蘇曉華宋殿榮 張 崴郭 潔王雅楠趙 琳

子宮內(nèi)膜異位癥中子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力的研究

蘇曉華1宋殿榮2△張 崴2郭 潔2王雅楠2趙 琳2

目的 檢測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）患者子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中環(huán)氧化酶-2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）、鋅指轉(zhuǎn)錄因子（Snail）和E-鈣黏蛋白（E-cadherin）mRNA表達(dá)情況，分析EMs中子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力。方法收集EMs患者的在位及異位病灶子宮內(nèi)膜組織和子宮肌瘤患者的在位內(nèi)膜組織，原代消化培養(yǎng)子宮內(nèi)膜細(xì)胞，取純化的第4代子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行研究，RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞COX-2、PGE2、Snail和E-cadherin mRNA的表達(dá)。結(jié)果EMs和子宮肌瘤患者分泌期在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2、Snail和E-cadherin mRNA表達(dá)與增殖期比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；EMs患者在位及異位的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2、Snail mRNA表達(dá)比肌瘤患者在位細(xì)胞均明顯升高，而E-cadherin mRNA表達(dá)降低（P＜0.05或P＜0.01）；EMs患者異位的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2、Snail mRNA表達(dá)比在位間質(zhì)細(xì)胞升高，而E-cadherin mRNA表達(dá)降低（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論EMs患者的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)于非EMs患者，且在EMs發(fā)病中異位病灶子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力更強(qiáng)。

子宮內(nèi)膜異位癥；環(huán)氧化酶-2；前列腺素E2；鋅指轉(zhuǎn)錄因子；E-鈣黏蛋白

子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）是婦科常見疾病，可引起10％～15％的育齡期婦女不孕和盆腔痛，其雖為良性疾病，卻具有無限生長、生成新生血管、浸潤并破壞周圍組織和局部或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等惡性腫瘤的一些特性。子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞具有持續(xù)增殖、抗凋亡、促進(jìn)血管生成、侵襲、轉(zhuǎn)移和調(diào)節(jié)局部免疫系統(tǒng)等作用。本研究利用子宮內(nèi)膜細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)，采用RTPCR法研究體外培養(yǎng)的EMs患者在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中環(huán)氧化酶-2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）、鋅指轉(zhuǎn)錄因子（Snail）和E-鈣黏蛋白（E-cadherin）mRNA的表達(dá)，探討EMs中在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本采集 標(biāo)本取自2012年10月—2013年12月在天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦科因子宮肌瘤、卵巢巧克力囊腫行手術(shù)治療的已婚婦女，患者年齡23～49歲，平均（32.56±7.42）歲，既往均月經(jīng)規(guī)律，未放置宮內(nèi)節(jié)育器，術(shù)前6個(gè)月內(nèi)未服用抗炎、激素類等藥物治療。在位子宮內(nèi)膜組織取自術(shù)前行診斷性刮宮術(shù)的內(nèi)膜，病理證實(shí)子宮內(nèi)膜無病理性改變；異位內(nèi)膜組織取自手術(shù)切除的卵巢異位病灶，術(shù)后病理證實(shí)符合EMs。共收集子宮肌瘤患者在位子宮內(nèi)膜組織30例，其中增殖期內(nèi)膜18例，分泌期12例；EMs患者在位內(nèi)膜組織35例，其中增殖期內(nèi)膜25例，分泌期10例；卵巢異位病灶35例。所有標(biāo)本的采集均得到患者本人或家屬知情授權(quán)，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 主要試劑 培基（HyCloneSH30023.01B）、胎牛血清（HyCloneSV30087.02）、胰酶（Invitrogen）、雙抗（GIBCO 15140-122）、Ⅰ型膠原酶（SIGMA）、無酶水（QIAGEN 129115）、抗波形蛋白抗體（Abcam ab8069）、抗角蛋白抗體（Abcam ab7754）、藻紅蛋白抗體（VECTOR EI-2007）、總RNA提取試劑盒（天根，DP419）、Quant一步法RT-PCR試劑盒（天根，KR113）。

1.3 主要儀器 二氧化碳培養(yǎng)箱（CH9-80）、倒置顯微鏡（37XB）、低速臺(tái)式離心機(jī)（L-500）、微型高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)（H-1600W）、PCR儀（9700）、電泳儀（MiniSC）、凝膠電泳成像儀（ChampGel-5000）、紫外可見分光光度計(jì)（UV7804）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 取材 將標(biāo)本迅速放入裝有冰全培基（含有1％雙抗、10％胎牛血清、89％DMEM/F12）的離心管中，30 min內(nèi)移入實(shí)驗(yàn)室于紫外線消毒后的超凈臺(tái)中進(jìn)行操作。

1.4.2 子宮內(nèi)膜細(xì)胞原代培養(yǎng) 取材后將無菌離心管中的標(biāo)本倒入消毒后的無菌培養(yǎng)皿中，用無菌冰Hanks漂洗3～5次，去除血塊，至組織變白凈。用眼科剪將組織剪成約1 mm3的碎塊，放入15 mL無菌離心管中，加入3倍體積消化酶，用移液器輕柔吹打混合均勻后，置于37℃恒溫箱中消化40 min，同時(shí)輕輕搖晃，使細(xì)胞和消化酶充分接觸，徹底消化，直至組織呈云霧狀。加入含10％胎牛血清的DMEM/F12全培基終止消化，吹打混勻，400 r/min的速度離心3 min，使組織沉淀，將上清液移入15 mL離心管中，1 000 r/min速度離心7 min，棄上清液，加入全培基懸浮細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，以1× 105/mL密度接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，置37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，24 h后觀察細(xì)胞貼壁情況并換液，隔48 h換液1次。

1.4.3 子宮內(nèi)膜細(xì)胞傳代培養(yǎng) 倒置顯微鏡下觀察，當(dāng)原代細(xì)胞長滿瓶壁約80％時(shí)進(jìn)行傳代，棄去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，無菌PBS洗滌3次，加入0.25％含EDTA的胰酶3 mL，于37℃培養(yǎng)箱中消化，每3 min輕搖培養(yǎng)瓶1次，顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞收縮變圓即將離開培養(yǎng)瓶時(shí)加入全培基終止消化，用移液管反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，將細(xì)胞懸液移入15 mL離心管中，1 000 r/min離心7 min，棄上清，加入全培基混勻，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，以1∶2或1∶3比例傳代，置37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，隔48 h換液1次。

1.4.4 子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞分離純化 參考Beliard等[1]用差速沉降法結(jié)合篩網(wǎng)過濾法將子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞與腺上皮細(xì)胞分離、純化，具體方法是將胰酶消化后的第2代子宮內(nèi)膜細(xì)胞懸液經(jīng)250 μm篩網(wǎng)過濾去除黏液和未消化的組織，加10 mL全培基混勻，靜置30 min，吸取頂部8 mL細(xì)胞懸液移入新的15 mL離心管中，1 000 r/min離心7 min，棄上清，再加入10 mL全培基混勻，靜置30 min，將頂部8 mL細(xì)胞懸液經(jīng)400 μm篩網(wǎng)過濾去除殘留的腺上皮細(xì)胞團(tuán)，收集過濾后的間質(zhì)細(xì)胞加入全培基混勻，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，以1×105/mL密度接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，置37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，24 h后觀察細(xì)胞貼壁情況并換液，隔48 h換液1次。

1.4.5 子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞鑒定 （1）吉姆薩染色形態(tài)學(xué)鑒定。將純化后的第4代子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞接種到6孔板內(nèi)，待細(xì)胞長滿40％時(shí)進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。4％甲醛固定3 min，PBS洗滌2 min×3遍，吉姆薩染色液室溫染色15 min，PBS洗滌2 min×3遍，晾干后于顯微鏡下觀察。（2）免疫熒光鑒定。將純化后的第4代子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞接種到6孔板內(nèi)，待細(xì)胞長滿40％時(shí)進(jìn)行免疫熒光鑒定。4％甲醛固定10 min，PBS洗滌2 min×3遍，0.1％Triton×100室溫透化5 min，PBS清洗2 min×3遍，2％BSA室溫封閉1 h，吸去BSA，加入一抗（鼠抗人波形蛋白和鼠抗人角蛋白，1∶200濃度），PBS作陰性對(duì)照組，封閉孔板，4℃避光過夜。PBS清洗2 min×3遍，10 mg/L藻紅蛋白室溫孵育1 h，吸棄，PBS清洗2 min×3遍，避光，5 mg/L Hoechst室溫復(fù)染核3 min，PBS清洗2 min×6遍，熒光顯微鏡下觀察。

1.4.6 子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2、Snail和E-cadherin mRNA表達(dá)檢測(cè) 將第4代子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞接種到75 cm2培養(yǎng)瓶，待細(xì)胞長滿后消化，采用RT-PCR法檢測(cè)COX-2、PGE2、Snail、E-cadherin mRNA表達(dá)。（1）子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞總RNA提取。嚴(yán)格按試劑盒說明操作，測(cè)定光密度（OD）260及OD280以估算總RNA的濃度及純度，并用1％瓊脂糖凝膠電泳鑒定總RNA完整性，提取的總RNA于-80℃保存。（2）引物序列。見表1。（3）RT-PCR擴(kuò)增反應(yīng)。取1 μg總RNA，分別擴(kuò)增COX-2、PGE2、Snail、E-cadherin及β-actin基因，反應(yīng)體系為25 μL，反應(yīng)條件：50℃30 min，94℃預(yù)變性2 min；94℃變性45 s，53～56℃退火45 s（根據(jù)不同目的基因選擇相應(yīng)的退火溫度），65℃延伸1 min，共35次循環(huán)；65℃終延伸10 min，4℃保存。取各組PCR產(chǎn)物7 μL加入樣本孔中行1.5％瓊脂糖凝膠電泳，在200 mA電流下電泳15 min，紫外燈下觀察電泳條帶，每個(gè)樣本經(jīng)PCR擴(kuò)增后以Marker作為參照。（4）PCR產(chǎn)物半定量分析。PCR產(chǎn)物電泳后經(jīng)Gel-PRO ANALYZER凝膠定量分析軟件對(duì)電泳條帶進(jìn)行灰度分析，目的基因相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度=目的基因電泳條帶灰度值/β-actin內(nèi)參照條帶灰度值。每個(gè)樣本重復(fù)4次實(shí)驗(yàn)。

Tab.1 Primer sequences of COX-2，PGE2，Snail，E-cadherin and β-actin for RT-PCR表1 COX-2、PGE2、Snail、E-cadherin、β-actin的引物序列

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，數(shù)據(jù)以±s表示，2組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。3組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)情況及鑒定 30例子宮肌瘤患者在位子宮內(nèi)膜中29例成功培養(yǎng)出子宮內(nèi)膜細(xì)胞，1例染菌；35例巧克力囊腫患者在位內(nèi)膜中33例成功培養(yǎng)出子宮內(nèi)膜細(xì)胞，2例染菌，異位病灶中25例成功培養(yǎng)出子宮內(nèi)膜細(xì)胞，10例因病灶過小未培養(yǎng)出細(xì)胞，無染菌標(biāo)本。經(jīng)差速沉降法結(jié)合篩網(wǎng)過濾法獲得的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞純度可達(dá)95％，第4代間質(zhì)細(xì)胞經(jīng)吉姆薩染色可見細(xì)胞呈梭形，胞核呈橢圓形，未見多角形的腺上皮細(xì)胞；免疫熒光鑒定結(jié)果鼠抗人角蛋白（Cytokeratin）染色陰性，而鼠抗人波形蛋白（Vimentin）染色陽性，見圖1，證實(shí)研究的子宮內(nèi)膜細(xì)胞中以間質(zhì)細(xì)胞為主。

2.2 子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2、Snail、E-cadherin mRNA表達(dá)水平比較

2.2.1 子宮內(nèi)膜細(xì)胞總RNA提取結(jié)果 所提取的細(xì)胞總RNA OD260/OD280介于1.8～2.0，電泳可見清晰的18 S和28 S 2個(gè)條帶，且2條帶的OD比值為28 S∶18 S＞2∶1，說明所提取的總RNA純度較高且較完整，無DNA、酚、蛋白的污染，見圖2。

Fig.2 Agarose gel electrophoresis to identify RNA integrity圖2 RNA完整性瓊脂糖凝膠電泳圖

2.2.2 半定量RT-PCR結(jié)果 （1）增殖期、分泌期在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞半定量RT-PCR電泳灰度值比較。子宮肌瘤及EMs患者分泌期子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2、Snail、E-cadherin mRNA表達(dá)與增殖期間質(zhì)細(xì)胞比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖3、4，表2。（2）EMs在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞半定量RT-PCR電泳灰度值比較。各組患者異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2、Snail、E-cadherin mRNA表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中COX-2、PGE2、Snail在EMs患者異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)最高，EMs在位間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)次之，子宮肌瘤患者在位間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)最低；而E-cadherin表達(dá)情況相反，見圖5、表3。

Fig.3 Amplification products of target gene from eutopic endometrial stromal cells of patients with uterine fibroids圖3 子宮肌瘤患者在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞目的基因擴(kuò)增產(chǎn)物

Fig.4 Amplification of target gene in eutopic endometrial stromal cells from patients with EMS圖4 EMs患者在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞目的基因擴(kuò)增產(chǎn)物

Fig.5 Amplification of target gene in eutopic and ectopic endometrial stromal cells圖5 子宮肌瘤位內(nèi)膜、EMs在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞目的基因擴(kuò)增產(chǎn)物

Tab.2 Comparison of transcription levels of COX-2,PGE2,Snail and E-cadherin between proliferative stage and secretory stage of eutopic endometrial stromal cells表2 增殖期、分泌期在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2、Snail、E-cadherin mRNA表達(dá)量比較（±s）

Tab.2 Comparison of transcription levels of COX-2,PGE2,Snail and E-cadherin between proliferative stage and secretory stage of eutopic endometrial stromal cells表2 增殖期、分泌期在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2、Snail、E-cadherin mRNA表達(dá)量比較（±s）

均P＞0.05

組別肌瘤在位內(nèi)膜n 17 12 EMs在位內(nèi)膜增殖期分泌期t增殖期分泌期t 23 10 COX-2 0.597±0.019 0.601±0.022 0.330 0.747±0.048 0.751±0.073 0.112 PGE20.542±0.047 0.555±0.052 0.459 0.646±0.044 0.666±0.069 0.593組別肌瘤在位內(nèi)膜n 17 12 EMs在位內(nèi)膜增殖期分泌期t增殖期分泌期t 23 10 Snail 0.656±0.114 0.684±0.063 0.525 0.857±0.059 0.884±0.091 0.614 E-cadherin 0.936±0.032 0.967±0.054 1.197 0.756±0.080 0.762±0.079 0.119

Tab.3 Comparison of transcription levels of COX-2, PGE2,Snail and E-cadherin in endometrial stromal cells between each group表3 各組子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2、Snail、E-cadherin mRNA表達(dá)量比較 （±s）

Tab.3 Comparison of transcription levels of COX-2, PGE2,Snail and E-cadherin in endometrial stromal cells between each group表3 各組子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2、Snail、E-cadherin mRNA表達(dá)量比較 （±s）

＊＊P＜0.01，a與EMs異位組比較，b與EMs在位組比較，P＜0.05

組別EMs異位EMs在位肌瘤在位F n 25 33 29 COX-2 0.846±0.074 0.763±0.058a0.598±0.016ab31.512＊＊PGE20.722±0.036 0.646±0.043a0.599±0.015ab20.277＊＊Snail 0.993±0.156 0.846±0.049a0.690±0.077ab12.723＊＊E-cadherin 0.674±0.079 0.771±0.062a0.916±0.034ab23.663＊＊

3 討論

3.1 子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的選擇 細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移包括細(xì)胞通過細(xì)胞外基質(zhì)的主動(dòng)運(yùn)動(dòng)和蔓延到遠(yuǎn)處器官。EMs形成過程中經(jīng)期脫落的子宮內(nèi)膜細(xì)胞通過輸卵管后需經(jīng)過腹水或腹腔液、腹腔細(xì)胞和腹腔細(xì)胞外基質(zhì)這三道防線進(jìn)入腹腔，然后在盆腹腔腹膜、器官等部位種植生長，形成異位病灶[2]。子宮內(nèi)膜細(xì)胞主要包括子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞，在EMs形成過程中腺上皮細(xì)胞參與異位病灶的生長，間質(zhì)細(xì)胞參與異位病灶的黏附過程[3-4]。子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的黏附作用是EMs形成的第一步[4]，之后通過重組腺上皮和間質(zhì)細(xì)胞形成子宮內(nèi)膜腺體而進(jìn)一步促進(jìn)異位病灶的生長[3]。因此，本實(shí)驗(yàn)以原代培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞為對(duì)象，研究EMs中與細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)。

3.2 COX-2作用途徑與細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移可能的關(guān)系 細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞間的黏附作用是防止細(xì)胞轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，破壞正常細(xì)胞間的黏附作用可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移和增殖能力，從而引起細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。COX-2是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為PGE2的誘導(dǎo)酶，與腸癌[5]、卵巢上皮性癌[6]、胃癌[7]、肺癌[8]等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，具有刺激細(xì)胞增殖、抑制凋亡、參與細(xì)胞侵襲、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和促進(jìn)血管生成的作用。Snail作為E-cadherin的抑制因子，在小細(xì)胞肺癌[9]、膀胱癌[10]、乳腺癌[11]等多種惡性腫瘤中表達(dá)明顯升高，其主要功能是調(diào)控細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和生存能力，使腫瘤細(xì)胞從原始病灶分離并轉(zhuǎn)移到身體的其他部位，從而促進(jìn)細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。E-cadherin是細(xì)胞間黏附和維持正常組織結(jié)構(gòu)的必需蛋白，其降低與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后有關(guān)。在肺癌中過表達(dá)的COX-2誘導(dǎo)產(chǎn)生的PGE2通過促進(jìn)Snail的表達(dá)而抑制E-cadherin的表達(dá)，從而使癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力增加[12]。

3.3 EMs子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力 本實(shí)驗(yàn)以原代培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞為研究對(duì)象，可代表患者體內(nèi)細(xì)胞的特征，研究結(jié)果顯示子宮肌瘤和EMs患者增殖期在位子宮內(nèi)膜分離培養(yǎng)的間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2、Snail和E-cadherin mRNA表達(dá)與分泌期培養(yǎng)的間質(zhì)細(xì)胞比較均無顯著差異，提示體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力不受子宮內(nèi)膜周期性變化的影響。郎景和教授關(guān)于EMs的發(fā)病提出了“在位內(nèi)膜決定論”[2]，即患者的在位內(nèi)膜本身在黏附、種植、侵襲能力上要強(qiáng)于非EMs婦女，更容易形成異位病灶。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示EMs患者的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2和Snail mRNA表達(dá)比非EMs患者均升高，而E-cadherin mRNA表達(dá)降低，提示EMs患者的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)于非EMs患者。有學(xué)者指出EMs患者在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞要在盆腔內(nèi)種植形成異位病灶，還要通過腹水、腹腔內(nèi)細(xì)胞、腹膜外細(xì)胞基質(zhì)這三道防線的篩選作用，最后留下最強(qiáng)的克隆細(xì)胞系在腹腔內(nèi)種植形成異位病灶，因此提出子宮內(nèi)膜異位病灶是單克隆起源學(xué)說[13]。對(duì)于EMs患者而言，異位病灶子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞COX-2、PGE2和Snail mRNA表達(dá)比在位內(nèi)膜細(xì)胞均升高，而E-cadherin mRNA表達(dá)降低，提示異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的功能有所改變，侵襲、轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)于在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞。

Fig.1 Identification of endometrial cells圖1 子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞鑒定

[1]Beliard A,No?l A,Goffin F,et al.Role of endocrine status and cell type in adhesion of human endometrial cells to the peritoneum in nude mice[J].Fertil Steril,2002,78(5):973-978.

[2]Chinese Medical Association.The eighth national academic conference proceedings of obstetrics and gynecology[C].Nanjing,2005: 81-82.[中華醫(yī)學(xué)會(huì).第八次全國婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C].南京，2005：81-82.]

[3]Nisolle M,Casanas-Roux F,Donnez J.Early-stage endometriosis: adhesion andgrowth of human menstrual endometrium in nude mice [J].Fertil Steril,2000,74(2):306-312.

[4]Witz CA,Monotoya-Rodriguez IA,Schenken RS.Whole explants of peritoneum and endometrium:a novel model of the early endometriosis lesion[J].Fertil Steril,1999,71(1):56-60.

[5]Peng Q,Yang S,Lao X,et al.Meta-analysis of the association between COX-2 polymorphisms and risk of colorectal cancer based on case-control studies[J].PLoS One，2014,9(4):e94790.doi: 10.1371/journal.pone.0094790.

[6]Agachan Cakmakoglu B,Attar R,Kahraman OT,et al.Cyclooxygenase-2 gene and epithelial ovarian carcinoma risk[J].Mol Biol Rep，2011,38(5):3481-3486.doi:10.1007/s11033-010-0458-7.

[7]Yan WF,Sun PC,Nie CF,et al.Cyclooxygenase-2 polymorphisms were associated with the risk of gastric cancer:evidence from a meta-analysis based on case-control studies[J].Tumour Biol,2013,34 (6):3323-3330.doi:10.1007/s13277-013-0901-1.

[8]Coskunpinar E,Eraltan IY,Turna A,et al.Cyclooxygenase-2 gene and lung carcinoma risk[J].Med Oncol,2011,28(4):1436-1440. doi:10.1007/s12032-010-9627-8.

[9]Argast GM,Krueger JS,Thomson S,et al.Inducible expression of TGFβ,Snail and ZEBI recapitulates EMT in vitro and in vivo in a NSCLC model[J].Clin Exp Metastasis,2011,28(7):593-614.doi: 10.1007/s10585-011-9394-8.

[10]Shan Y,Zhang L,Bao Y,et al.Epithelial-mesenchymal transition, a novel target of sulforaphane via COX-2/MMP2,9/Snail,ZEB1 and miR-200c/ZEB1 pathways in human bladder cancer cells[J].J NutrBiochem,2013,24(6):1062-1069. doi:10.1016/j.jnutbio.2012.08.004.

[11]Li W,Liu C,Tang Y,et al.Overexpression of Snail accelerates adriamycin induction of multidrug resistance in breast cancer cells[J]. Asian Pac J Cancer Prev,2011,12(10):2575-2580.

[12]Dohadwala M,Yang SC,Luo J,et al.Cyclooxygenase-2-dependent regulation of E-cadherin:Prostaglandin E2 induces transcriptional repressors ZEB1 and Snail in non-small cell lung cancer[J].Cancer Res,2006,66(10):5338-5345.

[13]Varma R,Rollason T,Gupta JK,et al.Endometriosis and the neoplastic process[J].Reproduction,2004,127(3):293-304.

（2014-06-10收稿 2014-08-03修回）

（本文編輯 李鵬）

Invasion and Metastasis Ability of Endometrial Stromal Cells in Endometriosis

SU Xiaohua1，SONG Dianrong2△，ZHANG Wei2，Guo Jie2，WANG Yanan2，ZHAO Lin2
1 Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300073,China;2 The Second Affiliated Hospital，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine
△

E-mail：songdr58@126.com

ObjectiveTo analyze the invasion and metastasis of endometrial stromal cells in endometriosis through assessing the transcription levels of COX-2,PGE2,Snail and E-cadherin mRNA.MethodsEctopic and eutopic endometrial tissues from patients with EMs(endometriosis)or uterine fibroids were collected and cultured.The fourth generation of purified endometrial stromal cells were used for research,and the transcription levels of COX-2,PGE2,Snail and E-cadherin mRNA were analyzed by RT-PCR.ResultsThere were no statistical differences in transcription levels of COX-2,PGE2, Snail and E-cadherin mRNA in eutopic endometrial stromal cells from patients with EMs or uterine fibroids between secration stage and proliferation stage（P＞0.05）.The transcription levels of COX-2,PGE2and Snail mRNA were significantly increased while transcription level of E-cadherin mRNA was decreased in eutopic and ectopic endometrial stromal cells in patients with EM compared with those in patients with uterine fibroid.And the difference was statistically significant（P＜0.05 or P＜0.01）.The transcription levels of COX-2,PGE2and Snail mRNA were obviously higher while transcription level of E-cadherin mRNA was lower in ectopic endometrial stromal cells than those in eutopic endometrial stromal cells from patients with EMs.And the difference was statistically significant（P＜0.05 or P＜0.01）.ConclusionThe invasion and metastasis of endometrial stromal cells of patients with EMs were remarkable than those cell of patients without EMs.What’s more,the invasion and metastasis in ectopic endometrial stromal cells were more obvious than those cells in the pathogenesis of EMs.

endometriosis；COX-2；PGE2；Snail；E-cadherin

R711.7

A

10.3969/j.issn.0253-9896.2014.12.004

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81102613）

1天津中醫(yī)藥大學(xué)（郵編300073）；2天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院

△通訊作者 E-mail：songdr58@126.com