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        朝鮮淫羊藿葉的黃酮苷類成分研究*

        2014-06-17 07:49:40李金玉李洪梅李蓉濤
        云南中醫(yī)中藥雜志 2014年7期
        關(guān)鍵詞:無定形鼠李糖柱層析

        李金玉, 李洪梅, 李蓉濤

        (昆明理工大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院, 云南 昆明 650500)

        淫羊藿(Epimediumkoreanum)為小檗科(Berbfidaceae)淫羊藿屬(Epimedium)植物,又名三枝九葉草等,亦稱“仙靈脾”。淫羊藿屬全世界大約有52個種[1],我國約有40個種,是傳統(tǒng)補(bǔ)腎壯陽藥,據(jù)明代李時珍《本草綱目》記載,淫羊藿具有“補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕”的作用。淫羊藿是我國傳統(tǒng)中藥,作為滋陰壯陽、預(yù)防類風(fēng)濕的植物藥使用已有2000余年的歷史[1]?,F(xiàn)代藥理研究表明,淫羊藿具有抗骨質(zhì)疏松[2]、抗炎[3]、抗衰老[4]、抗氧化[5]和抗腫瘤[6]等功效,此外,還具有雌、雄性激素作用[7]。近年來,由于具有很好的開發(fā)利用前景,淫羊藿已成為國內(nèi)外醫(yī)藥界的研究熱點。本文對朝鮮淫羊藿70%丙酮水提取物的正丁醇部分進(jìn)行研究,得到了6個黃酮苷,分別被鑒定為:金圣草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-甲酯(1),芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-甲酯(2),3′,5,7-三羥基-4′-甲氧基黃酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷(3),山奈酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷(4),蘆丁(5)和槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷(6)。化合物1和2為首次從淫羊藿屬植物中分離得到,化合物3,4和6為首次從該植物中分離得到。

        1 實驗儀器和材料

        1D和2D NMR譜在Brucker AM-400、DRX-500及Avance III 600型超導(dǎo)核磁共振儀上測定;ESI-MS用API QSTAR Pulsar質(zhì)譜儀測定。HPLC使用安捷倫1200高效液相色譜儀,分析柱為Agilent ZORBAX SB-C18柱(4.6 × 250 mm,5 μm),半制備柱為Agilent ZORBAX SB-C18柱(9.6 × 250 mm,5 μm);MPLC C-605/C-601型中壓液相色譜儀由瑞士BüCHI公司生產(chǎn);Dianion HP-20為日本三菱公司生產(chǎn);Toyopeal HW-40C由日本TOSOH公司生產(chǎn);Sephadex LH-20(20-100 μm)由瑞典Pharmacia公司生產(chǎn);YMC*-GEL ODS-A 由日本YMC生產(chǎn);TLC正相硅膠板(G和GF254),拌樣用硅膠(80-100目)和柱層析用硅膠(200-300目),均為青島海洋化工廠生產(chǎn);顯色劑為碘粉和5% H2SO4-EtOH溶液;展開劑:(1)氯仿:甲醇:水(8:2:0.2);(2)甲苯:甲酸甲酯:甲酸(1:5:2)。

        朝鮮淫羊藿葉于2010年11月購買自吉林省通化市,經(jīng)昆明理工大學(xué)李海舟博士鑒定為朝鮮淫羊藿(E.koreanum),憑證標(biāo)本(KMUST-B-20101109)存放于昆明理工大學(xué)資源藥物化學(xué)重點實驗室。

        2 提取與分離

        干燥朝鮮淫羊藿葉(10 kg)經(jīng)70%丙酮/水提取,減壓濃縮至無丙酮味,然后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取。正丁醇相(164 g)經(jīng)Toyopeal HW-40柱層析,甲醇/水(0%、30%、60%、90%、100%)梯度洗脫,合并得到6段,A-F。C段(40 g)經(jīng)ODS中壓柱,25%-65%甲醇水梯度洗脫(流速:10 mL/min)分為4段,C1-C4。C3(10 g)經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇洗脫)被分為4段,C3-1~C3-4。C3-4(1.1 g)經(jīng)ODS中壓柱(50%甲醇,流速:10 mL/min)洗脫分為3段C3-4-1~C3-4-3。C3-4-3(200 mg)用80-100目硅膠樣,200-300目硅膠柱層析,氯仿/甲醇10:1洗脫,得到5段,C3-4-3-1~ C3-4-3-5。C3-4-3-2(60 mg)經(jīng)半制備型HPLC進(jìn)行分離(流動相:20%乙腈/水,流速:3 mL/min),得到化合物1(7.6 mg)和2(8.0 mg)。C3-4-2(180 mg)經(jīng)Sephadex LH-20(氯仿/甲醇1:1)柱層析,后經(jīng)半制備型HPLC進(jìn)行分離(流動相:18%乙腈/水,流速:3 mL/min)得到化合物3(10 mg)和4(7.6 mg)。C3-4-1(500 mg),用80-100目硅膠拌樣,200-300目硅膠柱層析,氯仿/甲醇(15:1,10:1,8:1,4:1)梯度洗脫得到化合物5(13 mg)。D段(28 g)經(jīng)Dianion柱梯度洗脫(30%、60%、90%甲醇/水)分為5段,D1-D5。D3(8.0 g)先經(jīng)Sephadex LH-20(氯仿/甲醇1:1)純化,然后經(jīng)硅膠(200-300目)柱層析(氯仿/甲醇 10:1,6:1,4:1,0:1洗脫),分為三段,D3-1~D3-3。D3-2(75 mg)通過半制備型HPLC進(jìn)行分離(流動相:18%乙腈/水,流速:3 mL/min)得到化合物6(13 mg)。

        3 結(jié)構(gòu)鑒定

        圖1 化合物1-6的結(jié)構(gòu)

        化合物1:黃色無定形粉末,1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δH:3.10-3.47(3H,m,H-2″,H-3″,H-4″),3.65(3H,s,COOCH3),3.88(3H,s,OCH3),4.18(1H,d,J=9.5 Hz,H-5″),5.30(1H,d,J=7.2 Hz,H-1″),6.46(1H,s,H-8),6.86(1H,s,H-6),6.93(1H,d,J=8.1 Hz,H-5′),6.97(1H,s,H-3),7.57(1H,s,H-2′),7.58(1H,d,J=8.1 Hz,H-6′);13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δC:164.2(s,C-2),103.5(d,C-3),182.0(s,C-4),161.2(s,C-5),99.3(d,C-6),162.4(s,C-7),94.8(d,C-8),156.9(s,C-9),105.5(s,C-10),121.3(s,C-1′),110.4(d,C-2′),148.1(s,C-3′),151.0(s,C-4′),115.8(d,C-5′),120.5(d,C-6′),99.1(d,C-1″),72.1(d,C-2″),75.4(d,C-3″),71.3(d,C-4″),75.1(d,C-5″),169.2(s,C-6″),56.0(q,OCH3),52.0(q,COOCH3)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報道一致,故結(jié)構(gòu)鑒定為金圣草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-甲酯。

        化合物2:黃色無定形粉末,1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δH:3.13-3.40(3H,m,H-2″,H-3″,H-4″),3.65(3H,s,COOCH3),4.21(1H,d,J=9.5 Hz,H-5″),5.31(1H,d,J=7.1 Hz,H-1″),6.47(1H,s,H-8),6.87(1H,s,H-6),6.89(1H,s,H-3),6.94(2H,d,J=8.7 Hz,H-3′,5′),7.95(2H,d,J=8.7 Hz,H-2′,6′),12.98(1H,s,5-OH);13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δC:164.1(s,C-2),103.5(d,C-3),182.3(s,C-4),161.6(s,C-5),99.6(d,C-6),162.8(s,C-7),95.0(d,C-8),157.4(s,C-9),105.9(s,C-10),121.3(s,C-1′),129.0(d,C-2′,6′),116.4(d,C-3′,5′),162.8(s,C-4′),99.5(d,C-1″),73.1(d,C-2″),75.8(d,C-3″),71.7(d,C-4″),75.6(d,C-5″),169.5(s,C-6″),52.3(q,COOCH3)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報道一致,故結(jié)構(gòu)鑒定為芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-甲酯。

        化合物3:黃色無定形粉末,1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δH:1.10(3H,d,J=6.0 Hz,H-6?),3.81(1H,d,J=10.5 Hz,H-5″),3.95(3H,s,OCH3),4.53(1H,s,H-1?),5.31(1H,d,J=7.1 Hz,H-1″),6.20(1H,d,J=2.4 Hz,H-8),6.40(1H,d,J=2.4 Hz,H-6),6.90(1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),7.62(1H,d,J=1.8 Hz,H-2′),7.95(1H,dd,J=1.8,8.4 Hz,H-6′);13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δC:159.0(s,C-2),135.4(s,C-3),179.4(s,C-4),163.2(s,C-5),100.2(d,C-6),166.4(s,C-7),95.1(d,C-8),158.7(s,C-9),105.8(s,C-10),123.1(s,C-1′),114.6(d,C-2′),148.4(s,C-3′),150.9(s,C-4′),116.2(d,C-5′),124.1(d,C-6′),104.5(d,C-1″),76.0(d,C-2″),78.3(d,C-3″),69.2(d,C-4″),77.5(d,C-5″),68.6(t,C-6″),102.3(d,C-1?),72.2(d,C-2?),72.4(d,C-3?),73.9(d,C-4?),68.7(d,C-5?),18.0(q,C-6?)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道一致,故結(jié)構(gòu)鑒定為3′,5,7-三羥基-4′-甲氧基黃酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷。

        化合物4:黃色無定形粉末,1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δH:1.13(3H,d,J=6.2 Hz,H-6?),3.65(1H,d,J=10.2 Hz,H-5″),4.51(1H,s,H-1?),5.22(1H,d,J=6.8 Hz,H-1″),6.18(1H,d,J=2.4 Hz,H-8),6.38(1H,d,J=2.4 Hz,H-6),6.88(2H,d,J=8.6 Hz,H-3′,H-5′),8.03(2H,d,J=8.6 Hz,H-2′,H-6′);13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δC:159.3(s,C-2),135.5(s,C-3),179.3(s,C-4),163.0(s,C-5),100.2(d,C-6),166.8(s,C-7),95.1(d,C-8),158.6(s,C-9),105.5(s,C-10),122.7(s,C-1′),132.6(d,C-2′,C-6′),116.1(d,C-3′,C-5′),161.5(s,C-4′),104.7(d,C-1″),75.7(d,C-2″),78.1(d,C-3″),71.4(d,C-4″),77.2(d,C-5″),68.5(t,C-6″),102.4(d,C-1?),72.3(d,C-2?),72.1(d,C-3?),73.9(d,C-4?),69.7(d,C-5?),18.0(q,C-6?)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報道一致,故結(jié)構(gòu)鑒定為山奈酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷。

        化合物5:黃色無定形粉末,1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δH:1.00(3H,d,J=6.2 Hz,H-6?),3.70(1H,d,J=10.5 Hz,H-5″),4.38(1H,s,H-1?),5.31(1H,d,J=7.5 Hz,H-1″),6.14(1H,s,H-8),6.33(1H,s,H-6),6.82(1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),7.52(1H,d,J=2.1 Hz,H-2′),7.54(1H,dd,J=8.5,2.1 Hz,H-6′),12.51(1H,s,5-OH);13C-NMR(100 MHz,DMSO-d6)δC:157.4(s,C-2),134.1(s,C-3),177.9(s,C-4),162.0(s,C-5),100.0(d,C-6),166.4(s,C-7),94.7(d,C-8),157.3(s,C-9),104.3(s,C-10),121.8(s,C-1′),116.1(d,C-2′),145.7(s,C-3′),149.6(s,C-4′),116.9(d,C-5′),122.5(d,C-6′),102.3(d,C-1″),74.9(d,C-2″),77.4(d,C-3″),70.9(d,C-4″),76.8(d,C-5″),67.9(t,C-6″),101.6(d,C-1?),71.4(d,C-2?),71.2(d,C-3?),72.7(d,C-4?),69.1(d,C-5?),18.6(q,C-6?)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報道一致,故結(jié)構(gòu)鑒定為蘆丁。

        化合物6:黃色無定形粉末,1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δH:5.33(1H,dJ=7.6 Hz,H-1?),5.43(1H,d,J=7.2 Hz,H-1″),6.14(1H,d,J=2.4 Hz,H-8),6.34(1H,d,J=2.4 Hz,H-6),6.80(1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),7.53 (1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),7.62(1H,dd,J=2.0,8.5 Hz,H-6′);13C-NMR(100 MHz,DMSO-d6)δC:156.4(s,C-2),133.3(s,C-3),177.3(s,C-4),161.2(s,C-5),99.1(d,C-6),165.6(s,C-7),93.8(d,C-8),156.0(s,C-9),103.5(s,C-10),121.1(s,C-1′),116.1(d,C-2′),148.6(s,C-3′),144.9(s,C-4′),115.2(d,C-5′),121.6(d,C-6′),101.9(d,C-1″),71.2(d,C-2″),73.2(d,C-3″),67.9(d,C-4″),75.8(d,C-5″),60.1(t,C-6″),100.9(d,C-1?),74.1(d,C-2?),76.5(d,C-3?),70.0(d,C-4?),77.5(d,C-5?),60.9(t,C-6?)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報道一致,故結(jié)構(gòu)鑒定為槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷。

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