周躍塔，曾 澤，張 斌，湯 承

（西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川成都 610041）

牦牛嗜皮菌病（Dermatophilosis）是由剛果嗜皮菌（Dermatophiluscongolensis）引起的一種呈急性或慢性感染的疾病，以淺表滲出性、膿皰性皮炎，局限性痂塊性和脫屑性皮疹為主要臨床特征，為各種動物和人類共患的皮膚性傳染病［1-2］。該病屬于皮膚接觸性傳染病，通過接觸或吸血昆蟲傳播，主要感染牛、綿羊和馬，也感染山羊、許多野生哺乳動物以及蜥蜴和海龜，偶爾也感染人、犬、貓和豬［3-4］。在英國、澳大利亞、阿根廷、加拿大、美國、印度等許多國家均有嗜皮菌病的報道。國內(nèi)甘肅省、新疆、江蘇省等地也均有報道。陶金陵等［5］、效宏儒等［6］分別從綿羊、牦犢牛分離鑒定出剛果嗜皮菌。韓文星［3］建立了動物嗜皮菌病的PCR診斷方法。本研究從四川省紅原縣發(fā)病牦牛被毛根部分離獲得剛果嗜皮菌，確診發(fā)病牦牛為剛果嗜皮菌感染。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料 采自四川省紅原縣發(fā)病牦牛體表結(jié)痂處形成的毛團(tuán)，共6個樣本。

1.1.2 培養(yǎng)基及試劑 胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA），青島海博試劑有限公司產(chǎn)品；TaqDNA聚合酶、dNTP、DNA Marker DL 2 000、Cycle-pure kit試劑盒，寶生物工程（大連）有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 核酸的提取 剪取被毛根部并將其剪碎，根據(jù)普通革蘭陽性菌DNA提取方法提取DNA，提取的DNA放置于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 PCR檢測 根據(jù)已建立好的剛果嗜皮菌的PCR檢測方法［3］，對提取的DNA進(jìn)行檢測，引物由寶生物工程（大連）有限公司合成。分別對6個樣的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用20g／L瓊脂糖凝膠電泳檢測，觀察結(jié)果。用PCR純化試劑盒，寶生物工程（大連）有限公司產(chǎn)品；對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化，純化產(chǎn)物送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測序。

2 結(jié)果

2.1 發(fā)病情況和臨床癥狀

四川省紅原縣一批牦牛發(fā)生以滲出性和膿包型皮炎為特征的疾病，各個年齡段的牦牛均有發(fā)生，發(fā)病率高達(dá)30%以上。發(fā)病牦牛體溫，脈搏，呼吸正常，皮膚粗糙且有的會出現(xiàn)面包樣皮屑，皮膚表面可見黑褐色的黃豆大小的結(jié)節(jié)，表面凹凸不平，體型消瘦，被毛逆行、稀短，體表結(jié)痂常形成毛團(tuán)。

2.2 PCR檢測

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用20g／L瓊脂糖凝膠電泳檢測，電泳結(jié)果顯示擴(kuò)增片段約為600bp，與預(yù)期的606 bp相一致（圖1）。用PCR純化試劑盒，對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化，純化產(chǎn)物送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測序，測序結(jié)果在NCBI中Blast比對分析發(fā)現(xiàn)，與GenBank中已收錄的剛果嗜皮菌相應(yīng)的基因序列同源性達(dá)100%，進(jìn)一步確定6個樣均為嗜皮菌。由此我們可以確診發(fā)病牦牛是由剛果嗜皮菌感染引起的。

圖1 剛果嗜皮菌PCR鑒定結(jié)果Fig.1 The PCR Detection of Dermatophilus congolensis

3 討論

嗜皮菌病是由剛果嗜皮菌致發(fā)的一種人獸共患的皮膚傳染病，在由單一微生物引起的動物疫病中，沒有幾種象剛果嗜皮菌病那樣致發(fā)各種動物發(fā)生如此驚人的臨床病象［7-8］。不僅對所有年齡的牛、羊、馬屬動物及許多野生動物有不同的臨床表現(xiàn)，也有自然感染的報道，而且剛果嗜皮菌無宿主特異性。

本研究從四川省紅原縣發(fā)病牦牛的毛團(tuán)根部中分離獲得致病菌，根據(jù)臨床癥狀、PCR檢測和序列分析結(jié)果確診發(fā)病牦牛為剛果嗜皮菌感染。剛果嗜皮菌屬真菌，革蘭染色陽性，有大量的孢子和菌絲［9］，一般多發(fā)生于多雨季節(jié)或潮濕多水的地區(qū)，因此，可以將畜群由潮濕草場轉(zhuǎn)至干燥地區(qū)，同時應(yīng)防止畜群受到雨淋以預(yù)防嗜皮菌病的發(fā)生。對于患病動物應(yīng)從畜群中隔離出來，并對圈舍和畜體嚴(yán)格消毒，并在畜群中應(yīng)用滅蚊蠅粉噴霧以驅(qū)避蚊蠅等昆蟲，切斷本病的傳染途徑，防止更多的動物感染嗜皮菌［10-12］。另外，剛果嗜皮菌是一種人獸共患病，在處理發(fā)病牦牛和清理被污染環(huán)境時應(yīng)加強(qiáng)個人防護(hù)。

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