張 磊，張 玲

（1.安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品藥品檢驗研究院，安徽 合肥 230051）

抗病毒口服液和兒感退熱寧口服液中外源性抗氧劑的含量測定

張 磊1，2，張 玲1

（1.安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品藥品檢驗研究院，安徽 合肥 230051）

目的 考察高密度聚乙烯材料中抗氧劑向抗病毒口服液和兒感退熱寧口服液中遷移情況。方法 用 HPLC法測定兩種口服液中抗氧劑的含量。色譜柱：Shim-Pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：四氫呋喃—乙腈—水（60∶30∶10）；流速：1.5 mL·min-1；檢測波長：273 nm；柱溫：35℃。結果 抗氧劑1010在0.60～361.92 mg·L-1范圍內呈良好的線性關系，r ＝0.999 7；抗病毒口服液準確度試驗結果為97.03%，RSD為1.59%；兒感退熱寧口服液準確度試驗結果為97.62%，RSD為1.09%。結論 在抗病毒口服液和兒感退熱寧口服液中存在聚乙烯材料中的抗氧劑，需要加強控制，該法簡便、可靠，可供測定制劑中抗氧劑1010含量。

抗氧劑；HPLC；口服液

抗氧劑是藥用高分子材料中加入的工業(yè)助劑之一。它能有效地阻止聚乙烯自由基反應，保護聚乙烯結構穩(wěn)定?？寡鮿┯忻鞔_的生物毒性，推薦的安全性閾值（safety concern threshold，SCT）為每天0.15 μg［1］?？寡鮿┓肿恿啃?，分散在聚乙烯結構中，可能溶入藥液，產生非預期的不良反應，甚至與藥物反應，降低療效。歐洲藥典明確規(guī)定，材料中抗氧劑含量不得過 0.3%［2-3］。

抗病毒口服液、兒感退熱寧口服液是臨床常用口服制劑，常用高密度聚乙烯口服液體瓶包裝。藥用聚乙烯材料中往往加入兩種或兩種以上抗氧劑，其中長效抗氧劑1010是最常用的抗氧劑。目前，國內藥用聚乙烯料中均含有這種抗氧劑。制劑中的表面活性劑可能增加抗氧劑的溶出。因此我們對兩種制劑中抗氧劑1010進行測定，方法準確、靈敏、簡便。

1 試驗儀器、試劑及樣品

1.1 儀器 液相色譜儀（安捷倫 1260）、電子分析天平（梅特勒 XS105）、固相萃取柱（PEP-SPE 60 mg／3 mL，Agela Cleanert）。

1.2 試劑及樣品 抗氧劑 1010（CAS NO：6683-19-8，純度：99.8%，廠家：色譜科，批號：441783）；抗病毒口服液（安徽某制藥公司，批號：130205）；兒感退熱寧口服液（安徽某制藥公司，批號：130112）；高密度聚乙烯口服液體瓶（安徽省繁昌友誼醫(yī)藥包裝材料有限公司，批號：130110、130116、130123）；試驗中所用試劑均為分析純或色譜純。

2 方法

2.1 檢測波長選擇 取抗氧劑 1010適量，加甲醇制成對照溶液，在200～400 nm波長范圍掃描紫外吸收，結果顯示：217 nm和273 nm位置均有吸收，因273 nm處干擾小，因此選擇273 nm作為試驗波長。

2.2 色譜條件選擇 參照有關文獻［4-6］選擇流動相。色譜柱：Shim-Pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：四氫呋喃—乙腈—水（60∶30∶10）；流速：1.5 mL·min-1；檢測波長：273 nm；柱溫：35℃。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 取抗氧劑1010對照品約0.3 g，精密稱定，用四氫呋喃和乙腈混合液（體積比1∶1）稀釋，定容至 50 mL，吸取 5.0 mL至 25 mL容量瓶中，用上述混合液稀釋，定容，作為標準儲備液（1 206.4 mg·L-1）。

2.3.2 供試品溶液的制備 將高密度聚乙烯口服液體瓶剪碎（30 mm×0.5 mm小條），稱取30.0 g，放在燒杯中，水洗，室溫干燥后，移至錐形瓶中，分別加入抗病毒口服液和兒感退熱寧口服液150 mL，置高壓蒸汽滅菌器中，加熱至121℃，保持30 min，冷卻至室溫，移出，即得樣品液。用甲醇、水各4 mL活化固相柱，取100 mL樣品液，以 3～5 mL·min-1的流速通過固相萃取柱，分別用5 mL甲醇，3 mL四氫呋喃依次洗脫，收集洗脫液，用上述混合液定容至10 mL，待用。

2.3.3 陰性樣品溶液的制備 按2.3.2方法，不加聚乙烯瓶制備陰性樣品液。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗 取對照品溶液，注入液相色譜儀，測得tR＝13.04，理論板數(shù)為18 736，符合藥典規(guī)定。取供試品溶液適量，注入液相色譜儀，測得分離度為5.19，測得拖尾因子為1.01，均符合藥典規(guī)定。取抗氧劑對照品溶液連續(xù)進樣6次，峰面積分別為91 246、95 200、95 076、96 879、96 296、96 936，RSD＝2.23%，結果表明系統(tǒng)適用性重復性試驗結果良好。

2.5 測定法 按上述色譜條件，分別精密移取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各20 μL，注入液相色譜儀中，在此條件下：抗氧劑與其他成分基線分離，保留時間與對照品溶液一致。陰性樣品溶液在抗氧劑位置未見峰出現(xiàn)。陰性樣品無干擾。見圖1～3。

2.6 精密度試驗 重復性試驗：取抗病毒口服液、兒感退熱寧口服液和高密度聚乙烯口服液體瓶（批號：130110），按2.3.2制備供試品溶液，測定其中抗氧劑含量。第一人進行六次測定，以抗病毒口服液為介質制備的供試液中抗氧劑分別為 0.169 5、0.174 3、0.173 7、0.179 5、0.171 3、0.176 1 mg· L-1，平均含量0.174 1 mg·L-1，RSD＝2.03%。以兒感退熱寧口服液為介質制備的供試液中抗氧劑分別為0.195 2、0.193 3、0.192 1、0.190 5、0.194 3、 0.196 7 mg·L-1，平均含量0.193 7 mg·L-1，RSD ＝1.14%。

圖1 供試品 HPLC色譜圖

圖2 抗氧劑對照品 HPLC色譜圖

圖3 陰性樣品溶液 HPLC色譜圖

中間精密度試驗：由兩人在不同時間進行抗氧劑含量測定，第一人數(shù)據(jù)見重復性試驗結果。第二人數(shù)據(jù)分別為：以抗病毒口服液為介質的供試液中抗氧劑分別為0.170 1、0.173 6、0.172 9、0.168 5、0.171 4、0.176 6 mg·L-1，平均含量 0.172 0 mg· L-1，RSD＝1.65%；以兒感退熱寧口服液為介質的供試液中抗氧劑分別為0.190 8、0.193 1、0.196 1、0.191 7、0.193 5、0.190 9 mg·L-1，平均含量0.192 7 mg·L-1，RSD＝1.06%。試驗結果表明，該方法精密度良好。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗

2.7.1 對照品溶液穩(wěn)定性 取對照品溶液分別于0、2、4、6、8、12 h進樣，峰面積分別為 91 246、95 076、96 879、96 531、97 644、98 529，RSD＝2.70%，結果表明，對照品溶液在12 h內穩(wěn)定。

取對照品溶液分別放置0、1、2、3 d進樣，峰面積分別為96 439、95 141、96 703、94 556，RSD＝1.07%，結果表明，對照品溶液的3 d內穩(wěn)定性良好。

2.7.2 供試品溶液穩(wěn)定性 取以抗病毒口服液為介質的供試液分別于0、2、4、6、8、12 h進樣，峰面積分別為 301.41、286.05、301.15、285.51、304.05、296.14，RSD＝2.74%，結果表明，供試品溶液在12 h內穩(wěn)定。

取兒感退熱寧口服液為介質制備的供試液分別于0、2、4、6、8、12 h進樣，峰面積分別為396.56、387.32、381.13、386.59、387.62、381.31，RSD＝1.46%，結果表明，供試品溶液在12 h內穩(wěn)定。

2.8 標準曲線繪制及線性范圍的考察 取按“2.3.1”制備的標準儲備液用四氫呋喃和乙腈等體積混合液逐級稀釋，得濃度為 0.60、1.21、6.03、24.13、48.26、72.38、120.64、241.28、361.92 mg· L-1標準對照液。取上述對照品溶液，注入色譜儀，記錄峰面積，以峰面積（X）對濃度（Y）進行線性回歸，回歸方程為：Y＝1924.8X+2693.7（r＝0.999 7）。結果表明：抗氧劑1010在0.60～361.92 mg· L-1范圍內線性關系良好。

2.9 準確度試驗 取抗病毒口服液、兒感退熱寧口服液和高密度聚乙烯口服液體瓶（批號：130110），按2.3.2步驟操作至“取100 mL樣品液”，分別在樣品液中加入抗氧劑對照儲備液40、80、240 μL，然后接2.3.2步驟進行萃取操作，制備準確度試驗液。分別取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積計算，結果見表1，2。

表1 抗病毒口服液準確度試驗結果

2.10 檢測限 取抗氧劑1010對照品適量，用四氫呋喃和乙腈等體積混合液逐級稀釋，定容。對照液濃度0.12 mg·L-1，平均信噪比為 3.91，遷移量檢測限為0.01 mg·L-1（n＝3）。

2.11 含量測定 按上述方法，測定了三批高密度聚乙烯口服液體瓶中抗氧劑 1010向兩種口服液中的遷移量，結果見表3。

表3 抗氧劑遷移量測定結果

3 結論

文中采用破壞性加速試驗的方式制備供試品溶液，所測結果僅用于評價和判斷聚乙烯中抗氧劑向制劑遷移的風險大小。另外筆者對常溫下存放了6個月和12個月的高密度聚乙烯口服液體瓶包裝的抗病毒口服液和兒感退熱寧口服液中抗氧劑進行測定，結果均低于檢出限。

在上述抗氧化劑測定過程中發(fā)現(xiàn)，檢測圖譜中還有一些未知峰。其種類和來源未知，有進一步研究的必要。

文獻記載了多種檢測抗氧劑方法，經過篩選，文中確定以水／四氫呋喃／乙腈為流動相可以避免抗氧劑330和1076氧化產物的干擾。

［1］ 國家食品藥品監(jiān)督管理局.化學藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術指導原則（試行）［S］，國食藥監(jiān)注［2012］267號：附件4.

［2］ 歐洲藥品質量委員會.歐洲藥典 EP［S］，8.0版，2014：338-341.

［3］ 國家食品藥品監(jiān)督管理局.藥品包裝材料與藥物相容性試驗指導原則［S］，YBB00142002，2006-10-23.

［4］ 謝蘭桂，湯 龍，孫會敏，等.再生塑料及其檢測技術研究進展［J］.藥物分析雜志，2010，30（10）：1985-1989.

［5］ 張 磊，黃葆華.5%葡萄糖注射液中外源性抗氧劑的測定［J］.安徽醫(yī)藥，2010，14（12）：1400-1402.

［6］ 陳 瑜，王丹丹，金 立.高效液相色譜法測定塑料輸液容器中四種常用抗氧劑的含量［J］.中國藥品標準，2013，14（4）：279-281.

Determination of the content of exogenous antioxidant in the Antivira oral-liquid and Ergan Tuirening oral-liquid preparations

ZHANG Lei1，2，ZHANG Ling1
（1.Department of Pharmaceutical，Anhui University of Chinese Medicine，Anhui 230031，China；2.Anhui Institutes for Food and Drug Control，Anhui 230051，China）

Objective Determining the antioxidant1010 of the antivira oral-liquid and Ergan Tuirening oral-liquid preparations packing with polyethylene.Methods To use HPLC method for determining the antioxidant1010 in two oral-liquid preparations.Chromatographic column：Shim-Pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；mobile phase：acetonitrile-THF-water（60∶30∶10）；examination wave length：273 nm；column temperature：35℃；velocity：1.5 mL·min-1.Results Antioxidant1010 between in 0.60～361.92 mg·L-1range is good linear relationship，r＝0.999 7；the average recovery is 97.03%，RSD is 1.59%in the antivira oral-liquid and the average recovery is 97.62%，RSD is 1.09%in the ergan tuirening oral-liquid.Conclusions In two oral-liquid preparations exist antioxidant of packing material，we need to strengthen the control of the antioxidant.The method is simple，effective，and suitable for determinating Antioxidant 1010.

antioxidant；HPLC；oral liquid preparation

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.05.011

2014-02-20）