麗 麗 紅 梅 王青春 白長喜

1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學，內(nèi)蒙古 呼和浩特 101100;2.呼和浩特市中蒙醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 100500

缺血性心臟病 (IHD)包括冠狀動脈粥樣硬化性心臟病 (冠心病，CHD)，是最常見、最危險的一種心血管病。世界許多國家，尤其是發(fā)達國家人們的首要死因。在我國，CHD是目前主要的健康殺手之一，統(tǒng)計數(shù)字顯示，每年每105例死亡患者中有42例患者死于CHD，值得關注的是我國的CHD發(fā)病率近年來呈逐年增長趨勢，且呈年輕化傾向，已成為全球性的重大的社會公共衛(wèi)生問題，因而診斷和防治本病備受重視［1］。目前，尚缺乏療效、安全性及毒性等方面較理想的治療CHD的藥物。研制多環(huán)節(jié)、多層次、多靶點協(xié)同治療CHD新藥物來提高療效、安全性及減少毒副作用是世界醫(yī)藥科技研究的一個熱點和發(fā)展趨勢，但這種多靶型新藥尚未問世而成為亟待解決的課題［2、3］。

蒙藥吉如很－新2號復方 (簡稱新2號)是目前治療心血管病的蒙藥中療效較好的典型方藥，是國醫(yī)大師蘇榮扎布教授在50多年的治療心血管病的臨床實踐中創(chuàng)造出來的驗方，由廣棗、阿魏、沉香、野牦牛心、肉豆蔻、丁香、藏紅花、白云香、牛黃等16味藥組成，對一些心血管病包括CHD有獨特、顯著的療效，且綠色、安全、廉價，很有推廣應用價值。但目前尚未對新2號治療缺血性心臟病包括CHD的藥理作用及其機理，藥效物質(zhì)基礎 (有效成分)等進行現(xiàn)代科學研究和闡釋，從而嚴重影響著科學地推廣應用新2號治療CHD及以新2號為基礎研發(fā)更有效、安全的治療CHD的新藥。

前期研究表明，在缺血性心臟病的大鼠模型上，新2號復方通過改善心電圖S－T段、T波改變，明顯升高已降低的血清一氧化氮 (nitric oxide，NO)濃度，明顯降低已升高的血清乳酸脫氫酶 (LDH)、肌酸激酶 (CK)含量等藥理作用，有明顯保護缺血引起的心肌損害和心功能的作用。本研究為了進一步探討新2號復方中各組分對治療缺血性心臟病的藥效，進一步闡明新2號復方中的“主藥”和“佐藥”，在新2號基礎上研發(fā)有更好療效、安全的新蒙藥甚至多靶型分子配方創(chuàng)新藥提供線索和依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 健康SD大鼠 (SPF級)，體重200±20g，70只，由北京維通利華實驗動物中心提供。分別雌雄各半，飼養(yǎng)環(huán)境為清潔級，隨機分為10組，即給藥組:新2號復方組、白云香組、兔心組、紫硇砂組、阿魏組、木香組、白澶香組、梔子組，正常組和模型組。

1.2 實驗儀器 Sapphi re 600全自動生化分析儀 (愛爾蘭)，TU－1901紫外分光光度計 (北京)，GBV2258－90離心機 (河北)，JA503電子天平 (上海)，HH－601超級恒溫水浴鍋 (江蘇)，毛吸細管，BL－420S生物機能實驗系統(tǒng)，大鼠灌胃器。

1.3 藥品及試劑 冰片、地丁、梔子、白澶香、黃伯、木棉花、兔心、白云香、紫硇砂、阿魏、木香、梔子 (呼和浩特藥品公司提供)，蒙藥新2號 (批號:980446，內(nèi)蒙古民族大學附屬醫(yī)院提供)，0.9%生理鹽水 (批號:101101，安微雙鶴藥業(yè)有限責任公司制)，一氧化氮試劑 (批號:32516181016，南京建成科技有限公司提供)。

1.4 實驗方法

1.4.1 造模方法 寒涼性蒙藥冰片、梔子、地丁、木棉花、白檀香、黃柏等按 1.5∶1.5∶1∶2.5∶1.5∶1 比率取出。然后粉碎成粉末，過100目篩。在60度的恒溫水浴鍋上制成30mg/ml的水煎劑［4］。除了正常組以外每組60mg/200g，每日2次/鼠，灌胃給藥4周 (分別早上9點和下午四點)，同時采用控食、驚勞等 (時間不固定)綜合方法建立心“氣虛”型心刺痛SD大鼠模型。

1.4.2 空食方法 通過觀察，正常組每天30g/每只，實驗組15g/每只。

1.4.3 驚勞方法 實驗組大鼠每天固定時間游泳下沉10分鐘，以最大限度的耗竭動物的體能。游泳標準為動作明顯失調(diào)、慌張，鼻部在水面上下游動10分鐘。同時采用不同時間段驚嚇的方法［5］。

1.4.4 給藥方法 兔心組、白澶香組、白云香組、紫硇砂組、梔子組、木香組、阿魏組從第五周開始按體重比率分別 0.005g/200g、 0.004g/200g、 0.002g/200g、 0.002g/200g、0.002g/200g、0.003g/200g、0.7mg/200g量每天 (上午10點和下午五點)給藥兩次，持續(xù)兩周。正常組給予等量的0.9%生理鹽水，其它組模型藥不能間斷，跟原來一樣照常給。

1.5 觀察指標

1.5.1 心電圖 分別是實驗開始后的第四周和第六周，用少量乙醚把大鼠麻醉后，仰臥位固定，將針狀電極插入四肢皮下，分別記錄20S、40S、60SⅡ?qū)?lián)心電圖。并觀察T波高度、S－T段位移和心率變化，并比較心電圖變化差異［6］。結果均以均數(shù)±標準差 (±s)表示。

1.5.2 血清一氧化氮含量 實驗開始后的第四周和第六周，給藥完空腹12小時后眼眶取血3－5ml血液放入塑料管中靜置2－3h，待血凝后以3500 r/min離心10min，分離血清0.1ml，放入離心管中，置于零下80度冰箱貯藏備用。采用分光光度計比色法檢測NO含量。嚴格按照試劑盒說明的操作程序測定大鼠血清NO。

1.5.3 乳酸脫氫酶和肌酸激酶 實驗開始后的第4周和6周，給藥完空腹12小時后眼眶取血3－5ml血液放入塑料管中靜置2－3h，待血凝后以3500r/min離心10min，分離血清0.1ml，放入離心管中，置于零下80度冰箱儲藏備用。

1.6 統(tǒng)計方法學 采用SPSS1.5統(tǒng)計學分析，數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差 (±s)表示，兩組間使用t檢驗方法，多組間使用F檢驗方法。P＜0.05為具有統(tǒng)計學意義。

2 實驗結果

2.1 心“氣虛”型心肌缺血大鼠模型的建立 按上述方法制作心“氣虛”型心肌缺血大鼠模型，第四周造模成功，主要依據(jù)為:模型大鼠心電圖T波、ST段改變、心率減慢，血清NO明顯降低，血清LDH、CK明顯升高，模型組上述檢測指標第一周與第四周比較差異有高度統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)，說明造模成功并穩(wěn)定，模型組上述檢測指標第四周與第六周比較差異無統(tǒng)計學意義 (P＞0.05)結果見表1。

表1 心“氣虛”型心肌缺血大鼠模型建立指標結果

2.2 新2號組分對心“氣虛”型心肌缺血大鼠心電圖改變的影響 在上述模型的基礎上，第四周對給藥組動物給藥后，第6周檢測各項指標均有明顯改善心“氣虛”型心肌缺血引起的心電圖S－T段位移的作用。在第六周，模型組與正常組比較在心電圖T波、ST段改變、心率減慢 (P＜0.01)，給藥組與模型組的比較新2號組、阿魏組、兔心組、白云香組、木香組心電圖T波、ST段位移差異有高度統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)。組分組與新2號組比較白澶香組與白云香組心電圖S－T段位移有高度統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)。經(jīng)七個新2號組分組倆倆之間比較，阿魏組、云香組、兔心組、木香組之間差異無統(tǒng)計學意義 (P＞0.05)，均有減少心“氣虛”型心肌缺血引起的ST段位移的作用。結果見表2。

表2 新2號組分對心“氣虛”型心肌缺血大鼠心電圖改變的影響 (n=7，±s)

表2 新2號組分對心“氣虛”型心肌缺血大鼠心電圖改變的影響 (n=7，±s)

注:與模型組比較*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與正常組比較●P＜0.05，●●P＜0.01;與新 2號組比較★P＜0.05，★★P＜0.01。下同。

組別 T波 ST波321±51.11兔心 0.103±0.032＊＊ 0.171±0.0421★＊ 318±46.9白澶香 0.172±.0.059●●★★ 0.187±0.041 288±11.40●●紫硇砂 0.135±0.046●● 0.195±0.068★ 295.±11.30●梔子 0.179±0.059●●★ 0.208±0.064●★ 285±13.82●●白云香 0.143 ±0.022●●＊＊★★ 0.158 ±0.033＊＊★ 296 ±8.85●●木香 0.140±0.022●●＊＊ 0.147±0.027＊＊ 296±7.95●●模型 0.190±0.033●● 0.211±0.024●● 287±14.7●●新2號 0.1065±0.016＊＊ 0.1268±0.010＊＊ 322.2±3.6＊＊正常組 0.0804±0.015＊＊ 0.1362±0.058＊＊ 317.9±18.9心率阿魏 0.111±0.084●●＊＊ 0.136±0.016＊＊＊＊

表3 新2號組分對心氣虛型心肌缺血大鼠血清NO含量的影響 (n=7，±s)

表3 新2號組分對心氣虛型心肌缺血大鼠血清NO含量的影響 (n=7，±s)

注:同上。

組別 第六周血清NO(umol/L)阿魏 35.55±11.20＊＊★★●●兔心 63.28±7.98＊＊●●白澶香 40.23±11.01★★●●紫硇砂 37.11±10.75★★●●梔子 39.07±10.70★★●●白云香 43.96±9.06★★●●木香 38.67±10.15★★●●模型 40.59±10.17●●新2號 71.53±27.34＊＊正常組 74..61±10.62

2.3 新2號組分對心“氣虛”型心肌缺血大鼠血清一氧化氮含量的影響 在上述模型的基礎上，第四周對給藥組動物給藥后，第六周檢測血清NO指標，模型組與正常組比較差異有高度統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)，給藥組與模型組比較兔心組與新2號組差異有高度統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)，七個組分組跟新2號組比較跟兔心組之間的差異無統(tǒng)計學意義 (P＞0.05)。經(jīng)七個組分組倆倆比較，兔心組改善心“氣虛”型心肌缺血引起的血清NO降低的作用。結果見表3。

2.4 新2號組分對心“氣虛“型心肌缺血大鼠血清乳酸脫氫酶和肌酸激酶含量的影響 在上述模型的基礎上，第四周對給藥組動物給藥后，第六周檢測各項指標，正常組與模型組比較血清LDH、CK含量有高度統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)。給藥組與模型組比較兔心組與新2號組差異有高度統(tǒng)計學意義 (P＜0.01)，七個組分組跟新2號復方組 (簡稱新2號組)比較跟兔心組之間的差異無統(tǒng)計學意義 (P＞0.05)。經(jīng)七個組分組倆倆比較，兔心組改善心“氣虛”型心肌缺血引起的血清LDH、CK含量升高的作用。結果見表4。

表4 新2號組分對心氣虛型心肌缺血大鼠血清LDH和CK含量的影響 (n=7，±s)

表4 新2號組分對心氣虛型心肌缺血大鼠血清LDH和CK含量的影響 (n=7，±s)

注:同上。

第六周組別 LDH(U/L) CK(U/L)阿魏 1003.6±19.01●●★★ 910.0±7.48●●★★兔心 963.6±10.69＊＊●●★ 661.9±16.10●●＊＊★白澶香 1001.9±9.69●●★★ 920.9±12.10●●★★梔子 1020.9 ±9.69●●★★ 914.6±9.09●●★★紫硇砂 1014.7±9.83●●★★ 924.6±11.47●●★★白云香 1001.6±7.93●●★★ 908.3±6.80●●★★木香 1008.4 ±12.23●●★★ 916.1±9.44●●★★模型 1019.9±66.94●●★★ 924.43±13.00●●＊＊正常組 923.6±16.98 636.0±10.47新2號 947.6±15.23●●＊＊ 637.7±16.00●●＊＊

3 討論

蒙醫(yī)學認為冠心病心絞痛屬蒙醫(yī)“心刺痛” (吉如很－哈特拉嘎)之范疇，以冠心病中的穩(wěn)定型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛、心肌梗死可歸入心刺痛各型。 《四部醫(yī)典》［7］、《哲對寧諾爾》［8］將心刺痛分為赫依性 (或心氣虛型)心刺痛、齊素性心刺痛。《蒙醫(yī)內(nèi)科學》［9］分為赫依偏盛型、齊素偏盛型、黏性心刺痛3種。

為了明確新2號復方的“主藥”和“佐藥”，以蒙醫(yī)藥與現(xiàn)代科學技術結合的思路與方法，用寒涼性蒙藥冰片、梔子、地丁、木棉花、白檀香、黃柏等制成的水煎劑灌胃大鼠與控食、驚勞大鼠等結合的綜合方法建立心“氣虛”型心刺痛模型，用新－2號復方的組分單味藥進行干預并觀察了藥理作用。蒙藥方劑一般有主 (君藥)、輔藥 (臣藥)、佐藥、使藥等四部分組成。主藥是指對某種疾病或病變部位起到重要治療作用的方劑組份藥物;臣藥是指協(xié)同君藥增強其功效，對主癥和其他癥狀有治療作用的方劑組分藥物;佐藥是指具有協(xié)同君藥治療附加癥作用的方劑組分藥物;使藥是指對君、臣藥間起到橋梁作用且協(xié)調(diào)方劑各組分的藥物，它可減少劇毒藥物的毒性，緩和其烈性［12］。結果新－2號復方的組分阿魏、白檀香、紫硇砂、白云香、木香均有改善心“氣虛”型心肌缺血引起的S－T段位移的作用;新－2號組分兔心明顯心電圖T波、ST段改變、心率減慢，明顯升高已降低的血清NO，明顯降低已升高的血清LDH、CK含量。上述新－2號組分對心“氣虛”型心肌缺血有一定的治療作用，其中兔心的作用優(yōu)于上述其他組分，阿魏雖然入藥量小，但心電圖效果明顯，有待進一步研究。蒙醫(yī)藥學認為:兔心有鎮(zhèn)赫依，鎮(zhèn)靜，止痛等功效。為諸藥先導，用于治療氣喘，心刺痛，心悶、心神不安、失眠、心悸等癥。阿魏可抑赫依 (理氣)，祛巴達干 (化痰)，調(diào)胃火，消食開胃，殺蟲，止痛。主治赫依(氣滯)引起的呵欠頻作，寒栗，腰膝關節(jié)疼痛，游走性疼痛，干嘔，心悸，心慌意亂，頭暈耳鳴，失眠，心臟赫依病，肝臟赫依病，頭赫依病及頭蟲病等。 《無誤蒙藥鑒》載:“驅(qū)蟲，治寒性病，心臟赫依病”［13］。白澶香具有清搏熱、滋養(yǎng)、止痛的作用，主治心肺搏熱、熾熱、疫熱等癥。紫硇砂溫中，祛巴達干赫依，潤腸通便，解痙，止痛。主治赫依 (氣滯)，刺痛。白云香祛黃水消腫、止痛、治瘡傷等功效。木香有祛巴達干、調(diào)依血相搏、活血化瘀、調(diào)和體素、止痛、化痰等功效。本研究對新－2號的推廣應用及研發(fā)新藥提供了一些科學依據(jù)。

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