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        牦牛嗜皮菌病的診斷

        2014-06-18 11:27:30周躍塔
        動物醫(yī)學(xué)進展 2014年10期
        關(guān)鍵詞:紅原縣畜群剛果

        周躍塔,曾 澤,張 斌,湯 承

        (西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,四川成都 610041)

        牦牛嗜皮菌病(Dermatophilosis)是由剛果嗜皮菌(Dermatophiluscongolensis)引起的一種呈急性或慢性感染的疾病,以淺表滲出性、膿皰性皮炎,局限性痂塊性和脫屑性皮疹為主要臨床特征,為各種動物和人類共患的皮膚性傳染?。?-2]。該病屬于皮膚接觸性傳染病,通過接觸或吸血昆蟲傳播,主要感染牛、綿羊和馬,也感染山羊、許多野生哺乳動物以及蜥蜴和海龜,偶爾也感染人、犬、貓和豬[3-4]。在英國、澳大利亞、阿根廷、加拿大、美國、印度等許多國家均有嗜皮菌病的報道。國內(nèi)甘肅省、新疆、江蘇省等地也均有報道。陶金陵等[5]、效宏儒等[6]分別從綿羊、牦犢牛分離鑒定出剛果嗜皮菌。韓文星[3]建立了動物嗜皮菌病的PCR診斷方法。本研究從四川省紅原縣發(fā)病牦牛被毛根部分離獲得剛果嗜皮菌,確診發(fā)病牦牛為剛果嗜皮菌感染。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 病料 采自四川省紅原縣發(fā)病牦牛體表結(jié)痂處形成的毛團,共6個樣本。

        1.1.2 培養(yǎng)基及試劑 胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA),青島海博試劑有限公司產(chǎn)品;TaqDNA聚合酶、dNTP、DNA Marker DL 2 000、Cycle-pure kit試劑盒,寶生物工程(大連)有限公司產(chǎn)品。

        1.2 方法

        1.2.1 核酸的提取 剪取被毛根部并將其剪碎,根據(jù)普通革蘭陽性菌DNA提取方法提取DNA,提取的DNA放置于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

        1.2.2 PCR檢測 根據(jù)已建立好的剛果嗜皮菌的PCR檢測方法[3],對提取的DNA進行檢測,引物由寶生物工程(大連)有限公司合成。分別對6個樣的DNA進行PCR擴增,PCR擴增產(chǎn)物用20g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測,觀察結(jié)果。用PCR純化試劑盒,寶生物工程(大連)有限公司產(chǎn)品;對PCR擴增產(chǎn)物進行純化,純化產(chǎn)物送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測序。

        2 結(jié)果

        2.1 發(fā)病情況和臨床癥狀

        四川省紅原縣一批牦牛發(fā)生以滲出性和膿包型皮炎為特征的疾病,各個年齡段的牦牛均有發(fā)生,發(fā)病率高達30%以上。發(fā)病牦牛體溫,脈搏,呼吸正常,皮膚粗糙且有的會出現(xiàn)面包樣皮屑,皮膚表面可見黑褐色的黃豆大小的結(jié)節(jié),表面凹凸不平,體型消瘦,被毛逆行、稀短,體表結(jié)痂常形成毛團。

        2.2 PCR檢測

        PCR擴增產(chǎn)物用20g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測,電泳結(jié)果顯示擴增片段約為600bp,與預(yù)期的606 bp相一致(圖1)。用PCR純化試劑盒,對PCR擴增產(chǎn)物進行純化,純化產(chǎn)物送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測序,測序結(jié)果在NCBI中Blast比對分析發(fā)現(xiàn),與GenBank中已收錄的剛果嗜皮菌相應(yīng)的基因序列同源性達100%,進一步確定6個樣均為嗜皮菌。由此我們可以確診發(fā)病牦牛是由剛果嗜皮菌感染引起的。

        圖1 剛果嗜皮菌PCR鑒定結(jié)果Fig.1 The PCR Detection of Dermatophilus congolensis

        3 討論

        嗜皮菌病是由剛果嗜皮菌致發(fā)的一種人獸共患的皮膚傳染病,在由單一微生物引起的動物疫病中,沒有幾種象剛果嗜皮菌病那樣致發(fā)各種動物發(fā)生如此驚人的臨床病象[7-8]。不僅對所有年齡的牛、羊、馬屬動物及許多野生動物有不同的臨床表現(xiàn),也有自然感染的報道,而且剛果嗜皮菌無宿主特異性。

        本研究從四川省紅原縣發(fā)病牦牛的毛團根部中分離獲得致病菌,根據(jù)臨床癥狀、PCR檢測和序列分析結(jié)果確診發(fā)病牦牛為剛果嗜皮菌感染。剛果嗜皮菌屬真菌,革蘭染色陽性,有大量的孢子和菌絲[9],一般多發(fā)生于多雨季節(jié)或潮濕多水的地區(qū),因此,可以將畜群由潮濕草場轉(zhuǎn)至干燥地區(qū),同時應(yīng)防止畜群受到雨淋以預(yù)防嗜皮菌病的發(fā)生。對于患病動物應(yīng)從畜群中隔離出來,并對圈舍和畜體嚴格消毒,并在畜群中應(yīng)用滅蚊蠅粉噴霧以驅(qū)避蚊蠅等昆蟲,切斷本病的傳染途徑,防止更多的動物感染嗜皮菌[10-12]。另外,剛果嗜皮菌是一種人獸共患病,在處理發(fā)病牦牛和清理被污染環(huán)境時應(yīng)加強個人防護。

        [1]Pospisil L,Skalka B,Bucek J,et al.The first isolation ofDermatophiluscongolensis van saceg hem 1913in Czechoslovakia[J].Cesk Epidemiol Mikrobiol Imunol,1992,41(5):258-267.

        [2]Bull L B.Dermatomycosis of the sheep (lumpy or matted wool)due toActinomycesdermatonomus(n.sp.)[J].Australian J Biol Med Sci,1929,6:301-314.

        [3]韓文星,陳 玉,王靜梅,等.綿羊嗜皮菌PCR診斷方法的建立[J].中國獸醫(yī)學(xué)報,2009,29(1):49.

        [4]丁國嬋,何傳雨,王靜梅,等.盤羊剛果嗜皮菌的分離與鑒定[J].中國畜牧獸醫(yī),2011,38(4):191-193.

        [5]陶金陵,陳明輝,張海濤,等.綿羊剛果嗜皮菌病的診斷[J].中國獸醫(yī)雜志,2004,40(6):50.

        [6]效宏儒.牦犢牛疑似剛果嗜皮菌?。跩].中國獸醫(yī)雜志,1991,17(9):39.

        [7]Haalstra R T.Isolation ofDermatophiluscongolensisfrom skin lesions in the diagnosis of streptothricosis[J].Vet Rec,1965,77(28):824-825.

        [8]Makinde A A,Gyles C L.A simple and efficient method for releasing DNA fromDermatophiluscongolensis[J].J Microbiol Methods,1998,33:197-202.

        [9]剡根強,張秀萍,王靜梅,等.綿羊剛果嗜皮菌的分離鑒定及某些生物學(xué)特性研究[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報,2007,29(5):332-335.

        [10]蘆曉立,顏新敏,張 強,等.牛疙瘩皮膚病概述[J].動物醫(yī)學(xué)進展,2009,30(11):118-121.

        [11]張紅見,曹紅軍,趙 靜,等.青海省部分地區(qū)犬與牦牛小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的分布及藥敏試驗[J].動物醫(yī)學(xué)進展,2013,34(12):207-212.

        [12]周雪梅,李應(yīng)國,聶 奎,等.牛結(jié)節(jié)性皮膚病及其病原檢測方法研究進展[J].動物醫(yī)學(xué)進展,2011,32(10):99-102.

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