白 云 熊艷杰 姜廣建

臨床研究

mfn2和nm23在不同膀胱組織中的表達(dá)

白 云1熊艷杰2姜廣建3△

目的 探討線粒體融合蛋白-2(mfn2)和腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因（nm23）在膀胱癌組織中的表達(dá)及與臨床病理特征間的關(guān)系。方法選取65例膀胱癌標(biāo)本，其中男50例，女15例。TNM分期：Ⅰ期47例、Ⅱ期10例、Ⅲ期5例、Ⅳ3例，另擇正常膀胱組織、良性膀胱腫瘤標(biāo)本各15例作為對照。應(yīng)用免疫組化SP法檢測mfn2和nm23的表達(dá)情況，并分析其在膀胱癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果膀胱癌組織中mfn2的陽性表達(dá)率均高于正常和良性膀胱組織，nm23的陽性表達(dá)率均低于正常和良性膀胱組織（均P＜0.05）。膀胱癌組織中mfn2的表達(dá)在不同分化程度、TNM分期間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在不同年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床分期間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。nm23在不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床分期間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在不同年齡、性別和分化程度間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論mfn2在膀胱癌中高表達(dá)，mfn2與膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)；nm23在膀胱癌中低表達(dá)，可作為預(yù)測膀胱癌轉(zhuǎn)移及其預(yù)后的參考指標(biāo)。

膀胱腫瘤；免疫組織化學(xué)；mfn2；nm23

線粒體融合蛋白-2(mfn2)，也稱為增殖抑制基因(HSG)，由陳光慧教授發(fā)現(xiàn)[1]，其位于線粒體外膜，與線粒體的融合功能有關(guān)，其介導(dǎo)的增殖抑制作用可能是通過線粒體凋亡途徑來實(shí)現(xiàn)的。目前，國內(nèi)外對此基因在多種癌癥中的表達(dá)及作用有了較為深入的研究，但其與膀胱癌的相關(guān)研究報(bào)道尚屬少見。腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因（nm23）是從K-1735鼠黑色素瘤細(xì)胞株中用消減雜交法分離出來的，是與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制有關(guān)的基因，其表達(dá)水平與腫瘤侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，在膀胱癌中的表達(dá)已有相關(guān)研究，但其與臨床病理特征間的關(guān)系報(bào)道不一。本研究采用免疫組化法檢測mfn2和nm23在膀胱癌組織中的表達(dá)情況，并分析其表達(dá)與臨床病理特征間的關(guān)系，探討其在膀胱癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年5月—2013年8月于河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院行手術(shù)治療的膀胱癌患者65例，其中男50例，女15例，年齡35～75歲，平均（57.7±8.2）歲；術(shù)前均未經(jīng)任何化療、放療及抗腫瘤藥物治療。取其手術(shù)切除的膀胱癌標(biāo)本，臨床病理分期按照TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行：Ⅰ期47例、Ⅱ期10例、Ⅲ期5例、Ⅳ3例。另選取正常膀胱組織、良性膀胱腫瘤各15例作為對照。

1.2 主要試劑 兔抗人mfn2單克隆抗體（美國Santa Cruz公司），鼠抗人nm23單克隆抗體（美國Zymed公司），SP-9001免疫組化染色試劑盒、DAB及枸櫞酸鹽（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），OLYMPUS光學(xué)顯微鏡（奧林巴斯光學(xué)工業(yè)株式會社）。

1.3 方法 采用免疫組化SP法，操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。切片常規(guī)脫蠟至水進(jìn)行高壓抗原修復(fù)，抗原封閉，每張切片滴加兔抗人mfn2單克隆抗體（1∶200）和鼠抗人nm23單克隆抗體（即用型試劑），4℃過夜，次日加生物素標(biāo)記的羊抗鼠∕兔二抗工作液，PBS沖洗3次后，加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，PBS沖洗后，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水封固。用PBS代替一抗做陰性對照。

1.4 結(jié)果判定 以細(xì)胞漿或細(xì)胞核呈現(xiàn)黃色至棕黃色判為陽性細(xì)胞。染色強(qiáng)度分為：未染色0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細(xì)胞所占百分比：0～5％為0分，6％～25％為1分，26％～50％為2分，＞50％為3分。兩者相加之和為結(jié)果評定：0～2分判斷為陰性，3～6分判斷為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS 8.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用方差分析，組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（％）表示，多組間比較采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 mfn2和nm23在不同膀胱組織中的表達(dá) mfn2陽性反應(yīng)主要位于細(xì)胞漿，呈棕黃色顆粒，見圖1A；mfn2在良性膀胱腫瘤和正常膀胱組織中的陽性表達(dá)率均低于膀胱癌組織（均P＜0.05），見表1。nm23的陽性染色主要在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，細(xì)胞核表達(dá)量少，見圖1B；nm23在良性膀胱腫瘤和正常膀胱組織中的陽性表達(dá)率均高于膀胱癌組織（均P＜0.05），見表1。

2.2 mfn2和nm23在膀胱癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系 mfn2的表達(dá)在不同分化程度、TNM分期間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在不同年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床分期間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。nm23在不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床分期間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在不同年齡、性別和分化程度間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

Fig.1 Expression of HSG∕mfn2 and nm23 in bladder cancer（IHC,×400）圖1 mfn2和nm23在膀胱癌中的表達(dá)（免疫組化，×400）

Tab.1 HSG/mfn2 and nm23 positive expression rates in bladder cancer group,benign bladder tumor group and normal bladder tissue group表1 mfn2和nm23在不同膀胱組織中的表達(dá)例（％）

3 討論

3.1 mfn2在膀胱癌組織中的的表達(dá)意義 mfn2是位于線粒體外膜的一種ATP反應(yīng)酶，它參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，并參與線粒體融合。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)mfn2在卵巢癌中高表達(dá)，丁煥然等[2]研究發(fā)現(xiàn)mfn2在肺癌中的表達(dá)也較高。然而也有研究顯示，mfn2在乳腺癌[3]、結(jié)直腸癌[4]、胃癌[5]等組織中的表達(dá)量明顯低于正常組織和良性組織。本研究結(jié)果顯示，mfn2在膀胱癌中的表達(dá)明顯高于良性膀胱腫瘤和正常膀胱組織，可能是由于線粒體過表達(dá)需要消耗能量較高的細(xì)胞，推測該基因在膀胱癌中的表達(dá)量高與促進(jìn)線粒體融合有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)mfn2的表達(dá)與腫瘤分化程度有關(guān)，分化程度低mfn2的陽性表達(dá)比例也較小，提示mfn2具有細(xì)胞周期阻滯效應(yīng)，誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞系凋亡[6]。筆者推測mfn2在膀胱癌組織中高表達(dá)也可能與線粒體功能及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡相關(guān)。但mfn2基因在癌癥中的作用還需進(jìn)一步深入研究。

3.2 nm23在膀胱癌組織中的的表達(dá)意義 nm23是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，其作用可能與其蛋白產(chǎn)物核苷二磷酸激酶有關(guān)，此酶通過影響細(xì)胞骨架蛋白的生物活性調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動，并通過G蛋白的信號傳遞發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用，從而抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[7]。本研究結(jié)果顯示，nm23在不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床分期間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，膀胱癌組織中nm23的陽性表達(dá)比例隨著TNM分期和臨床分期的增加而降低，提示TNM分期和臨床分期與nm23的陽性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，nm23可能參與了膀胱癌組織的分化、侵潤與轉(zhuǎn)移，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯低于陰性者。高放[8]、顧勇[9]等的研究結(jié)果與本研究基本一致，提示nm23在膀胱癌的生物學(xué)演變過程中，對癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移起著一定的調(diào)節(jié)作用，可作為預(yù)測膀胱癌預(yù)后的指標(biāo)[10]。

Tab.2 The relationship between the expression of HSG/mfn2,nm23 and the clinical pathology parameter of bladder cancer表2 mfn2、nm23在膀胱癌中的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系 例（％）

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（2013-11-07收稿 2014-05-29修回）

（本文編輯 陳麗潔）

Expression of Mitofusin-2(mfn2)and nm23 in Different Bladder Tissues

BAI Yun1，XIONG Yanjie2，JIANG Guangjian3△
1 College of Life Science，Hebei Union University，Tangshan 063000，China;2 Department of Pathology，Affiliated Hospital of Hebei Union University；3 Beijing University of Chinese Medicine△

E-mail:guangjianjiang@sina.com

ObjectiveTo research the expression of mitofusin-2(mfn2)and tumor metastasis suppressor genes （nm23）in bladder cancer cells and its correlation with clinical pathological feature．MethodsImmunohistochemistry was used to measure the expression of mfn2 and nm23．Sixty-five cases of bladder cancer were sampled，which include fifty cases of male and fifteen cases of female.TNM stage：Forty-seven cases were in stage I;Ten cases were in stage II;Five cases were in stageⅢ;Three cases were in stageⅣ.Other fifteen cases were sampled from normal bladder or benign tumor of bladder as control.All cases were collected from department of pathology，affiliated Hospital of hebei union university.ResultsThe positive expression rate of mfn2 in bladder cancer tissues was significantly higher than those in normal bladder tissues and benign tumor of bladder（χ2=32.528，P＜0.05）；The positive expression rate of nm23 in bladder cancer tissues was significantly lower than those in normal bladder tissues and benign tumor of bladder(χ2=19.719，P＜0.05)；the high expression level of mfn2 in bladder cancer was associated with tumor differentiation and TNM stage（P＜0.05），but not correlated with age，sex，lymph node metastasis and clinical grade.The low level of nm23 was associated with TNM stage，clinical grade and LN metastasis.ConclusionThe positive expression rate of mfn2 was increased in bladder cancer.It indicated that there was a close relationship between mfn2 and the occurrence and development of bladder cancer；The expression rate of nm23 was decreased in bladder cancer，it may be a predictor for metastasis and prognosis of bladder cancer.

urinary bladder neoplasms;immunohistochemistry;mfn2;nm23

R737.15

A

10.3969∕j.issn.0253-9896.2014.10.009

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（30770247）；河北省科技廳課題（13277714D）

1河北聯(lián)合大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院（郵編063000）；2河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院病理科；3北京中醫(yī)藥大學(xué)

△通訊作者 E-mail：guangjianjiang@sina.com