應寶洪+張慶鴻

[摘要] 目的 利用高效液相色譜法對甘草鋅口腔復合膜劑中的氨來呫諾與甘草酸的含量進行測定，以提高口腔質控的水平。方法 利用標準曲線的制備方法稱取適量的氨來呫諾和甘草酸單銨鹽的標準品進行處理，對其峰面積進行測定，最后利用回歸方程計算其各自的濃度。結果 經測定與計算，氨來呫諾的精密度RSD約為0.51%；甘草鋅的精密度RSD約為0.58%，金屬鋅的含量約為0.66%，甘草酸的平均回收率約為98.82%。 結論 氨來呫諾可以有效地減輕患者的疼痛感，而甘草鋅則具有鋅與甘草酸的藥理作用，在臨床中具有推廣價值。

[關鍵詞] 高效液相色譜法；甘草鋅；口腔復合膜；氨來呫諾；甘草酸；口腔潰瘍

[中圖分類號] R927 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）17-0131-03

Analysis on application effect of HPLC in licozinc oral composite membrane measurement

YING Baohong1 ZHANG Qinghong2

1.Department of Stomatology，Quzhou City People's Hospital in Zhejiang Province， Quzhou 324004，China；2.Department of Stomatology，Dental Hospital Affiliated to Medical College of Zhejiang University， Hangzhou 310000，China

[Abstract] Objective To measure the content of amlexanox and glycyrrhizic acid in licozinc oral composite film by high performance liquid chromatography， aim to improve the level of oral quality control. Methods The right amount of amlexanox and monoammonium glycyrrhizinate was taken by the preparation of standard curve method， then the peak area was determined， finally， the concentration was calculated by the regression equation. Results After the determination and calculation， amLexanox of precision of RSD was about 0.51%； licozinc of precision of RSD was about 0.58%， the zinc metal was about 0.66%， the average recovery rate of glycyrrhizic acid was about 98.82%. Conclusion Ammonia can effectively relieve the pain of patients， while licorice zinc has zinc and glycyrrhizic acid pharmacological effects， has the value of popularization in clinical practice.

[Key words] HPLC； Licozinc； Oral composite membrane； Amlexanox； Glycyrrhizic acid； Oral ulcer

在日常生活中，口腔潰瘍困擾著許多人，病發(fā)時會使人產生強烈的灼痛感，而且經常反復發(fā)作，所以給口腔潰瘍患者造成了很大的痛苦[1]。如何提高口腔質控水平，已成為當前口腔潰瘍治療領域的一項重要課題。2013年11月，衢州市人民醫(yī)院利用高效液相色譜法對甘草鋅口腔復合膜中的氨來呫諾與甘草酸含量進行了測定，目的是探究高效液相色譜法在口腔用藥方面的檢測效果，這對于提升口腔質控水平有一定的實踐意義，具體測定情況報道如下。

1材料與方法

1.1藥品與儀器

本次實驗的時間為2013年11月，所選藥品為山東中科泰斗化學有限公司生產的批號為060624的氨來呫諾、中國生物制品鑒定所生產的批號為110731-200511的甘草酸單銨鹽、山西臨汾珠寶制藥有限公司生產的批號為061203的甘草鋅；天津凱通化學試劑三廠生產的乙酸銨（分析純）；天津市化學一廠生產的批號為90085的乙酸二鈉（分析純）、天津北方天意化學試劑廠生產的甲醇（分析純）、天津康科德科技有限公司生產的甲醇（色譜純）、天津化學試劑一廠生產的濃度為36%的乙酸與天津精細化工開發(fā)中心生產的正丁醇、氯化鋅、氯化鈉和濃度為10%的HCI及自制重蒸水和亞鐵氰化鉀試液。

本次試驗的儀器主要有孔徑為0.8μm、Ф為25的微孔濾膜；型號為BP210S的電子分析天平；由昆山超聲儀器有限公司生產的KQ-10B型號的超聲波清洗儀器；美國熱電公司生產的型號為SP8810的高效液相色譜儀和型號為spectra100的檢測器；天津中環(huán)實驗鍋爐公司生產的高溫爐；Anastar色譜的工作站；坩堝鉗；坩堝和酸式滴定管。

1.2測定方法

1.2.1制備標準曲線 稱取實驗所需的氨來呫諾樣品量，保證其精密性，然后將其放入容量為50 mL的容量瓶中，并用流動相溶液將其稀釋、溶解直至刻度，之后將其搖勻再制取實驗所需的母液，保證其濃度為50 μg/mL，然后再分別吸取1.2、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2 mL母液，放入10 mL的容量瓶里，再對其進行稀釋直至要求刻度，最后搖勻得到梯度濃度分別為6.0、5.0、4.0、3.0、2.0、1.0 μg/mL的液體。最后測定所得的不同濃度的液體的峰面積，并利用回歸方程式來計算推測濃度與峰面積的關系。在計算時，相關系數(shù)r為0.9999，用X表示氨來呫諾的濃度，用Y表示峰面積，那么Y=69288X+6527.7。endprint

稱取實驗所需甘草酸單銨鹽樣品量，保證其精密性，然后將其放入容量為50 mL的容量瓶中，并用流動相溶液將其稀釋、溶解直至刻度位置，之后搖勻制取實驗所需母液，保證濃度為180 μg/mL[2]。然后再分別吸取2.0、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0 mL母液，放入10 mL容量瓶里，再對其進行稀釋直至要求刻度，最后搖勻得到梯度濃度分別為10.0、9.0、8.0、7.0、6.0、5.0 μg/mL的液體。最后測定所得的不同濃度的液體的峰面積，并利用回歸方程式來計算推測濃度與峰面積的關系。在計算時，相關系數(shù)r為0.9999，用X表示甘草酸單銨鹽的濃度，用Y表示峰面積，那么Y=6329.8X+3426。

1.2.2色譜的具體情況 色譜的具體情況為：流動相為-0.2 mol/L的醋酸銨溶液和比例為67∶33∶1的冰醋酸甲醇；色譜柱為5μm，Ф為4.6mm×200mm的Kromasil-C18色譜柱；流速為0.8 mL/min；檢測波長為250 nm；柱溫為正常室溫；進樣量則為20μL。

1.2.3制備試驗所需的樣品溶液 取10片4cm×2cm的藥膜，并將其剪碎，然后利用精密的方法對其稱取1片藥劑的量，放到容量為250 mL的量瓶里，再用事先準備好的流動相溶液將其稀釋、過濾。最后稀釋到之前的5倍直至指定的刻度。陰性樣品溶液的制取方法與之相同。

1.2.4測定樣品的RSD值 準備4cm×2cm的藥膜，氨來呫諾與甘草鋅的復合膜3批，并將其剪碎放到容量為250mL的量瓶中，用流動相進行稀釋直到指定刻度的位置，并將其搖勻，然后繼續(xù)稀釋至5倍獲得測試溶液[3]。對制得的溶液進行取樣，每樣3份，并分別進樣20μL，計算三次測試的平均值，最后再計算3批的RSD結果。

1.2.5測定回收率 將適量的甘草酸單銨鹽放入準備好的陰性樣品溶液中，制成與樣品溶液濃度相當?shù)姆謩e為120%、100%、80%的甘草酸單銨鹽溶液，并將其稀釋至5倍，再放入20μL的樣品進行測定。最后統(tǒng)計其回收率，計算平均值與RSD數(shù)值[4]。同樣按照該法制備120%、100%和80%濃度的氨來呫諾溶液，再進行相同的稀釋與測定，求其RSD值與回收率。

1.2.6測定重現(xiàn)性 取6份甘草鋅膜劑的樣品來制備試驗所需的溶液，并和之前一樣進樣20μL，然后計算其甘草酸的面積積分數(shù)值，之后要對其RSD的數(shù)值進行計算[5]。按照同樣的方法測定氨來呫諾的相應數(shù)據(jù)，測定其重現(xiàn)性。

1.2.7測定穩(wěn)定性 把制備好的甘草酸單銨鹽溶液分別靜置8h、6h、4h、2h、1h、0h，然后再進樣20μL，根據(jù)溶液的具體情況來測定其RSD的值與峰面積，并且用相同的辦法對氨來呫諾的制取溶液進行測定，最終測算出其穩(wěn)定性的大小[6]。

1.2.8測定精密度 吸取濃度為7μg/mL的標準的曲線溶液甘草鋅，并分別將其進樣20μL，并且重復該動作6次，對其峰面積與RSD進行測定與計算[7]。然后按照相同的方法對氨來呫諾的相關數(shù)值進行計算，測定其精密度。

1.2.9測定甘草鋅中鋅的含量 取3片4cm×2cm的甘草鋅藥膜，并分別對其進行精密稱量，記錄其質量大小，然后放在準備好的坩堝鉗里，并放在高溫爐里加熱1h，在加熱期間要保持其溫度維持在700℃。當藥膜完全灰化以后再冷卻移至燒杯，加入2mL的濃度為10%的HCl溶解產生的殘渣，再加入適量的鉻黑劑、10mL氯化銨和25mL水，再利用EDTA對其進行滴定，當溶液的顏色從紫紅色轉變?yōu)榧兯{色時即為制取成功[8]。

2結果

經過測定與計算，氨來呫諾的重現(xiàn)性RSD約為0.22%，穩(wěn)定性RSD約為1.12%，精密度RSD約為0.51%，平均回收率約為99.62%；甘草鋅的重現(xiàn)性RSD約為0.82%，穩(wěn)定性RSD約為1.01%，精密度RSD約為0.58%。甘草酸的平均回收率約為98.82%。金屬鋅的含量約為0.66%。氨來呫諾與甘草酸的樣品含量測定結果具體見表1。

表1 氨來呫諾與甘草酸樣品含量的測定結果

3討論

隨著人們生活節(jié)奏的加快和飲食習慣的改變，口腔潰瘍的發(fā)病率出現(xiàn)逐年升高的趨勢，現(xiàn)在已經高達20%[9，10]。目前，比較通用的治療口腔潰瘍的藥物有普通膜劑、含漱液、含片、涂劑和散劑等普通制劑。但是，對于人體口腔這個比較特殊的生理環(huán)境來說，絕大多數(shù)的制劑都無法長時間停留，無法滿足人體口腔的特點需求就無法在口腔的病變部位保持適量的藥物，所以治療效果總是差強人意。但是，隨著藥物水平的不斷發(fā)展，復合膜劑的出現(xiàn)在一定程度上彌補了這些傳統(tǒng)藥物的缺陷，它在含藥的膜上再覆蓋了一層膜，這樣就可以和含藥膜組合成雙層的復合膜，作為親水層的含藥層，向內貼在患處，這樣可以保證膜劑更好地完成單向釋藥的過程，保證口腔潰瘍的病變部位接受到足夠的藥量[11]。

氨來呫諾（Amlexanox）是食品和藥物管理局批準的用于治療口腔潰瘍的一種藥物。根據(jù)臨床試驗統(tǒng)計可知，約5%的氨來呫諾在治療輕微性復發(fā)性口腔類潰瘍時非常安全，具有可行性，可以有效地減輕患者的疼痛感，并且可以提高患者口腔潰瘍部位創(chuàng)面的愈合程度。而甘草鋅則是將豆科類植物甘草（Glycyrrhi-zauralensis Fisch）的干燥根進行分離得到的[10-12]。它是鋅與甘草酸的結合物，因此，具有鋅與甘草酸這兩種藥物的藥理作用。首先，鋅可以提高口腔創(chuàng)傷組織自身的再生能力，提高黏膜的再生能力；其次，甘草酸可以抗炎、抗?jié)?、解毒、抗病毒和腎上腺皮質激素等，從而加速患者口腔潰瘍部位的愈合[13，14]。為了使這兩種藥物的質量得到恰當?shù)目刂?，本實驗將氨來呫諾、甘草酸與金屬鋅作為指標，利用高效液相色譜法對氨來呫諾與甘草酸進行測定，并且利用配位滴定法對金屬鋅的含量進行測定。

經過試驗，本文對氨來呫諾與甘草酸樣品中的含量做了具體的測定，為高效液相色譜法在甘草鋅口腔復合膜的質控中提供了相應的依據(jù)。由此可知，甘草酸口腔復合膜對于口腔潰瘍等特殊的口腔病變部位的治療具有很好的療效，可以補給患者口腔病變部位足夠的治療藥物，幫助患者早日康復，比傳統(tǒng)的普通膜劑、含漱液、含片、涂劑和散劑等普通制劑效果更好，而且，從本次試驗兩種藥劑的制備、精密度、平均回收率、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性以及鋅含量等的測定結果可知，該口腔復合膜具有穩(wěn)定性好、利用率高、密度精確等優(yōu)點[15-17]。因此，這種復合膜藥劑更易于被廣大患者接受，具有很廣闊的市場發(fā)展空間。需要注意的是，在進行制備與測定的過程中必須注意其準確性，只有這樣才能保證測定結果的科學性。endprint

綜上，高效液相色譜法在測定復方甘草鋅口腔復合膜中的氨來呫諾與甘草酸含量的方法與配位滴定方法測定甘草鋅中鋅含量的方法具有很多優(yōu)點，操作方便，而且測定結果也十分準確。因此，本文的試驗方法在臨床中具有很大的推廣價值。

[參考文獻]

[1] 陳虹. 氨來呫諾和表皮生長因子口腔復合膜的質控方法研究[J]. 河北醫(yī)藥，2011，16（33）：2521-2522.

[2] 王同順，房志仲. 復方甘草鋅與氨來呫諾口腔復合膜的處方篩選[J]. 現(xiàn)代藥物與臨床，2010，25（3）：207-209.

[3] 宋九華，李瓊，萬東海. HPLC測定九味羌活丸中甘草酸的含量[J]. 樂山師范學院學報，2010，25（5）：43-44.

[4] 楊鳳昆，蔡莉娟，房志仲，等. 反相高效液相色譜法測定復方甘草鋅口腔復合膜中甘草酸的含量[J]. 天津醫(yī)藥，2009，37（3）：221-222.

[5] 王同順，房志仲，李錫晶，等. 復方甘草鋅口腔復合膜的質控方法研究[J]. 天津醫(yī)科大學學報，2010，16（1）：54-56.

[6] 汪秋蘭，王文清，馬永貴，等. 高效液相色譜法在中藥有效成分含量測定中的應用[J]. 醫(yī)藥導報，2011，11（3）：1474-1476.

[7] 郝旭華，劉斌鈺. 甘草鋅與維生素B2聯(lián)合治療中年復發(fā)性口腔潰瘍療效觀察[J]. 實用醫(yī)技雜志，2011，18（9）：959-960.

[8] 張春雨，楊麗杰，郭美華，等. 高效液相色譜法測定復方口腔扁平苔癬涂膜劑中左氧氟沙星含量[J]. 中國藥業(yè)，2012，10（21）：43-44.

[9] 葉志清，饒春芳，胡友德，等. 用布喇格光纖光柵傳感器測定口腔復合樹脂材料光固化收縮與溫度演化特性[J]. 光子學報，2012，41（5）：528-530.

[10] 劉麗波，李玉紅，岳炳芬，等. 護理質控在護理管理中的重要性[J]. 中國保健營養(yǎng)，2013，1（2）：256-257.

[11] 孫磊，蔡莉娟. 正交實驗法篩選甘草鋅口腔潰瘍膜處方的實驗研究[J]. 天津醫(yī)藥， 2013，（8）：826-827.

[12] 李沙，李曉飛，黃郁瑩，等. 紫草膜劑的制備及左旋紫草素的含量測定[J]. 中國醫(yī)院藥學雜志， 2011，（12）：961-966.

[13] 鄧利軍. 表皮生長因子在復發(fā)性口腔潰瘍中的療效研究[J]. 中外醫(yī)療，2013，5（21）：67-68.

[14] 張復蘭，羅曉冰，杜池，等. 甘草鋅復合維生素B聯(lián)合治療ROU90例臨床觀察[J]. 臨床口腔醫(yī)學雜志， 2010， 2（25）：115-116.

[15] 姚冬梅. 甘草鋅膠囊治療復發(fā)性口腔潰瘍療效觀察[J]. 醫(yī)藥衛(wèi)生， 2013，（8）：147-148.

[16] 尹文國. 甘草鋅聯(lián)合康復新液治療復發(fā)性阿弗他潰瘍的效果觀察[J]. 中國醫(yī)藥導報， 2013，10（13）：73-75.

[17] 汪春梅. 維生素B2聯(lián)合甘草鋅治療復發(fā)性口腔潰瘍的臨床研究[J]. 中國醫(yī)藥指南，2012，（23）：488-489.

（收稿日期：2013-11-06）endprint

綜上，高效液相色譜法在測定復方甘草鋅口腔復合膜中的氨來呫諾與甘草酸含量的方法與配位滴定方法測定甘草鋅中鋅含量的方法具有很多優(yōu)點，操作方便，而且測定結果也十分準確。因此，本文的試驗方法在臨床中具有很大的推廣價值。

[參考文獻]

[1] 陳虹. 氨來呫諾和表皮生長因子口腔復合膜的質控方法研究[J]. 河北醫(yī)藥，2011，16（33）：2521-2522.

[2] 王同順，房志仲. 復方甘草鋅與氨來呫諾口腔復合膜的處方篩選[J]. 現(xiàn)代藥物與臨床，2010，25（3）：207-209.

[3] 宋九華，李瓊，萬東海. HPLC測定九味羌活丸中甘草酸的含量[J]. 樂山師范學院學報，2010，25（5）：43-44.

[4] 楊鳳昆，蔡莉娟，房志仲，等. 反相高效液相色譜法測定復方甘草鋅口腔復合膜中甘草酸的含量[J]. 天津醫(yī)藥，2009，37（3）：221-222.

[5] 王同順，房志仲，李錫晶，等. 復方甘草鋅口腔復合膜的質控方法研究[J]. 天津醫(yī)科大學學報，2010，16（1）：54-56.

[6] 汪秋蘭，王文清，馬永貴，等. 高效液相色譜法在中藥有效成分含量測定中的應用[J]. 醫(yī)藥導報，2011，11（3）：1474-1476.

[7] 郝旭華，劉斌鈺. 甘草鋅與維生素B2聯(lián)合治療中年復發(fā)性口腔潰瘍療效觀察[J]. 實用醫(yī)技雜志，2011，18（9）：959-960.

[8] 張春雨，楊麗杰，郭美華，等. 高效液相色譜法測定復方口腔扁平苔癬涂膜劑中左氧氟沙星含量[J]. 中國藥業(yè)，2012，10（21）：43-44.

[9] 葉志清，饒春芳，胡友德，等. 用布喇格光纖光柵傳感器測定口腔復合樹脂材料光固化收縮與溫度演化特性[J]. 光子學報，2012，41（5）：528-530.

[10] 劉麗波，李玉紅，岳炳芬，等. 護理質控在護理管理中的重要性[J]. 中國保健營養(yǎng)，2013，1（2）：256-257.

[11] 孫磊，蔡莉娟. 正交實驗法篩選甘草鋅口腔潰瘍膜處方的實驗研究[J]. 天津醫(yī)藥， 2013，（8）：826-827.

[12] 李沙，李曉飛，黃郁瑩，等. 紫草膜劑的制備及左旋紫草素的含量測定[J]. 中國醫(yī)院藥學雜志， 2011，（12）：961-966.

[13] 鄧利軍. 表皮生長因子在復發(fā)性口腔潰瘍中的療效研究[J]. 中外醫(yī)療，2013，5（21）：67-68.

[14] 張復蘭，羅曉冰，杜池，等. 甘草鋅復合維生素B聯(lián)合治療ROU90例臨床觀察[J]. 臨床口腔醫(yī)學雜志， 2010， 2（25）：115-116.

[15] 姚冬梅. 甘草鋅膠囊治療復發(fā)性口腔潰瘍療效觀察[J]. 醫(yī)藥衛(wèi)生， 2013，（8）：147-148.

[16] 尹文國. 甘草鋅聯(lián)合康復新液治療復發(fā)性阿弗他潰瘍的效果觀察[J]. 中國醫(yī)藥導報， 2013，10（13）：73-75.

[17] 汪春梅. 維生素B2聯(lián)合甘草鋅治療復發(fā)性口腔潰瘍的臨床研究[J]. 中國醫(yī)藥指南，2012，（23）：488-489.

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綜上，高效液相色譜法在測定復方甘草鋅口腔復合膜中的氨來呫諾與甘草酸含量的方法與配位滴定方法測定甘草鋅中鋅含量的方法具有很多優(yōu)點，操作方便，而且測定結果也十分準確。因此，本文的試驗方法在臨床中具有很大的推廣價值。

[參考文獻]

[1] 陳虹. 氨來呫諾和表皮生長因子口腔復合膜的質控方法研究[J]. 河北醫(yī)藥，2011，16（33）：2521-2522.

[2] 王同順，房志仲. 復方甘草鋅與氨來呫諾口腔復合膜的處方篩選[J]. 現(xiàn)代藥物與臨床，2010，25（3）：207-209.

[3] 宋九華，李瓊，萬東海. HPLC測定九味羌活丸中甘草酸的含量[J]. 樂山師范學院學報，2010，25（5）：43-44.

[4] 楊鳳昆，蔡莉娟，房志仲，等. 反相高效液相色譜法測定復方甘草鋅口腔復合膜中甘草酸的含量[J]. 天津醫(yī)藥，2009，37（3）：221-222.

[5] 王同順，房志仲，李錫晶，等. 復方甘草鋅口腔復合膜的質控方法研究[J]. 天津醫(yī)科大學學報，2010，16（1）：54-56.

[6] 汪秋蘭，王文清，馬永貴，等. 高效液相色譜法在中藥有效成分含量測定中的應用[J]. 醫(yī)藥導報，2011，11（3）：1474-1476.

[7] 郝旭華，劉斌鈺. 甘草鋅與維生素B2聯(lián)合治療中年復發(fā)性口腔潰瘍療效觀察[J]. 實用醫(yī)技雜志，2011，18（9）：959-960.

[8] 張春雨，楊麗杰，郭美華，等. 高效液相色譜法測定復方口腔扁平苔癬涂膜劑中左氧氟沙星含量[J]. 中國藥業(yè)，2012，10（21）：43-44.

[9] 葉志清，饒春芳，胡友德，等. 用布喇格光纖光柵傳感器測定口腔復合樹脂材料光固化收縮與溫度演化特性[J]. 光子學報，2012，41（5）：528-530.

[10] 劉麗波，李玉紅，岳炳芬，等. 護理質控在護理管理中的重要性[J]. 中國保健營養(yǎng)，2013，1（2）：256-257.

[11] 孫磊，蔡莉娟. 正交實驗法篩選甘草鋅口腔潰瘍膜處方的實驗研究[J]. 天津醫(yī)藥， 2013，（8）：826-827.

[12] 李沙，李曉飛，黃郁瑩，等. 紫草膜劑的制備及左旋紫草素的含量測定[J]. 中國醫(yī)院藥學雜志， 2011，（12）：961-966.

[13] 鄧利軍. 表皮生長因子在復發(fā)性口腔潰瘍中的療效研究[J]. 中外醫(yī)療，2013，5（21）：67-68.

[14] 張復蘭，羅曉冰，杜池，等. 甘草鋅復合維生素B聯(lián)合治療ROU90例臨床觀察[J]. 臨床口腔醫(yī)學雜志， 2010， 2（25）：115-116.

[15] 姚冬梅. 甘草鋅膠囊治療復發(fā)性口腔潰瘍療效觀察[J]. 醫(yī)藥衛(wèi)生， 2013，（8）：147-148.

[16] 尹文國. 甘草鋅聯(lián)合康復新液治療復發(fā)性阿弗他潰瘍的效果觀察[J]. 中國醫(yī)藥導報， 2013，10（13）：73-75.

[17] 汪春梅. 維生素B2聯(lián)合甘草鋅治療復發(fā)性口腔潰瘍的臨床研究[J]. 中國醫(yī)藥指南，2012，（23）：488-489.

（收稿日期：2013-11-06）endprint