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        銀川地區(qū)規(guī)?;?chǎng)奶牛衣原體病與布魯菌病的血清學(xué)調(diào)查

        2014-06-17 02:38:54李永琴趙世媛高菊梅劉溪源李曉娜許立華
        關(guān)鍵詞:布魯菌牛場(chǎng)衣原體

        李永琴,趙世媛,高菊梅,黃 龍,劉溪源,李曉娜,許立華

        (寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院,寧夏銀川750021)

        衣原體為專性細(xì)胞內(nèi)寄生菌,其廣泛存在于世界各地,可以引起動(dòng)物和人的多種疾病,特別是鸚鵡熱嗜性衣原體和流產(chǎn)嗜性衣原體能夠使禽類和多種動(dòng)物感染,引起一種地方流行性的接觸性人畜共患傳染病[1-2]。妊娠母牛感染衣原體后在臨床上表現(xiàn)為流產(chǎn)、早產(chǎn)、死產(chǎn)、產(chǎn)出弱犢、胎衣不下等繁殖障礙癥狀,有的甚至發(fā)生子宮內(nèi)膜炎、乳房炎、輸卵管炎及產(chǎn)奶量下降。新生犢牛表現(xiàn)出腸炎、多關(guān)節(jié)炎、支氣管肺 炎、腹瀉等癥狀[3-4]。1949 年Stamp 和Nisbeth首次在蘇格蘭報(bào)道了該病的發(fā)生[5],隨后我國(guó)于20世紀(jì)70年代從羊身上分離到了衣原體,之后有關(guān)衣原體病的報(bào)道不在少數(shù)。周繼章等[6]2007年統(tǒng)計(jì)有11個(gè)省(市)報(bào)道有牛衣原體病的流行,隨后青海[7-8]、寧夏[9]、貴州[10]等?。▍^(qū))也有血清學(xué)調(diào)查報(bào)道,這些從一個(gè)側(cè)面反映了動(dòng)物衣原體病的的流行在不斷的上升。牛衣原體病給奶牛場(chǎng)造成的損失不僅僅是胎兒夭折,更嚴(yán)重的是產(chǎn)奶量與正常分娩牛相比,大幅度減少,同時(shí)造成飼料、人力巨大浪費(fèi)和巨額醫(yī)藥費(fèi)開支。對(duì)養(yǎng)殖業(yè)尤其是對(duì)奶牛業(yè)造成重大危害。

        布魯菌病是由布魯菌引起的人獸共患慢性細(xì)菌性傳染病。布魯菌病在全世界范圍內(nèi)廣泛分布。據(jù)世界衛(wèi)生組織調(diào)查,在全世界200 多個(gè)國(guó)家中,有170多個(gè)國(guó)家和地區(qū)發(fā)現(xiàn)人、畜布魯菌病的存在和流行。全球有布魯菌病患者近100萬(wàn)例,而且每年以新發(fā)病例1萬(wàn)~2萬(wàn)例的速度增加[11]。在我國(guó),布魯菌病是國(guó)家規(guī)定的二類法定傳染病,布魯菌病的流行情況亦不容樂(lè)觀。據(jù)報(bào)道,截止2010年全國(guó)29個(gè)?。▍^(qū)、市)發(fā)生畜間布魯菌病,牛、羊、豬感染達(dá)百萬(wàn)頭之多,人間布魯菌病2010年全年新增病例3.7萬(wàn)例[12]。

        布魯菌可通過(guò)體表皮膚黏膜、消化道、呼吸道,也可由吸血蚊蟲叮咬而侵入機(jī)體[13]。主要危害生殖器官,在家畜中,牛、羊、豬最常發(fā)生,還可傳染給人和其他家畜。其特征是生殖器官和胎膜發(fā)炎,引起流產(chǎn)、不育和各種組織的局部炎癥等特征癥狀[14]。我國(guó)每年因該病造成的經(jīng)濟(jì)損失也達(dá)數(shù)億元。該病危害大、流行廣,不僅影響奶牛業(yè)的健康發(fā)展,也嚴(yán)重威脅人類健康,是目前世界上嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一,并被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫?。?5]。

        近期銀川一些規(guī)模化奶牛場(chǎng)部分奶牛出現(xiàn)疑似衣原體病、布魯菌病的癥狀,為了確診其病因,了解近期銀川地區(qū)衣原體病及布魯菌病的流行情況,制定牛群的防控方案。筆者及課題組成員對(duì)牛群進(jìn)行衣原體與布魯菌病的血清學(xué)檢測(cè)?,F(xiàn)將檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行報(bào)告。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 待檢血清 自銀川地區(qū)A、B、C、D、E、F 6個(gè)規(guī)?;膛pB(yǎng)殖場(chǎng),隨機(jī)抽取了244份血樣,無(wú)菌分離血清,4 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.1.2 試劑 衣原體IHA 稀釋液,批號(hào)130905;衣原體IHA 標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清,批號(hào):1301115;衣原體IHA 標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清,批號(hào):1301115。衣原體IHA抗原,批號(hào):130524。以上試劑均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所研制。布魯菌平板凝集抗原及試管凝集抗原,易邦公司產(chǎn)品。

        1.1.3 試驗(yàn)器械 96 孔V 型反應(yīng)板、5μL~100μL移液器、玻璃板、微量振蕩器、恒溫箱、冰箱。

        1.2 方法

        1.2.1 衣原體間接血凝(IHA)試驗(yàn) ①鋪板:用移液器在96孔110°V 型反應(yīng)板上每孔加衣原體IHA稀釋液75μL;②稀釋血清:用移液器吸取25μL 待檢血清加入第一孔,然后以4倍遞增稀釋,從第一孔稀釋到第三孔,到第三孔棄去25μL,保持孔內(nèi)液體量為75μL。同一板上同時(shí)設(shè)陽(yáng)性、陰性和空白對(duì)照各2組(稀釋方法同上);③加入抗原:每孔加入稀釋好的抗原25μL,置于微量振蕩器上振蕩2 min,之后蓋上玻璃板,置于37 ℃恒溫箱中作用2h。

        1.2.2 衣原體間接血凝(IHA)試驗(yàn)結(jié)果判定 ①判定標(biāo)準(zhǔn):“++++”紅細(xì)胞全部凝集,形成一層均勻的膜,布滿整個(gè)孔底;“+++”紅細(xì)胞在孔底形成一層薄膜,面積比前者稍小;“++”紅細(xì)胞在孔底形成薄層凝集,邊緣松散或呈鋸齒狀;“+”紅細(xì)胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集,孔底有小圓點(diǎn);“±”紅細(xì)胞沉于孔底,但周圍不光滑或中心有空斑;“-”紅細(xì)胞完全沉積于底,呈光滑的圓點(diǎn);“++”以上的凝集判為陽(yáng)性凝集,②對(duì)照試驗(yàn)出現(xiàn)如下結(jié)果試驗(yàn)方可成立,否則需要重試,陽(yáng)性血清+抗原呈“++++”;陰性血清+抗原呈“-”;抗原+生理鹽水呈“-”,③被檢樣品判定標(biāo)準(zhǔn):哺乳動(dòng)物血清效價(jià)≥1∶64(++)者判為陽(yáng)性;效價(jià)≤1∶16(++)者判為陰性;介于二者之間判為可疑。

        1.2.3 布魯菌病虎紅平板凝集試驗(yàn) ①檢測(cè)方法:按照農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物布魯菌病診斷技術(shù)》中規(guī)定的技術(shù)要求進(jìn)行操作,血清以布魯菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT)初篩,吸取20μL滴于潔凈玻璃板上,加入20μL虎紅平板凝集抗原,混勻后4min,陽(yáng)性或疑似陽(yáng)性的樣品用布魯菌病試管凝集試驗(yàn)(SPT)方法進(jìn)行確認(rèn);②判斷標(biāo)準(zhǔn) 以出現(xiàn)50%凝集(++)的血清最大稀釋度作為該被檢血清的凝集價(jià),當(dāng)凝集價(jià)1∶100以上時(shí)判為陽(yáng)性,1∶50~1∶100之間判為可疑,1∶50以下判為陰性。

        2 結(jié)果

        2.1 衣原體間接血凝(IHA)試驗(yàn)結(jié)果

        對(duì)銀川地區(qū)6個(gè)規(guī)模化牛場(chǎng)244份血清樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,檢測(cè)的244份血清中,陽(yáng)性總檢出率為25%,牛群最高檢出率為38.3%,最低為0(表1)。

        表1 衣原體間接血凝(IHA)試驗(yàn)結(jié)果Table 1 The result of Chlamydia indirect hemagglutination test

        2.2 布魯菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果

        對(duì)銀川地區(qū)6個(gè)規(guī)模化牛場(chǎng)244份血清樣品進(jìn)行布魯菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè),結(jié)果顯示,244份血清中布魯菌陽(yáng)性總檢出率為34.3%,牛群最高陽(yáng)性檢出率為66.6%,最低陽(yáng)性檢出率為12%(表2)。

        表2 布魯菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果Table 2 The results of rose bengal plate agglutination and tube agglutination test for brucellosis

        3 討論

        通過(guò)對(duì)銀川地區(qū)6個(gè)規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行衣原體的血清學(xué)抽檢調(diào)查,結(jié)果表明,在這244份血清中平均陽(yáng)性率為25%,牛群最高陽(yáng)性率為38.3%,最低為0。這與何存利等[16]的調(diào)查結(jié)果基本一致。近一段時(shí)間,銀川地區(qū)這些規(guī)?;?chǎng)的部分奶牛出現(xiàn)不同程度的率配不孕、流產(chǎn)、早產(chǎn)或死產(chǎn)等繁殖障礙癥狀,并伴有呼吸道癥狀,產(chǎn)奶量也不同程度下降。而且不同程度地存在犢牛肺炎、腸炎、關(guān)節(jié)炎的癥狀。在此之前進(jìn)行的細(xì)菌學(xué)檢測(cè)以及牛病毒性腹瀉-黏膜病的檢測(cè)都不能確定其主要病因。本次衣原體的血清學(xué)檢測(cè)說(shuō)明衣原體感染在銀川地區(qū)已然存在廣泛,一些牛場(chǎng)母畜發(fā)生的繁殖障礙可能與衣原體的感染有關(guān),并且有可能是造成母畜不孕、早產(chǎn)以及犢牛腸炎、關(guān)節(jié)炎等的主要原因之一。規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)對(duì)奶牛衣原體的感染予以高度重視。

        衣原體病的綜合防控方面,筆者建議重點(diǎn)從以下幾方面著手:①嚴(yán)格貫徹執(zhí)行獸醫(yī)防疫衛(wèi)生措施,加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,注意清潔衛(wèi)生,減少應(yīng)激因素對(duì)牛群的不良影響,一旦發(fā)現(xiàn)流產(chǎn)、死胎,對(duì)胎兒、胎膜、子宮排出物等進(jìn)行無(wú)害處理和徹底消毒。對(duì)已污染的畜棚、環(huán)境用20mL/L~50mL/L來(lái)蘇兒或20g/L氫氧化鈉等有效消毒劑迸行嚴(yán)格消毒,以有效控制該病傳染的機(jī)會(huì);②加強(qiáng)檢疫工作力度,力求從源頭上凈化牛群。由于該病在臨床感染上經(jīng)常以隱性感染為主,很少引起明顯癥狀,而且隱性感染??砷L(zhǎng)期帶毒,引起衣原體病的傳播與暴發(fā)[17]。因此,規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)當(dāng)定期進(jìn)行衣原體血清學(xué)檢測(cè),檢出陽(yáng)性牛應(yīng)及時(shí)淘汰或治療,以徹底凈化牛群。并且牛場(chǎng)從外引進(jìn)奶牛時(shí),必須加強(qiáng)檢疫,對(duì)新引進(jìn)的牛群應(yīng)采取隔離觀察措施,防止疫病傳入。對(duì)于檢出疑似的牛,可用四環(huán)素類藥物(如長(zhǎng)效土霉素)進(jìn)行及時(shí)治療;③把衣原體病的免疫接種和防控工作納入牛場(chǎng)主要工作議程,定期對(duì)牛群進(jìn)行衣原體的預(yù)防接種。

        通過(guò)對(duì)采集的244 份血清進(jìn)行布魯菌病的檢測(cè),結(jié)果顯示,陽(yáng)性有84份,平均陽(yáng)性率為34.3%,牛群最高陽(yáng)性率為66.6%,最低為12%。此次調(diào)查結(jié)果與張永康等[18]的調(diào)查結(jié)果相比,陽(yáng)性率較高。但是我們不能確定是因?yàn)椴剪斁≡谂H褐械母腥韭噬仙?。因?yàn)槟壳般y川地區(qū)的養(yǎng)殖場(chǎng)普遍都進(jìn)行針對(duì)布魯菌病的弱毒疫苗接種,對(duì)布魯菌病檢出陽(yáng)性者,存在兩種可能,一種是自然感染布魯菌病的牛,另一種是接種過(guò)弱毒疫苗的牛。因?yàn)楫?dāng)前的布魯菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)及試管凝集試驗(yàn)并不能對(duì)這兩種可能進(jìn)行判別。但檢測(cè)結(jié)果顯示的陰性結(jié)果過(guò)多,由于在進(jìn)行布魯菌病調(diào)查之前,牛場(chǎng)都不同時(shí)間進(jìn)行了布魯菌病的弱毒疫苗接種。所以對(duì)于檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)的過(guò)多陰性,說(shuō)明疫苗在牛群中的免疫保護(hù)力及保護(hù)期未達(dá)到預(yù)期效果。這樣就使得牛群中存在著布魯菌病的大量易感牛,牛群感染布魯菌病的機(jī)率較大。檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的牛中就有可能存在著自然感染布魯菌病牛,并成為牛群中的傳染源,感染牛群,造成母畜繁殖障礙。所以此次銀川地區(qū)規(guī)?;?chǎng)出現(xiàn)的母畜繁殖障礙就有可能與布魯菌的感染有關(guān)。所以為了防控此類疫情的發(fā)生,養(yǎng)殖場(chǎng)必須實(shí)行以加強(qiáng)檢疫凈化為主的綜合性防御措施。需要對(duì)牛群中布魯菌的抗體消長(zhǎng)水平進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),避免牛群中出現(xiàn)易感牛;可通過(guò)進(jìn)一步的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)確定有無(wú)自然感染牛,若存在則需淘汰;牛場(chǎng)需在外引進(jìn)牛時(shí),必須加強(qiáng)檢疫,確保牛只健康后方可合群。

        針對(duì)本次銀川地區(qū)出現(xiàn)的疫情,我們了解到衣原體已在銀川地區(qū)這些規(guī)?;?chǎng)中存在廣泛。雖然之前也有對(duì)銀川地區(qū)衣原體病的相關(guān)報(bào)道,但并未引起本地區(qū)養(yǎng)殖企業(yè)對(duì)其重視,因此此次疫情給養(yǎng)殖場(chǎng)帶來(lái)了比較嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本次血清學(xué)調(diào)查雖并不能確定布魯病是為本次疫情的主要原因之一,但是它所存在的安全隱患不容忽視。衣原體病與布魯病均為嚴(yán)重危害人類及家畜健康的人畜共患病,若同時(shí)存在與場(chǎng)群之中,將嚴(yán)重影響?zhàn)B殖場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益以及養(yǎng)殖人員的公共衛(wèi)生安全。因此,養(yǎng)殖企業(yè)需對(duì)這兩種疾病引起一定的重視,及時(shí)進(jìn)行疫情的防控與治療。

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