張 磊，張 玲

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院，安徽 合肥 230051）

抗病毒口服液和兒感退熱寧口服液中外源性抗氧劑的含量測(cè)定

張 磊1，2，張 玲1

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院，安徽 合肥 230051）

目的 考察高密度聚乙烯材料中抗氧劑向抗病毒口服液和兒感退熱寧口服液中遷移情況。方法 用 HPLC法測(cè)定兩種口服液中抗氧劑的含量。色譜柱：Shim-Pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：四氫呋喃—乙腈—水（60∶30∶10）；流速：1.5 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：273 nm；柱溫：35℃。結(jié)果 抗氧劑1010在0.60～361.92 mg·L-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r ＝0.999 7；抗病毒口服液準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果為97.03%，RSD為1.59%；兒感退熱寧口服液準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果為97.62%，RSD為1.09%。結(jié)論 在抗病毒口服液和兒感退熱寧口服液中存在聚乙烯材料中的抗氧劑，需要加強(qiáng)控制，該法簡(jiǎn)便、可靠，可供測(cè)定制劑中抗氧劑1010含量。

抗氧劑；HPLC；口服液

抗氧劑是藥用高分子材料中加入的工業(yè)助劑之一。它能有效地阻止聚乙烯自由基反應(yīng)，保護(hù)聚乙烯結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。抗氧劑有明確的生物毒性，推薦的安全性閾值（safety concern threshold，SCT）為每天0.15 μg［1］。抗氧劑分子量小，分散在聚乙烯結(jié)構(gòu)中，可能溶入藥液，產(chǎn)生非預(yù)期的不良反應(yīng)，甚至與藥物反應(yīng)，降低療效。歐洲藥典明確規(guī)定，材料中抗氧劑含量不得過(guò) 0.3%［2-3］。

抗病毒口服液、兒感退熱寧口服液是臨床常用口服制劑，常用高密度聚乙烯口服液體瓶包裝。藥用聚乙烯材料中往往加入兩種或兩種以上抗氧劑，其中長(zhǎng)效抗氧劑1010是最常用的抗氧劑。目前，國(guó)內(nèi)藥用聚乙烯料中均含有這種抗氧劑。制劑中的表面活性劑可能增加抗氧劑的溶出。因此我們對(duì)兩種制劑中抗氧劑1010進(jìn)行測(cè)定，方法準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便。

1 試驗(yàn)儀器、試劑及樣品

1.1 儀器 液相色譜儀（安捷倫 1260）、電子分析天平（梅特勒 XS105）、固相萃取柱（PEP-SPE 60 mg／3 mL，Agela Cleanert）。

1.2 試劑及樣品 抗氧劑 1010（CAS NO：6683-19-8，純度：99.8%，廠家：色譜科，批號(hào)：441783）；抗病毒口服液（安徽某制藥公司，批號(hào)：130205）；兒感退熱寧口服液（安徽某制藥公司，批號(hào)：130112）；高密度聚乙烯口服液體瓶（安徽省繁昌友誼醫(yī)藥包裝材料有限公司，批號(hào)：130110、130116、130123）；試驗(yàn)中所用試劑均為分析純或色譜純。

2 方法

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 取抗氧劑 1010適量，加甲醇制成對(duì)照溶液，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍掃描紫外吸收，結(jié)果顯示：217 nm和273 nm位置均有吸收，因273 nm處干擾小，因此選擇273 nm作為試驗(yàn)波長(zhǎng)。

2.2 色譜條件選擇 參照有關(guān)文獻(xiàn)［4-6］選擇流動(dòng)相。色譜柱：Shim-Pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：四氫呋喃—乙腈—水（60∶30∶10）；流速：1.5 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：273 nm；柱溫：35℃。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取抗氧劑1010對(duì)照品約0.3 g，精密稱(chēng)定，用四氫呋喃和乙腈混合液（體積比1∶1）稀釋?zhuān)ㄈ葜?50 mL，吸取 5.0 mL至 25 mL容量瓶中，用上述混合液稀釋?zhuān)ㄈ?，作為?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1 206.4 mg·L-1）。

2.3.2 供試品溶液的制備 將高密度聚乙烯口服液體瓶剪碎（30 mm×0.5 mm小條），稱(chēng)取30.0 g，放在燒杯中，水洗，室溫干燥后，移至錐形瓶中，分別加入抗病毒口服液和兒感退熱寧口服液150 mL，置高壓蒸汽滅菌器中，加熱至121℃，保持30 min，冷卻至室溫，移出，即得樣品液。用甲醇、水各4 mL活化固相柱，取100 mL樣品液，以 3～5 mL·min-1的流速通過(guò)固相萃取柱，分別用5 mL甲醇，3 mL四氫呋喃依次洗脫，收集洗脫液，用上述混合液定容至10 mL，待用。

2.3.3 陰性樣品溶液的制備 按2.3.2方法，不加聚乙烯瓶制備陰性樣品液。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，測(cè)得tR＝13.04，理論板數(shù)為18 736，符合藥典規(guī)定。取供試品溶液適量，注入液相色譜儀，測(cè)得分離度為5.19，測(cè)得拖尾因子為1.01，均符合藥典規(guī)定。取抗氧劑對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，峰面積分別為91 246、95 200、95 076、96 879、96 296、96 936，RSD＝2.23%，結(jié)果表明系統(tǒng)適用性重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果良好。

2.5 測(cè)定法 按上述色譜條件，分別精密移取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各20 μL，注入液相色譜儀中，在此條件下：抗氧劑與其他成分基線分離，保留時(shí)間與對(duì)照品溶液一致。陰性樣品溶液在抗氧劑位置未見(jiàn)峰出現(xiàn)。陰性樣品無(wú)干擾。見(jiàn)圖1～3。

2.6 精密度試驗(yàn) 重復(fù)性試驗(yàn)：取抗病毒口服液、兒感退熱寧口服液和高密度聚乙烯口服液體瓶（批號(hào)：130110），按2.3.2制備供試品溶液，測(cè)定其中抗氧劑含量。第一人進(jìn)行六次測(cè)定，以抗病毒口服液為介質(zhì)制備的供試液中抗氧劑分別為 0.169 5、0.174 3、0.173 7、0.179 5、0.171 3、0.176 1 mg· L-1，平均含量0.174 1 mg·L-1，RSD＝2.03%。以?xún)焊型藷釋幙诜簽榻橘|(zhì)制備的供試液中抗氧劑分別為0.195 2、0.193 3、0.192 1、0.190 5、0.194 3、 0.196 7 mg·L-1，平均含量0.193 7 mg·L-1，RSD ＝1.14%。

圖1 供試品 HPLC色譜圖

圖2 抗氧劑對(duì)照品 HPLC色譜圖

圖3 陰性樣品溶液 HPLC色譜圖

中間精密度試驗(yàn)：由兩人在不同時(shí)間進(jìn)行抗氧劑含量測(cè)定，第一人數(shù)據(jù)見(jiàn)重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果。第二人數(shù)據(jù)分別為：以抗病毒口服液為介質(zhì)的供試液中抗氧劑分別為0.170 1、0.173 6、0.172 9、0.168 5、0.171 4、0.176 6 mg·L-1，平均含量 0.172 0 mg· L-1，RSD＝1.65%；以?xún)焊型藷釋幙诜簽榻橘|(zhì)的供試液中抗氧劑分別為0.190 8、0.193 1、0.196 1、0.191 7、0.193 5、0.190 9 mg·L-1，平均含量0.192 7 mg·L-1，RSD＝1.06%。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法精密度良好。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.7.1 對(duì)照品溶液穩(wěn)定性 取對(duì)照品溶液分別于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，峰面積分別為 91 246、95 076、96 879、96 531、97 644、98 529，RSD＝2.70%，結(jié)果表明，對(duì)照品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

取對(duì)照品溶液分別放置0、1、2、3 d進(jìn)樣，峰面積分別為96 439、95 141、96 703、94 556，RSD＝1.07%，結(jié)果表明，對(duì)照品溶液的3 d內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7.2 供試品溶液穩(wěn)定性 取以抗病毒口服液為介質(zhì)的供試液分別于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，峰面積分別為 301.41、286.05、301.15、285.51、304.05、296.14，RSD＝2.74%，結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

取兒感退熱寧口服液為介質(zhì)制備的供試液分別于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，峰面積分別為396.56、387.32、381.13、386.59、387.62、381.31，RSD＝1.46%，結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及線性范圍的考察 取按“2.3.1”制備的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用四氫呋喃和乙腈等體積混合液逐級(jí)稀釋?zhuān)脻舛葹?0.60、1.21、6.03、24.13、48.26、72.38、120.64、241.28、361.92 mg· L-1標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液。取上述對(duì)照品溶液，注入色譜儀，記錄峰面積，以峰面積（X）對(duì)濃度（Y）進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y＝1924.8X+2693.7（r＝0.999 7）。結(jié)果表明：抗氧劑1010在0.60～361.92 mg· L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.9 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取抗病毒口服液、兒感退熱寧口服液和高密度聚乙烯口服液體瓶（批號(hào)：130110），按2.3.2步驟操作至“取100 mL樣品液”，分別在樣品液中加入抗氧劑對(duì)照儲(chǔ)備液40、80、240 μL，然后接2.3.2步驟進(jìn)行萃取操作，制備準(zhǔn)確度試驗(yàn)液。分別取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表1，2。

表1 抗病毒口服液準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

2.10 檢測(cè)限 取抗氧劑1010對(duì)照品適量，用四氫呋喃和乙腈等體積混合液逐級(jí)稀釋?zhuān)ㄈ?。?duì)照液濃度0.12 mg·L-1，平均信噪比為 3.91，遷移量檢測(cè)限為0.01 mg·L-1（n＝3）。

2.11 含量測(cè)定 按上述方法，測(cè)定了三批高密度聚乙烯口服液體瓶中抗氧劑 1010向兩種口服液中的遷移量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 抗氧劑遷移量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

文中采用破壞性加速試驗(yàn)的方式制備供試品溶液，所測(cè)結(jié)果僅用于評(píng)價(jià)和判斷聚乙烯中抗氧劑向制劑遷移的風(fēng)險(xiǎn)大小。另外筆者對(duì)常溫下存放了6個(gè)月和12個(gè)月的高密度聚乙烯口服液體瓶包裝的抗病毒口服液和兒感退熱寧口服液中抗氧劑進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果均低于檢出限。

在上述抗氧化劑測(cè)定過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，檢測(cè)圖譜中還有一些未知峰。其種類(lèi)和來(lái)源未知，有進(jìn)一步研究的必要。

文獻(xiàn)記載了多種檢測(cè)抗氧劑方法，經(jīng)過(guò)篩選，文中確定以水／四氫呋喃／乙腈為流動(dòng)相可以避免抗氧劑330和1076氧化產(chǎn)物的干擾。

［1］ 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.化學(xué)藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）［S］，國(guó)食藥監(jiān)注［2012］267號(hào)：附件4.

［2］ 歐洲藥品質(zhì)量委員會(huì).歐洲藥典 EP［S］，8.0版，2014：338-341.

［3］ 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.藥品包裝材料與藥物相容性試驗(yàn)指導(dǎo)原則［S］，YBB00142002，2006-10-23.

［4］ 謝蘭桂，湯 龍，孫會(huì)敏，等.再生塑料及其檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展［J］.藥物分析雜志，2010，30（10）：1985-1989.

［5］ 張 磊，黃葆華.5%葡萄糖注射液中外源性抗氧劑的測(cè)定［J］.安徽醫(yī)藥，2010，14（12）：1400-1402.

［6］ 陳 瑜，王丹丹，金 立.高效液相色譜法測(cè)定塑料輸液容器中四種常用抗氧劑的含量［J］.中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2013，14（4）：279-281.

Determination of the content of exogenous antioxidant in the Antivira oral-liquid and Ergan Tuirening oral-liquid preparations

ZHANG Lei1，2，ZHANG Ling1
（1.Department of Pharmaceutical，Anhui University of Chinese Medicine，Anhui 230031，China；2.Anhui Institutes for Food and Drug Control，Anhui 230051，China）

Objective Determining the antioxidant1010 of the antivira oral-liquid and Ergan Tuirening oral-liquid preparations packing with polyethylene.Methods To use HPLC method for determining the antioxidant1010 in two oral-liquid preparations.Chromatographic column：Shim-Pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；mobile phase：acetonitrile-THF-water（60∶30∶10）；examination wave length：273 nm；column temperature：35℃；velocity：1.5 mL·min-1.Results Antioxidant1010 between in 0.60～361.92 mg·L-1range is good linear relationship，r＝0.999 7；the average recovery is 97.03%，RSD is 1.59%in the antivira oral-liquid and the average recovery is 97.62%，RSD is 1.09%in the ergan tuirening oral-liquid.Conclusions In two oral-liquid preparations exist antioxidant of packing material，we need to strengthen the control of the antioxidant.The method is simple，effective，and suitable for determinating Antioxidant 1010.

antioxidant；HPLC；oral liquid preparation

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.05.011

2014-02-20）