng)p<0.05時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 野菊花總黃酮對A549細(xì)胞作用后的形態(tài)學(xué)觀察

        由圖1、圖2可以看出野菊花組細(xì)胞在同一藥物濃度下隨著時(shí)間的推移及同一時(shí)間下隨著藥物濃度的增高,貼壁細(xì)胞逐漸出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落,細(xì)胞出現(xiàn)了懸浮生長,并有凋亡小體,具有明顯的時(shí)間、濃度依賴性。圖1顯示陰性組隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加細(xì)胞密度逐漸增大,而且細(xì)胞豐滿,形態(tài)大小均一,呈多邊形,細(xì)胞之間連接緊密,貼壁較好。陽性組細(xì)胞隨時(shí)間的推移細(xì)胞逐漸收縮變圓,細(xì)胞間隙明顯增大,少見正常形態(tài)的細(xì)胞,可見凋亡小體。

        圖1 倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài) (×100)

        圖2 倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài) (×400)

        2.2 野菊花總黃酮對A549作用產(chǎn)生的抑制率及藥物IC50

        選擇不同濃度的野菊花總黃酮對A549細(xì)胞作用48h,MTS法測定結(jié)果得知不同濃度藥物對A549細(xì)胞增殖均有抑制作用,其抑制率隨濃度的增大而增強(qiáng) (見表1、圖3)。陰性對照組 (不加藥的細(xì)胞培養(yǎng)液)細(xì)胞接種24h后開始迅速增長,72h細(xì)胞數(shù)量已經(jīng)明顯高于各野菊花總黃酮組。而野菊花總黃酮組處理的細(xì)胞均受到不同程度的抑制,其各濃度組與對照組相比,藥物對細(xì)胞生長抑制作用差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (p<0.05),且抑制率隨著濃度的增加而增強(qiáng),48h時(shí)測出藥物對細(xì)胞的IC50為219.83μg/mL。

        表1 野菊花總黃酮對肺癌A549細(xì)胞增殖影響 (±s,n=5)

        表1 野菊花總黃酮對肺癌A549細(xì)胞增殖影響 (±s,n=5)

        組別 濃度 (μg/mL) 吸光度 (±s,n=4) 生長抑制率 (±s,n=4)野菊花總黃酮500 0.138±0.0347 0.9358±0.0162 400 0.317±0.0584 0.8523±0.0272 300 0.643±0.0697 0.6998±0.0325 200 1.374±0.0489 0.3591±0.0228 100 1.887±0.0687 0.1194±0.0321槲皮素 2 0.572±0.0926 0.7332±0.0432陰性對照 — 2.143±0.0383 —IC50219.83

        圖3 藥物濃度對生長抑制率的影響

        3 討論

        由于環(huán)境、生活習(xí)慣各種因素的影響,肺癌的發(fā)病率和死亡率增長迅速,在多數(shù)城市已處于惡性腫瘤的首位[4],且75%的患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于中晚期,失去了手術(shù)的機(jī)會或手術(shù)的效果不佳。化療是重要的輔助治療方法,然而傳統(tǒng)的化療藥物多具有不同程度的副作用,且長期使用往往出現(xiàn)不同程度的耐藥,限制了這類藥物的使用。已有研究報(bào)道[5]野菊花總提取物對多種腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用,而其中黃酮可能是主要的起效成分。本實(shí)驗(yàn)采用野菊花總黃酮作用于人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞系,研究野菊花總黃酮對細(xì)胞增殖及凋亡的影響。通過倒置相差顯微鏡觀察及MTS檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的凋亡情況隨著藥物濃度及作用時(shí)間的增加而增加,存在明顯時(shí)間和濃度的依賴關(guān)系。

        考慮本次實(shí)驗(yàn)研究的是野菊花中黃酮類化合物的總提取物,具體的有效單體成分有待進(jìn)一步的驗(yàn)證,其中所含的槲皮素、木犀草素、芹菜素等經(jīng)過研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤作用。而槲皮素作為最強(qiáng)的抗癌劑之一,葉蕻芝、李會婷[6]等發(fā)現(xiàn)槲皮素能有效抑制人軟骨肉瘤細(xì)胞的活性,并且抑制作用存在著濃度、時(shí)間、劑量的依賴性。徐統(tǒng)震[7]等研究發(fā)現(xiàn)木犀草素可以有效的將細(xì)胞周期阻滯于G1期、誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡,從而達(dá)到抗癌效果。王晉[8]發(fā)現(xiàn)芹菜素可以直接抑制胃癌多藥耐藥細(xì)胞的生長,誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。即使多方面的研究發(fā)現(xiàn)野菊花中大量的黃酮單體具有抗腫瘤作用,但作用的機(jī)制尚不明確,可能是通過抗自由基作用、抗氧化、抗癌細(xì)胞增殖、干預(yù)癌細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡及抑制癌基因表達(dá)等多種不同途徑來實(shí)現(xiàn)[9]。尹軍強(qiáng)利用槲皮素抗人骨肉瘤細(xì)胞U-2OS/MTX300進(jìn)行了作用機(jī)制的研究,發(fā)現(xiàn)槲皮素能明顯抑制Akt磷酸化從而抑制其活性,持續(xù)活化的Akt能拮抗槲皮素誘導(dǎo)的Akt/Bad蛋白去磷酸化及PARP裂解,從而表現(xiàn)出明顯的抑制增值和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用[10]。張文靜等通過蛋白水平檢測發(fā)現(xiàn)木犀草素抗A549細(xì)胞遷移的分析生物學(xué)基礎(chǔ)與FAK緊密相關(guān),通過抑制FAK磷酸化水平、降低FAK總蛋白的表達(dá)水平,抑制NF-kB信號通路而達(dá)到抑制細(xì)胞的效果[11]。雖然野菊花總黃酮的多種單體具有抗腫瘤效果已被證實(shí),然而本實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮抗腫瘤作用是總黃酮中的單體單獨(dú)發(fā)揮還是相互影響從而達(dá)到協(xié)同抗腫瘤的效果尚不清楚,隨著研究的進(jìn)一步深入,相信野菊花總黃酮在抗肺癌的應(yīng)用方面將會有不錯(cuò)的發(fā)展前景。

        [1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 (一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.295.

        [2]吳釘紅,楊立偉,蘇薇薇,等.野菊花化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展 [J].中藥材,2009,27(2):142.

        [3]王志東,梁容瑞,李宗芳,等.中藥野菊花的藥理作用研究進(jìn)展 [J].醫(yī)學(xué)綜述,2009,16(6):906.

        [4] Jemal A,Siegel R,Ward E,et al.Cancer statistics 2008 [J].Cancer J Clin,2008,58(2):71.

        [5]蘇永華,樊逸夫.野菊花的抗癌功效 [N].上海中醫(yī)藥報(bào),2013-08-09004.

        [6]葉蕻芝,李會婷,李西海,等.槲皮素對人軟骨肉瘤細(xì)胞活性的抑制作用 [J].福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,22(1):22.

        [7]徐統(tǒng)震,孫雪飛,任冬梅,等.木犀草素抑制肺癌細(xì)胞A549的增殖及其聯(lián)合化療作用[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào) (醫(yī)學(xué)版),2012,57(7):50.

        [8]王晉.芹菜素對人胃癌細(xì)胞多藥耐藥性的影響及其機(jī)制 [D].上海:第二軍醫(yī)大學(xué),2007.

        [9]王曉,吳龍火,黃曉平,等.黃酮類化合物的抗癌機(jī)制 [J].中國民族民間醫(yī)藥,2009,18(22):1.

        [10]尹軍強(qiáng),謝顯彪,賈強(qiáng),等.槲皮素對人骨肉瘤細(xì)胞U-2OS/MTX300增殖和凋亡的影響及其機(jī)制研究 [J].中國中藥雜志,2012,58(5):611.

        [11]張文靜,黃啟來,華子春,等.木犀草素抑制人肺腺癌A549細(xì)胞株的運(yùn)動(dòng)及其機(jī)制研究[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào) (醫(yī)學(xué)版),2012,53(4):415.

        猜你喜歡
        野菊花槲皮素抑制率
        中藥單體對黃嘌呤氧化酶的抑制作用
        血栓彈力圖評估PCI后氯吡格雷不敏感患者抗血小板藥物的療效
        野菊花
        日本莢蒾葉片中乙酰膽堿酯酶抑制物的提取工藝優(yōu)化*
        槲皮素改善大鼠銅綠假單胞菌肺感染
        中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:21
        野菊花(外一首)
        天津詩人(2017年2期)2017-11-29 01:24:19
        風(fēng)中的野菊花
        民族音樂(2017年4期)2017-09-22 03:02:50
        槲皮素通過抑制蛋白酶體活性減輕心肌細(xì)胞肥大
        野菊花總黃酮聯(lián)合順鉑對人骨肉瘤MG-63細(xì)胞抑制作用
        中成藥(2014年10期)2014-02-28 22:29:12
        鹽度變化對生物發(fā)光細(xì)菌的毒性抑制作用研究
        av蜜桃视频在线观看| 色婷婷亚洲一区二区三区| 精品久久欧美熟妇www| 亚洲人免费| 日本女优一区二区在线免费观看| av天堂免费在线播放| 国产精品9999久久久久仙踪林| 日产无人区一线二线三线新版| 成年女人a毛片免费视频| 88国产精品视频一区二区三区| 无码人妻中文中字幕一区二区| 国产精品nv在线观看| 久久亚洲免费精品视频| 久久在一区二区三区视频免费观看| 六月丁香综合在线视频| 无遮无挡三级动态图| 精品人妻一区二区三区蜜桃| 国产精品一区av在线| 国产麻豆精品一区二区三区v视界| 亚洲图区欧美| 亚洲国产综合性感三级自拍| 手机看片久久第一人妻| 中国国语毛片免费观看视频| 亚洲国产精品500在线观看| 亚洲精品国产成人久久av盗摄| 欧美噜噜久久久xxx| 国产无套护士在线观看| 一区二区三区国产97| 日本国产精品久久一线 | 蜜乳一区二区三区亚洲国产| 国产精品久久成人网站| 欧美在线三级艳情网站| 日韩精品不卡一区二区三区| 中文字幕日韩人妻少妇毛片| 18分钟处破好疼哭视频在线观看| 精品国产亚欧无码久久久| av国产自拍在线观看| 国产精品成人免费视频一区| 国产精品开放小视频| 日韩精品有码中文字幕| 久久人人爽人人爽人人片av高请 |