馮小蘭，黃喜健

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院病理科1、泌尿外科2，廣西南寧530001)

·臨床病理·

34βE12、P63、CK5/6、α-SMA在前列腺基底細(xì)胞中的表達(dá)及意義

馮小蘭1，黃喜健2

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院病理科1、泌尿外科2，廣西南寧530001)

目的 探討高分子量細(xì)胞角蛋白34βE12、肌上皮標(biāo)記物p63、細(xì)胞角蛋白CK5/6、平滑肌肌動蛋白α-SMA在前列腺基底細(xì)胞中的表達(dá)及意義。方法采用免疫組織化學(xué)SP法檢測，觀察34βE12、p63、CK5/6、α-SMA在前列腺增生(PH)、低級別上皮內(nèi)瘤變(LGPIN)、高級別上皮內(nèi)瘤變(HGPIN)、前列腺癌(Pca)中的表達(dá)。結(jié)果30例PH組標(biāo)本34βE12、p63、CK5/6大多陽性表達(dá)，10例LGPIN組多(++)表達(dá)，15例HGPIN組多(+)表達(dá)，Pca組大多陰性表達(dá)。Pca組與PH組、LGPIN組、HGPIN組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。α-SMA基底細(xì)胞少量表達(dá)，Pca組與PH組、LGPIN組、HGPIN組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論前列腺基底細(xì)胞表達(dá)34βE12、p65、CK5/6，p65優(yōu)于34βE12，α-SMA多陰性表達(dá)。在前列腺標(biāo)本中聯(lián)合檢測34βE12、p65、CK5/6有助于對前列腺癌及其他不同病變的鑒別診斷。

34βE12蛋白；p65蛋白；CK5/6蛋白；α-SMA蛋白；前列腺增生；前列腺上皮皮病變；前列腺癌

前列腺癌是當(dāng)前威脅全球老年男性健康的主要惡性腫瘤，歐美發(fā)達(dá)國家最常見，我國近幾年來發(fā)病率有所增加，但前列腺良惡性病變的鑒別是病理診斷中的難點之一。當(dāng)前列腺高分化癌與良性增生的鑒別診斷出現(xiàn)困難時，常用的解決方法是根據(jù)前列腺基底細(xì)胞的存在與否決定其性質(zhì)。本研究采用免疫組化方法，檢測高分子量細(xì)胞角蛋白34βE12、肌上皮標(biāo)記物p65、細(xì)胞角蛋白CK5/6、平滑肌肌動蛋白α-SMA在前列腺增生、上皮內(nèi)瘤變及癌組織中的表達(dá)情況，探討其在前列腺良惡性病變鑒別診斷中的價值。

1 材料與方法

1.1 材料選取2010-2013年廣西民族醫(yī)院收治并確診的30例良性前列腺增生癥(PH)[在PH病例中找到前列腺上皮內(nèi)腫瘤形成，5例并低級別上皮內(nèi)瘤變(LGPIN)，2例并高級別上皮內(nèi)瘤變(HGPIN)]和30例前列腺癌(Pca)(癌旁找到5例LGPIN，13例HGPIN)。抗34βE12、p65、CK5/6、α-SMA單克隆抗體及試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)公司產(chǎn)品。標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋。每例前列腺病變的病理診斷均經(jīng)過2名高年資病理醫(yī)生的復(fù)查，診斷準(zhǔn)確無誤。

1.2 免疫組織化學(xué)方法采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶(SP)法進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代一抗作為陰性對照，已知陽性的前列腺組織切片作為陽性對照，操作步驟按SP試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)鏡下觀察切片陽性信號呈棕黃色顆粒狀，p65陽性為胞核著色，34βE12、CK5/6、α-SMA陽性為胞質(zhì)著色,分級標(biāo)準(zhǔn)：基底細(xì)胞層無著色細(xì)胞(-)；基底細(xì)胞層少數(shù)細(xì)胞散在著色(+)；基底細(xì)胞層著色有間斷(++)；基底細(xì)胞層著色連續(xù)、明顯(+++)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析。雙向有序等級資料的關(guān)聯(lián)性分析采用行X列表法。假設(shè)檢驗的顯著性水準(zhǔn)取α=0.05。

2 結(jié)果

2.134 βE12表達(dá)34βE12陽性顆粒定位于前列腺基底細(xì)胞胞質(zhì)。PH組30例腺泡基底細(xì)胞多陽性表達(dá)，其中3例陰性(-)表達(dá)，4例弱陽(+)表達(dá)，余均為(++)～(+++)，陽性率為90%(27/30)；LGPIN組10例多為(++)，其中1例弱陽(+)表達(dá)，1例陰性表達(dá)，陽性率為90%(9/10)；HGPIN組15例多為弱陽(+)，其中2例陽性(++)表達(dá)，3例陰性(-)表達(dá)，陽性率為80% (12/15)；Pca組30例多陰性(-)表達(dá)，其中2例弱陽(+)表達(dá)，陽性率為6.67%(2/30)。Pca組與PH組、LGPIN組、HGPIN組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 p65 表達(dá)陽性顆粒定位于基底細(xì)胞胞核(圖1)，著色明顯，背景清晰。PH組30例腺泡基底細(xì)胞多陽性表達(dá)，其中1例陰性(-)表達(dá)，3例弱陽(+)表達(dá)，余均為(++)～(+++)，陽性率為96.7%(29/30)；LGPIN組10例多為(++)，其中2例弱陽(+)表達(dá)，1例陰性表達(dá)，陽性率為90%(9/10)；HGPIN組15例多為弱陽(+)，其中3例陽性(++)表達(dá)，2例陰性(-)表達(dá)，陽性率為86.7% (13/15)；Pca組30例多陰性(-)表達(dá)，其中2例弱陽(+)表達(dá)，陽性率為6.67%(2/30)。Pca組與PH組、LGPIN組、HGPIN組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

2.3 CK5/6表達(dá)CK5/6陽性顆粒定位于前列腺基底細(xì)胞胞質(zhì)。PH組30例腺泡基底細(xì)胞多陽性表達(dá)，其中4例弱陽(+)表達(dá)，5例陰性表達(dá)，余均為++～+++，陽性率為83.3%(25/30)；LGPIN組10例多弱陽(+)表達(dá)，2例陰性表達(dá)，陽性率為80%(8/10)；HGPIN組15例多為弱陽(+)，5例陰性(-)表達(dá)，陽性率66.7% (10/15)；Pca組30例多陰性(-)表達(dá)，其中3例弱陽(+)表達(dá)，陽性率為10%(3/30)。Pca組與PH組、LGPIN組、HGPIN組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

2.4 α-SMA表達(dá)α-SMA陽性顆粒定位于前列腺間質(zhì)平滑肌細(xì)胞胞質(zhì)，基底細(xì)胞陰性(圖2)或少量表達(dá)。PH組30例腺泡基底細(xì)胞4例弱陽(+)表達(dá)，陽性率為13.3%(4/30)；LGPIN組10例其中2例弱陽(+)表達(dá)，陽性率為20%(2/10)；HGPIN組15例其中1例弱陽性(+)表達(dá)，陽性率為6.67%(1/15)；Pca組30例多陰性(-)表達(dá)，1例弱陽(+)表達(dá)，陽性率為3.33% (1/30)。Pca組與PH組、LGPIN組、HGPIN組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

圖1 良性腺體p65(++)，癌腺體p65(-)(SP×400)

圖2 良性腺體α-SMA（-）（SP×400）

3 討論

在前列腺臨床病理檢查中，基底細(xì)胞的存在與否是鑒別前列腺良、惡性病變的最關(guān)鍵指標(biāo)，它的重要性甚至超過了肌上皮細(xì)胞消失對診斷乳腺導(dǎo)管癌的重要性。在乳腺良惡性病變診斷中34βE12、p65、CK5/6、α-SMA抗體的聯(lián)合使用提高了診斷的準(zhǔn)確性[1]。有作者認(rèn)為前列腺的底層細(xì)胞和乳腺或涎腺的相似，為肌上皮細(xì)胞[2]。本研究探討在前列腺良惡性病變中這四種抗體的表達(dá)情況及對鑒別診斷的價值。

人前列腺腺體主要由3種細(xì)胞構(gòu)成，即分泌細(xì)胞、基底細(xì)胞和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞?；准?xì)胞約占前列腺細(xì)胞總數(shù)的10%，不具有分泌功能，被認(rèn)為是前列腺的多潛能干細(xì)胞。光鏡下基底細(xì)胞圓形，細(xì)胞小，細(xì)胞核大而不規(guī)則，細(xì)胞質(zhì)少[3]。自從1995年Wojno等[4]通過免疫組織化學(xué)方法發(fā)現(xiàn)正?；蛄夹栽錾那傲邢傧倥菁皩?dǎo)管的基底細(xì)胞表達(dá)高相對分子質(zhì)量的角蛋白34βE12以來，34βE12廣泛應(yīng)用于臨床診斷。有些實驗證明，在少數(shù)前列腺癌中34βE12可以有明確的陽性表達(dá)[5]，而良性增生中也有假陰性的出現(xiàn)，有學(xué)者認(rèn)為原因可能是標(biāo)本在甲醛溶液中固定過久導(dǎo)致基底細(xì)胞著色不清[6]，因此，單獨采用34βE12標(biāo)記基底細(xì)胞有一定局限性。

p65是一種核蛋白，由位于染色體3q27-29的一種與p53(一種腫瘤抑制細(xì)胞)有同源性的基因編碼，具有皮膚、宮頸、乳腺及泌尿生殖道上皮細(xì)胞生長及發(fā)育的功能。p65的特定同型體可在前列腺假復(fù)層上皮細(xì)胞的基底細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞等中表達(dá)，而在前列腺分泌腺細(xì)胞和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中不表達(dá)[7]，被認(rèn)為是前列腺基底細(xì)胞的良好標(biāo)記物，但也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)其敏感性不如34βE12[8]。兩者在前列腺基底細(xì)胞中表達(dá)敏感性仍然為困擾診斷的一個問題。本研究結(jié)果顯示在PH組中，34βE12表達(dá)率為90%(27/30)，p65表達(dá)率為96.7%(29/30)，兩者相比p65更敏感，與部分報道的相似[9]。且與34βE12相比，p65的優(yōu)點是：(1)可標(biāo)記34βE12陰性的基底細(xì)胞；(2)不易產(chǎn)生類似于34βE12染色的不穩(wěn)定性(尤其是經(jīng)灼燒的TURP標(biāo)本)；(3)由于其染色結(jié)果可使細(xì)胞核呈強陽性，且背景低，因此陽性結(jié)果易于鑒別[10]。

在正常和良性增生的前列腺腺體和導(dǎo)管周圍34βE12及p65大部分表達(dá)(++)～(+++)，在LGPIN中大部分表達(dá)(++)，在HGPIN中大部分表達(dá)(+)，Pca大部分表達(dá)(-)。由此可見在前列腺PIN中基底細(xì)胞出現(xiàn)缺失，前列腺癌時基底細(xì)胞完全消失?；准?xì)胞的缺失狀況是鑒別良惡性病變的關(guān)鍵指標(biāo)。34βE12及p65分別標(biāo)記基底細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核，此兩種抗體聯(lián)合使用，或按一定稀釋度混合使用，對提示良性腺泡中基底細(xì)胞標(biāo)記的陽性率有幫助。

但是，本研究中PH組1例34βE12及p65均陰性表達(dá)，Pca組2例34βE12及p65均陽性表達(dá)，由于在少數(shù)良性腺體中基底細(xì)胞層可不連續(xù)或不明顯，因此對于一些小灶性的腺體其基底細(xì)胞層完全消失不能單獨作為確診惡性的指標(biāo)；相反，某些早期浸潤性前列腺癌，如伴有或不伴有前列腺高級別上皮內(nèi)瘤變的微浸潤性前列腺癌，可有殘留的基底細(xì)胞；前列腺腺癌可偶爾含有p65陽性的細(xì)胞，其中大多數(shù)是由于良性腺體的陷入或癌組織在有殘余基底細(xì)胞的導(dǎo)管內(nèi)擴(kuò)散造成的。因此病理診斷中要以HE切片為基礎(chǔ)，結(jié)合多方面免疫組化結(jié)果，只有在HE染色切片中見到腺泡增生有可疑惡性的細(xì)胞學(xué)和/或組織學(xué)特征時，基底細(xì)胞層的消失才可支持浸潤性前列腺癌的診斷[10]。

CK5/6是一種基底細(xì)胞的標(biāo)記物，在正常組織中鱗狀上皮和導(dǎo)管上皮的基底細(xì)胞以及部分鱗狀上皮生發(fā)層細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞和間皮細(xì)胞呈陽性表達(dá)[1]。本組資料中顯示，除了基底層細(xì)胞呈陽性外，腺腔內(nèi)部分細(xì)胞也呈陽性，在LGPIN、HGPIN、Pca中大部分呈弱陽性及陰性表達(dá)，說明在普通型增生和腫瘤增生性組織中CK5/6表達(dá)存在明顯差異。

平滑肌肌動蛋白(α-Smooth MuscleActin，α-SMA)為真核細(xì)胞的一種細(xì)胞骨架蛋白，在一般情況下，α-SMA常特異性地分布于間充質(zhì)來源的細(xì)胞，如平滑肌、肌上皮細(xì)胞、周細(xì)胞和基底細(xì)胞等。有報道電鏡觀察前列腺基底細(xì)胞體積小，細(xì)胞器較少，細(xì)胞間可見橋?；虬霕蛄＝Y(jié)構(gòu)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)未見到成熟束的肌絲，表明該細(xì)胞屬于基底細(xì)胞而不是肌上皮細(xì)胞[11]。本研究結(jié)果顯示α-SMA主要表達(dá)于前列腺間質(zhì)平滑肌細(xì)胞胞質(zhì)，基底細(xì)胞少量表達(dá)，前列腺癌間質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)高表達(dá)。

綜上所述，前列腺基底細(xì)胞表達(dá)34βE12、p65、CK5/6，p65優(yōu)于34βE12，且與乳腺不同的是α-SMA多陰性表達(dá)。我們在實際工作中首選p65，最好聯(lián)合運用34βE12、p65、CK5/6這三種抗體標(biāo)記基底細(xì)胞，同時一定要以光鏡下形態(tài)學(xué)的觀察為基礎(chǔ)，這樣才能明確診斷，為臨床提供可靠的診療依據(jù)。

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Expression and significance of 34βE12,p65,CK5/6 and α-SMA in prostatic basic cell.

FENG Xiao-lan1,HUANG Xi-jian2.Department of Pathology1,Department of Urology2,the Affiliated Minzu Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530001,Guangxi,CHINA

ObjectiveTo explore the expression and significance of high molecular weight cytokeratin(34β E12),myoepithelium marker(p65),cytokeratin(CK5/6)and smooth muscle actin(α-SMA)in the basic cells of prostate.MethodsImmunohistochemical SP method was performed to detect the expression of 34βE12,p65,CK5/6 and α-SMA in prostatic hyperplasia(PH),low-grade intraepithelial neoplasia(LGPIN),high-grade intraepithelial neoplasia(HGPIN)and prostate cancer(Pca).ResultsIn 30 PH samples,34βE12,p65 and CK5/6 were expressed(++)in 10 LGPIN samples,(+)in 15 HGPIN samples and negative in Pca samples.There were significant statistical differences between Pca group and PH,LGPIN and HGPIN groups.Little α-SMA was expressed in basal cells and there was no significant statistical difference between these groups(P＞0.05).Conclusion34βE12,p65 and CK5/6 were expressed in prostate basic cells and p65 was expressed more than 34βE12.α-SMA was negative in most of the prostatic basic cells.Joint detection of 34βE12,p65 and CK5/6 was helpful for the differential diagnosis of prostate cancer.

34βE12 protein;p65 protein;CK5/6 protein;α-SMA protein;Prostatic hyperplasia;Prostatic intraepithelial neoplasia;Prostate cancer

R697+.3

A

1003—6350(2014)21—3248—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.21.1274

2013-12-13)

馮小蘭。E-mail：fengxiaolan2010@163.com