鄭 浩，柳曉金，齊海亮，馮建純，朱桂云，鄭立恒

(1河北省胸科醫(yī)院 功能科，河北 石家莊 050000；2.石家莊市第五醫(yī)院 檢驗科，河北 石家莊 050000)

結(jié)核病是全世界成人因傳染病死亡的主要疾病之一。中國是全球22個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一，活動性肺結(jié)核患者數(shù)量居世界第2位，僅次于印度。痰液抗酸染色鏡檢發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌是肺結(jié)核確診的最基本方法，也是發(fā)現(xiàn)傳染源、選擇用藥方案、考核療效、隨訪病情的重要手段，在肺結(jié)核病治療和控制中占有非常重要的地位[1]。本文應(yīng)用涂片法、漂浮集菌法和夾層杯法三種抗酸染色法對懷疑肺結(jié)核患者的痰液進(jìn)行檢測并討論它們對于診斷肺結(jié)核的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料 1 500例痰標(biāo)本來自2012年1～12月病房和門診高度懷疑肺結(jié)核的患者?；颊吣?28例，女672例，年齡11～76歲，平均(39.8±7.3)歲。標(biāo)本為患者從肺深部咳出的晨痰留于一次性塑料瓶內(nèi)和夾層杯內(nèi)。

1.2 主要試劑和儀器 TQ-12自動離心涂片機、振蕩器、生物安全柜(美國NUAIRE)、夾層杯、恒溫干片機、消化滅活液、抗酸染色液、顯微鏡(日本奧林巴斯)。

1.3 方法

1.3.1 涂片法 嚴(yán)格按照《痰涂片鏡檢質(zhì)量保證手冊》將患者留取的痰首先做直接涂片、干燥[2]，抗酸染色后鏡檢。

1.3.2 漂浮集菌法 將患者痰標(biāo)本加適量無菌蒸餾水，放入121 ℃高壓蒸汽鍋滅菌30 min，加入二甲苯適量，置振蕩器上震蕩10 min左右，待混合均勻，取出后加蒸餾水至瓶口，靜置15 min，取載玻片(血清處理以增加粘附力)蓋于瓶口，靜置15 min，取下玻片，干燥后抗酸染色。

1.3.3 夾層杯法 湖南懷化天騎醫(yī)學(xué)新技術(shù)有限公司提供夾層杯法配套儀器和試劑。將痰消化液加入裝有3～5 ml痰液的彭氏杯中，在振蕩器上混勻5 min，待消化完全，放入烤片箱內(nèi)滅活結(jié)核菌15 min，置于離心涂片機上，4 000 r/min，離心 8 min，倒掉上清液，按說明書要求進(jìn)行抗酸染色，自然干燥或烘干后，用取片針頂出夾層片，使涂菌面朝下，置載玻片上，用中性樹膠粘牢，油鏡鏡檢。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 用SPSS 13.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，三種方法間的比較用兩兩配對的卡方檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果 1 500份標(biāo)本分別用三種方法進(jìn)行檢測，涂片法陽性份數(shù)244份，漂浮集菌法330份陽性，夾層杯法336例陽性。

2.2 三種檢測方法的比較 涂片法與漂浮集菌法比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，漂浮集菌法的陽性檢出率較高(配對χ2=78.68，P<0.001，表1)；涂片法和夾層杯法的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，夾層杯法的陽性檢出率高(配對χ2=86.37，P<0.001，表2)；漂浮集菌法和夾層杯法檢測差異無統(tǒng)計學(xué)意義(配對χ2=2.50，P>0.05，表3)。

表1 涂片法與漂浮集菌法檢測結(jié)果比較

表2 涂片法與夾層杯法檢測結(jié)果比較

表3 漂浮集菌法與夾層杯法檢測結(jié)果比較

3 討論

肺結(jié)核的細(xì)菌學(xué)實驗室診斷一直是國內(nèi)外研究的重要課題[3]。痰培養(yǎng)和涂片抗酸染色發(fā)現(xiàn)結(jié)核菌是診斷肺結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn)。但是結(jié)核菌培養(yǎng)比較復(fù)雜和昂貴，所需時間較長，一般在4～8周左右，在貧困的地區(qū)難以普及和推廣。涂片法是抗酸菌病原學(xué)檢測方法中最經(jīng)濟(jì)、快捷、有效的方法，但是其敏感性低，只有大于5 000條菌/ml的痰液才能檢測到抗酸菌。

近些年發(fā)明的漂浮集菌法和夾層杯法，通過濃縮在痰液中分散的結(jié)核菌來提高結(jié)核菌的檢出率。漂浮集菌法先把痰液進(jìn)行高壓滅菌，再加消化液震蕩使結(jié)核菌分散開來，利用結(jié)核菌的密度小于消化液密度的特點，通過結(jié)核菌漂浮于液體表面來達(dá)到集菌的目的。夾層杯法使用特制的消化液破壞痰液中的蛋白，并高速震蕩，使痰液中聚集的結(jié)核菌分散開來而有利于通過高速離心沉淀于夾層杯底部的薄膜上以達(dá)到集菌的目的，再進(jìn)行抗酸染色及鏡檢。此研究的結(jié)果是漂浮集菌法和夾層杯法檢測結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異，夾層杯的陽性檢出率稍高一些。前者檢測過程難以標(biāo)準(zhǔn)化，操作費時、繁瑣，高壓滅菌時間長，漂浮到液面的結(jié)核菌也不能保證完全粘附在玻片上，易造成污染，且受操作者的主觀影響因素較多，假陽性、假陰性的幾率較高。而后者易于標(biāo)準(zhǔn)化，操作安全、簡便，整個實驗在2 h內(nèi)完成，且痰標(biāo)本操作在夾層杯中進(jìn)行，減少了標(biāo)本暴露，在制作烤片過程中，60 ℃ 20 min可有效殺滅結(jié)核菌，有效提高了實驗室生物安全水平，通過離心結(jié)核菌完全直接沉淀到薄膜上，標(biāo)本用樹脂封存于載玻片上，避免了交叉污染，陽性率也得以提高[4-6]。

綜上所述，涂片法陽性率低，給一些肺結(jié)核患者的診斷帶來一定困難；漂浮集菌法步驟繁瑣，不易于標(biāo)準(zhǔn)化，應(yīng)用受到限制；而夾層杯法易于標(biāo)準(zhǔn)化、安全性高、高效、便捷，較涂片法陽性率高，值得適當(dāng)推廣。

【參考文獻(xiàn)】

[1] 徐寧.痰中結(jié)核桿菌的檢測方法及臨床意義[J].臨床肺科雜志,2009,14(4):536.

[2] 中國疾病預(yù)防控制中心.痰涂片鏡檢質(zhì)量保證手冊[M].北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社,2004:12-13.

[3] 陳中秀，謝清波，周鳳榮.聚集沉淀涂片與直接涂片抗酸染色法檢測抗酸桿菌的應(yīng)用比較[J].中國防癆雜志,2009,31(4):225-226.

[4] 王淑俠，劉成永，閆家微，等.夾層杯離心涂片集菌法快速檢測抗酸桿菌臨床應(yīng)用的初步觀察[J].中國防癆雜志,2009,31(9):535-537.

[5] 楊華林，譚云洪，白麗瓊，等.液基夾層杯技術(shù)檢測抗酸桿菌應(yīng)用性研究[J].中國防癆雜志,2011,33(5):279-282.

[6] 王改，曹青山，王金繩，等.夾層杯集菌離心涂片法檢測痰抗酸桿菌對肺結(jié)核診斷價值的研究[J].中國民康醫(yī)學(xué),2007,19(8):614.