程 勤，陳來旺

高脂飼料誘發(fā)非酒精性脂肪肝實(shí)驗(yàn)研究

程 勤1，陳來旺2

目的 探討正常飲食和高脂肪飲食對小鼠體重、血糖、葡萄糖耐受、血脂、脂肪肝的影響。方法 雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為MD10%和MD45%脂肪含量飼料組，喂養(yǎng)3個(gè)月，檢測動(dòng)物體重、血糖、葡萄糖耐受、血脂，以及主要臟器重量及肝臟脂質(zhì)含量。結(jié)果 與正常組(MD10%脂肪含量)相比，高脂組(MD45%脂肪含量)動(dòng)物體重顯著增加，出現(xiàn)明顯的糖耐量異常和血脂水平升高，同時(shí)伴有肝臟脂質(zhì)含量增加。結(jié)論 高脂飲食對非酒精性脂肪肝有較強(qiáng)的誘導(dǎo)作用。

非酒精性脂肪肝;高脂飼料;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

代謝綜合征包括肥胖、脂肪肝、II型糖尿病，以及血脂障礙等代謝疾病已經(jīng)在世界范圍內(nèi)引起越來越多的關(guān)注。非酒精性脂肪肝是一種無過量飲酒史以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變性為主要特征的臨床病理綜合征。包括單純性脂肪肝以及由其演變的非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝纖維化、肝硬化等［1］。非酒精性脂肪肝(NAFLD)現(xiàn)在被認(rèn)為是慢性肝臟疾病中最常見病中的一種，在發(fā)達(dá)國家普通人群中的發(fā)病率大概是10%～24%［2］。在我國，隨著經(jīng)濟(jì)的快速增長和居民生活方式的改變，肥胖和糖尿病發(fā)病率也呈現(xiàn)快速上升的趨勢。最近幾年我國NAFLD發(fā)病率也急劇上升，嚴(yán)重危害人們的健康［3］。在人群中，NAFLD在正常人群和肥胖人群中的發(fā)病率分別是15%和80%［4］。雖然脂肪肝的發(fā)生與眾多的能量代謝紊亂有關(guān)，但是脂肪肝形成的確切分子機(jī)制還沒有完全弄清楚。本研究通過正常飲食和高脂飼料喂養(yǎng)小鼠后并對其指標(biāo)進(jìn)行檢測，旨在為有效飲食預(yù)防脂肪肝疾病提供思路。

1 材料與方法

1.1 材料 動(dòng)物:SPF級4周齡雄性C57BL/6J小鼠，體重20 ～22 g(購買于南京大學(xué)模式動(dòng)物中心);飼料:MD10%和MD45%高脂純化配方飼料(購買于江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司)。MD10%飼料:蛋白19.2%、碳水化合物67.3%、脂肪4.3%;每100g釋放熱量約為385.3千卡，其中蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂肪釋放的熱量各占20%、70%、10%。MD45%高脂飼料:蛋白24%、碳水化合物41%、脂肪24%;每100g釋放熱量約為473.5千卡，其中蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂肪釋放的熱量各占20%、35%、45%。

1.2 方法 (1)動(dòng)物分組與處理:30只小鼠鼠分為2組:①正常組(MD10%脂肪含量);②高脂飼料組(MD45%脂肪含量)。3個(gè)月后處死動(dòng)物。(2)檢測指標(biāo)及方法:①組織學(xué)研究:用4%多聚甲醛固定肝臟，進(jìn)行石蠟包埋，然后切取4-μm厚度的組織進(jìn)行蘇木精和伊紅染色(H＆E);脂滴的檢測采用油紅O染色，油紅O溶于65%的異丙醇，4-μm厚度的冰凍肝臟組織于多聚甲醛固定后以0.23%油紅O染色。②血糖、膽固醇、甘油三酯試劑盒由北京利德曼公司提供;血糖一次性試紙由貝克曼公司生產(chǎn)。③葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn):動(dòng)物禁食16 h后，給予1 g/kg體重腹腔注射葡萄糖，在0、15、30、60、90和120 min通過鼠尾采血法獲取全血，于強(qiáng)生血糖檢測儀(Lifescan，Inc.)上檢測血糖指標(biāo)。

2 結(jié)果

2.1 對體重的影響 與正常飲食喂養(yǎng)相比，高脂飲食喂養(yǎng)的小鼠體重明顯增加，從第4周開始，高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠體重顯著高于正常脂肪含量飼料(MD10%脂肪含量)，并持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的第12周。見圖1。

2.2 對甘油三脂含量影響 組織學(xué)研究表明高脂飲食會(huì)增加小鼠肝臟中甘油三酯的含量。油紅O染色(圖2－A)和H＆E染色(圖2－B)。實(shí)驗(yàn)表明，高脂飲食喂養(yǎng)小鼠3個(gè)月后小鼠肝臟中脂滴的數(shù)量明顯增加。并且小鼠表現(xiàn)出典型的脂肪肝癥狀。

2.3 對葡萄糖耐受性影響 不同脂肪含量的飼料對小鼠葡萄糖耐受性的影響。高脂飼料處理12周后，葡萄糖耐受性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高脂飼料均能顯著破壞葡萄糖耐受性。見圖3。

圖1 不同飼料對小鼠體重生長的影響，(*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001。)

圖2 肝臟組織學(xué)形態(tài)觀察，A油紅O染色(200x);B H＆E染色(100x)

圖3 高脂飼料喂養(yǎng)小鼠破壞了葡萄糖耐受性，(＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001。)

2.4 不同脂肪含量飼料對小鼠相關(guān)代謝指標(biāo)的影響 見表1。

表1 2組小鼠相關(guān)代謝指標(biāo)比較(±s)

表1 2組小鼠相關(guān)代謝指標(biāo)比較(±s)

注:與正常組比較，*P＜0.05。

組別肝重/體重(100×)肝膽固醇(mg/g肝重)肝甘油三酯(mg/g肝重)饑餓血糖(mmol/L)血漿膽固醇(mg/dl)甘油三酯(mmol/l)正常組 4.29±0.76 3.15±0.18 35.54±5.85 7.24±0.98128.94±20.95 21.97±2.78高脂組 6.00±0.56*15.67±1.52*75.26±7.28*9.52±0.72*163.57±22.14 56.14±5.32*

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，高脂飲食喂養(yǎng)小鼠饑餓后血糖有明顯升高，并且高脂飼料處理12周后能顯著誘導(dǎo)小鼠血總膽固醇水平明顯升高(P＜0.05);而對小鼠肝臟膽固醇水平?jīng)]有影響。但高脂飲食組小鼠血漿和肝臟中甘油三酯含量均明顯高于正常組。

3 討論

近年來隨著我國人民生活方式的改變和社會(huì)人口老年化，以肥胖、糖耐量異常、胰島素抵抗、高脂血癥和脂肪肝等為代表的代謝綜合征相關(guān)疾病的患病率急劇增加。為了進(jìn)一步的驗(yàn)證高脂飲食對誘發(fā)相關(guān)代謝綜合征的影響，我們?yōu)榇诉M(jìn)行了相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)。通過采用低脂飲食和高脂飲食喂養(yǎng)4周齡的C57BL/6J小鼠12周后，對小鼠的相關(guān)代謝指標(biāo)進(jìn)行檢測。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，高脂飲食確實(shí)能夠誘發(fā)代謝綜合征。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出高脂飼料喂養(yǎng)大鼠的體重增長速度高于正常飼料組，喂養(yǎng)的小鼠在4周后即出現(xiàn)體重明顯增加，并持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的第12周;另外長期進(jìn)食高脂飲食小鼠的饑餓后血糖與正常飲食組相比有明顯的升高。油紅O和H＆E染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)小鼠喂養(yǎng)高脂飲食后肝臟組織中脂肪滴的數(shù)量有明顯的增加，表現(xiàn)出較典型的脂肪肝癥狀。并且葡萄糖耐受性實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，高脂飲食喂養(yǎng)小鼠12周后將會(huì)破壞小鼠的葡萄糖耐受性。此外生化指標(biāo)分析檢測結(jié)果顯示進(jìn)食高脂飲食后小鼠的血脂和肝臟中甘油三酯的含量都有明顯的上升。

NAFLD與多種代謝綜合征密切相關(guān)，如肥胖、2型糖尿病、高血壓和血脂障礙等［5-7］，是2型糖尿病和心血管疾病一個(gè)非常重要的誘因［8-9］。至少 40%的糖尿病患者表現(xiàn)出NAFLD癥狀，然而目前沒有找到有效的治療方法［10］。因此，必須采取有效的措施來預(yù)防脂肪肝的發(fā)生，如人們可以從日常的生活飲食中通過合理的調(diào)整飲食搭配，降低高脂肪食物的攝入，從而降低肥胖病和脂肪肝疾病的發(fā)生。

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Effect of high fat diet on NAFLD of mice

CHENG Qin，CHEN Lai-wang.(Department of Blood Transfusion，Wuhu No.1 People＇s Hospital，Anhui 241001，China)

Objective To examine potential effect of normal chow/high-fat diet on body weight，blood glucose，and glucose tolerance，serum total cholesterol(TC)and triglycerides(TG)concentrations，fatty liver in mice.Methods Males C57BL /6 mice were randomly divided into two groups and fed with 10%fat content diet(MD10%fat)，and 45%fat content(MD 45%fat)for 12 weeks respectively.Body and organ weight，blood glucose and glucose tolerance，and serum TC and TG concentrations，liver TC and TG contents were measured.Results Compared with the controls(MD10%fat)，the animals fed with high-fat diet(MD 45%fat)showed a significant increase in body weight，blood glucose levels，glucose intolerance，serum TC and TG concentrations，hepatic TC and TG contents.Conclusion High-fat diet(MD 45%fat)can produce most phenotypes of nonalcoholic fatty liver disease(NAFLD).

NAFLD;High-fat diet;Animal experimentation

R575.5

A

1008-7044(2014)06-0521-03

2014-04-30)

安徽省蕪湖市第一人民醫(yī)院1.輸血科;2.檢驗(yàn)科，241001

程 勤(1970－)，女，安徽蕪湖市人，主管檢驗(yàn)師，大學(xué)。