符起亞，張黎，段莉，鄭旭，錢士勻，吳玲，巫翠萍，龐紅霞

(1.海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科，海南?？?70102；2.海南醫(yī)學(xué)院，海南?？?70100)

·論著·

慢性牙周炎患者治療前后患牙齦溝液中T細(xì)胞亞群表達(dá)水平的研究

符起亞1，張黎1，段莉1，鄭旭1，錢士勻1，吳玲2，巫翠萍1，龐紅霞1

(1.海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科，海南?？?70102；2.海南醫(yī)學(xué)院，海南?？?70100)

目的 探討慢性牙周炎患者治療前后齦溝液(GCF)中T細(xì)胞亞群中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的改變及其臨床意義。方法選取我院進(jìn)行治療的48例慢性牙周炎患者為治療組，全部常規(guī)治療，正常健康對(duì)照組32例，檢測(cè)治療組治療前、治療后6、12、24周的臨床指數(shù)，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)治療組治療前后及正常對(duì)照組GCF中CD3+、CD4+、CD8+的所占比例及計(jì)算CD4+/CD8+的值，并分析二者的相關(guān)性。結(jié)果慢性牙周炎通過常規(guī)治療后，牙周臨床指標(biāo)包括PD、CAL、PI和PLI均有明顯改善(P＜0.01或P＜0.05)；治療組GCF中CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+在治療前和治療后的6周、12周與對(duì)照組的相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；治療前水平與治療后6周、12周和24周比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；治療前后PD、PI和PLI與GCF中T細(xì)胞亞群的水平有明顯相關(guān)性(P＜0.01或P＜0.05)。結(jié)論T淋巴細(xì)胞亞群的變化與慢性牙周炎的炎癥狀態(tài)密切相關(guān)，可作為一項(xiàng)評(píng)估預(yù)后的指標(biāo)。

慢性牙周炎；齦溝液(GCF)；T細(xì)胞亞群；免疫功能

慢性牙周炎是影響牙周支持組織的慢性炎癥，主要表現(xiàn)為牙槽骨和牙周附著的逐步喪失。如果不能得到及時(shí)有效的治療，牙齒會(huì)逐步松動(dòng)，直至脫落。特定的微生物感染以及與之相關(guān)的炎癥免疫反應(yīng)被認(rèn)為是牙周破壞的主要原因[1]。臨床常用的牙周診斷方法有探診和放射影像，分別顯示附著喪失和牙槽骨吸收的程度，但通常只反映以往牙周破壞的累積結(jié)果。

準(zhǔn)確評(píng)估牙周組織炎癥的活動(dòng)性極具挑戰(zhàn)性。近年來，齦溝液(GCF)成分的分析及其與炎癥程度的關(guān)聯(lián)顯示了良好的前景。齦溝液是源于牙周結(jié)締組織的炎性滲出液，在局部組織受到炎癥刺激時(shí)進(jìn)入齦溝或牙周袋，其成分在很大程度上代表了菌斑微生物和炎癥免疫細(xì)胞相互作用的結(jié)果[2]。本研究通過觀察治療前后慢性牙周炎患者及正常健康人GCF中T細(xì)胞亞群的水平來探討將其作為一項(xiàng)判斷牙周炎癥程度及進(jìn)展指標(biāo)的潛力。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2009年1月至2011年12月期間來我院口腔科就診的48例慢性牙周病患者為研究對(duì)象，其中男性26例，女性22例。患者年齡22～67歲，平均(30.25±6.51)歲。所有患者均符合以下標(biāo)準(zhǔn)并簽署知情同意書。(1)無重大全身疾患，如糖尿病、高血壓、惡性腫瘤及免疫系統(tǒng)疾病，女性患者不處于妊娠或哺乳期；(2)過去3個(gè)月無服藥史，包括各類抗生素、糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑；(3)過去一年未接受牙周治療；(4)口腔內(nèi)的余留牙不少于20顆；(5)部分牙為中、重度牙周炎，多個(gè)位點(diǎn)的探診深度(PD)≥5 mm，牙槽骨吸收程度由X線片顯示；(6)患者的心電圖、心肺功能及肝腎功能檢查結(jié)果均正常。正常對(duì)照組32例，其中男性17例，女性15例，年齡20～69歲，平均(32.13±7.19)歲，從體檢者中募集。兩組的年齡和性別構(gòu)成差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法治療組患者在研究開始后常規(guī)口服利君沙、滅滴靈或牙周寧一周，并根據(jù)病情需要分別接受齦上潔治、齦下刮治及根面平整，調(diào)整咬合，牙周袋內(nèi)放置甲硝唑藥條等局部治療。對(duì)照組不接受以上治療。

1.3 臨床指標(biāo)從每個(gè)受試者口腔中隨機(jī)選取探診深度(PD)≥5 mm、牙齦指數(shù)(GI)為2或3的4個(gè)牙位，共計(jì)192個(gè)牙位。記錄對(duì)照組(A0)、治療組治療前(A1)、治療后6周(A2)、12周(A3)和24周(A4)的臨床指標(biāo)，即牙周探診深度(PD)、臨床附著喪失(CAL)、牙齦指數(shù)(GI)和菌斑指數(shù)(PLI)，檢查和記錄由長期從事牙周診療工作的醫(yī)師完成。

1.4 齦溝液的采集在采集齦溝液前，用探針去除采集部位的齦上菌斑，用棉球隔濕后輕輕擦干待測(cè)牙面，將標(biāo)準(zhǔn)濾紙條(Periopaper)插入牙周袋，直到有輕微阻力為止，30 s后取出。如濾紙條有血液污染則將其遺棄，擇另一時(shí)間取樣。將取出后的濾紙條立即用分析天平稱重，按比重為1換算齦溝液體積，隨即將濾紙條置入含有250 ml磷酸緩沖液的微量離心管，然后在-70℃低溫冰箱中保存待測(cè)[3]。

1.5 齦溝液標(biāo)本檢測(cè)齦溝液標(biāo)本中CD3+、CD4+、CD8+的水平以及CD4+/CD8+的比例采用流式細(xì)胞技術(shù)(雙色直標(biāo)免疫熒光)進(jìn)行測(cè)定。檢測(cè)試劑盒由武漢博士生物有限公司公司提供，檢測(cè)方法嚴(yán)格按照廠家提供的說明書進(jìn)行操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，治療前后各項(xiàng)牙周指標(biāo)的的比較分別采用t檢驗(yàn)，牙周T細(xì)胞亞群變化的比較采用χ2檢驗(yàn)，變量間的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。顯著性檢驗(yàn)水平分別設(shè)為0.05和0.01。

2 結(jié)果

2.1 治療前后各項(xiàng)牙周指標(biāo)的變化經(jīng)過常規(guī)治療后，治療組患者炎癥牙位的各項(xiàng)臨床指標(biāo)均得到明顯改善，治療后6周PD、CAL、GI、PLI與治療前比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，GI、PLI在12周時(shí)仍處于較低水平，與治療前比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，24周后略有回升；而治療后12周、24周PD、CAL與治療前比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 患者治療前后各項(xiàng)牙周指標(biāo)的比較(±s)

表1 患者治療前后各項(xiàng)牙周指標(biāo)的比較(±s)

注：與治療前比較：aP＜0.01，bP＜0.05。

2.2 GCF中T細(xì)胞亞群的變化治療組T細(xì)胞亞群中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+在治療前、治療后的6周、12周與對(duì)應(yīng)的正常對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；治療后的24周與對(duì)應(yīng)的正常對(duì)照組的比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；治療后的6周、12周、24周分別與治療前的水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表2。

表2 患者治療前后與正常對(duì)照組牙周T細(xì)胞亞群變化的比較(±s)

表2 患者治療前后與正常對(duì)照組牙周T細(xì)胞亞群變化的比較(±s)

注：與A0比較：aP＜0.01，均bP＜0.05，均cP＞0.05；A2、A3、A4與A1比較，均dP＜0.01。

2.3 相關(guān)性分析經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示，GCF中T細(xì)胞亞群水平在治療前后不同時(shí)間點(diǎn)的變化與PD、GI和PLI分別有明顯相關(guān)性，與CAL無相關(guān)性，見表3。

表3 GCF中T細(xì)胞亞群水平與牙周臨床指標(biāo)的相關(guān)性

3 討論

目前認(rèn)為牙周炎是由微生物引起的慢性感染性疾病，主要致病菌有牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis，Pg)、伴放線放線桿菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans，Aa)和福賽斯坦納菌(Tannerella forsythia，Tf)等[4]，確切的發(fā)病機(jī)制仍未明了。由于牙周袋內(nèi)存在大量毒力較強(qiáng)的細(xì)菌，牙周炎可作為病灶造成遠(yuǎn)隔器官的病變。近年來研究表明，牙周炎患者發(fā)生冠心病的危險(xiǎn)性較非牙周炎患者增加[5]。因此，建立反映慢性牙周炎癥的活動(dòng)狀態(tài)和疾病進(jìn)展的指標(biāo)以及制定有針對(duì)性的治療措施不僅有助于維護(hù)牙周健康，而且可以防止對(duì)全身健康造成不良影響。

病原體是否致病與機(jī)體的免疫狀態(tài)密切相關(guān)。CD3+是成熟T細(xì)胞的重要標(biāo)志，通常代表總T細(xì)胞；CD4+代表Th/Ti，CD8+代表Ts/Tc，CD4+/CD8+的比例關(guān)系則是機(jī)體免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的重要樞紐[6]。在生理狀態(tài)下，CD4+和CD8+相互協(xié)調(diào)、相互制約，處于動(dòng)態(tài)平衡。在牙周炎時(shí)，患者外周血CD4+升高，CD4+/CD8+比值上升。一旦被激活，CD4+可通過不同的分化途徑而發(fā)揮特定的生物學(xué)功能。一般來說，CD4+T細(xì)胞可根據(jù)其產(chǎn)生的不同細(xì)胞因子以及其相應(yīng)的生物學(xué)特性分為Th1和Th2細(xì)胞亞群，而每一T細(xì)胞亞群變化能反映機(jī)體的特定的免疫功能和狀態(tài)。

本研究的結(jié)果顯示，慢性牙周炎通過常規(guī)治療后，各項(xiàng)牙周指標(biāo)均有明顯改善(P＜0.01，P＜0.05)，與王利軍[1]、龔斌等[2]的觀察一致。治療組GCF中T細(xì)胞亞群分別與正常對(duì)照組的比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而治療后24周的指標(biāo)與正常對(duì)照組指標(biāo)相比較，則不再具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。此外，治療前與治療后T細(xì)胞亞群水平的差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。同時(shí)，T細(xì)胞亞群水平與臨床炎癥指標(biāo)，如PD和PI，以及致病因素指標(biāo)，如PLI，都顯示出了良好的相關(guān)性。CAL是牙周組織破壞后的狀態(tài)，其變化比較緩慢，不能有效地反映現(xiàn)有的炎癥活動(dòng)性。由此可見，GCF中T細(xì)胞亞群水平有可能作為反映慢性牙周組織炎癥狀態(tài)及預(yù)后的一項(xiàng)指標(biāo)。

[1]王利軍.微波對(duì)慢性牙周炎患者齦溝液中多項(xiàng)因子水平影響研究[J].河南外科學(xué)雜志,2011,17(2):7-9.

[2]龔斌,徐靜,舒戚,等.正常人、牙齦炎和牙周炎患者齦溝液內(nèi)一氧化氮含量的檢測(cè)[J].口腔醫(yī)學(xué)研究,2011,27(5):431-433.

[3]于新波,鐘德鈺,許曉燕,等.慢性牙周炎患者牙周治療前后齦溝液中白介素-10水平的變化[J].口腔醫(yī)學(xué),2006,26(5):373-375.

[4]Rylev M,Kilian M.Prevalence and distribution of principal periodontal pathogens worldwide[J].J Clin Periodontol,2008,35(8Suppl): 346-361.

[5]Humphrey LL,Fu R,Buckley DI,et al.Periodontal disease and coronary heart disease incidence::a systematic review and meta-analysis[J].J Gen Intern Med,2008,23(12):2079-2086.

[6]崔玉寶,李朝品,王健.粉塵螨浸液免疫治療螨性哮喘患者的免疫功能觀察[J].中國寄生蟲病防治雜志,2003,16(5):305-307.

Levels of T Cell subsets in gingival crevicular fluid in chronic periodontitis patients before and after treatment.

FU Qi-ya1,ZHANG Li1,DUAN Li1,ZHENG Xu1,QIAN Shi-yun1,WU Ling2,WU Cui-ping1,PANG Hong-xia1. 1.Department of Stomatology,the Affiliated Hospital of Hainan Medical University,Haikou 570102,Hainan,CHINA; 2.Hainan Medical University,Haikou 570100,Hainan,CHINA

ObjectiveTo investigate the changes in levels of T cell subsets CD3+,CD4+,CD8+and CD4+/CD8+in gingival crevicular fluid(GCF)in chronic periodontitis patients before and after treatment and their clinical significance.MethodsThe treatment group included 48 patients with chronic periodontitis who were given conventional periodontal treatment,while the control group enrolled 32 periodontally healthy individuals.Clinical parameters were collected at baseline and 6,12 and 24 weeks after treatment,along with GCF CD3+,CD4+,CD8+levels and CD4+/CD8+ratios,which was measured using flow cytometry.The correlation between clinical parameters and T cell subset levels was analyzed.ResultsSignificant improvement of clinical parameters in chronic periodontitis patients was observed following conventional treatment(P＜0.01 or P＜0.05).There were statistical differences between the treatment andcontrol groups in CD3+,CD4+,CD8+and CD4+/CD8+levels at baseline,and 6 and 12 weeks after treatment(P＜0.01). There were statistical differences between baseline levels and levels at 6,12 and 24 weeks after treatment(P＜0.01). The correlation between clinical parameters,including PD,PI and PLI,and GCF T cell subset levels before and after treatment,was statistically significant(P＜0.05 or P＜0.01).ConclusionGCF T cell subset levels are closely associated with the clinical inflammatory status of chronic periodontitis and may be used as markers for evaluation of prognosis.

Chronic periodontitis;Gingival crevicular fluid;T cell subsets;Immune function

R781.4+2

A

1003—6350（2014）21—3138—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.21.1232

2014-04-21)

海南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：309067)

符起亞。E-mail：fuqiyakq@qq.com