陳宇瓊，朱清峰，李國(guó)祥，黃火強(qiáng)

(1.中國(guó)同輻股份有限公司，北京 100045;2.中央民族大學(xué)，北京 100083)

免疫分析檢測(cè)技術(shù)為臨床疾病診斷和確定治療方案提供重要依據(jù)，免疫分析檢驗(yàn)技術(shù)經(jīng)歷了放射免疫檢驗(yàn)、熒光免疫分析、酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)和化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)等發(fā)展階段。其中，放射免疫分析作為經(jīng)典的檢驗(yàn)技術(shù)，其高度敏感性和特異性使其一直占據(jù)著免疫檢驗(yàn)市場(chǎng)的一席之地。本文主要從技術(shù)原理、運(yùn)營(yíng)成本、市場(chǎng)定價(jià)及份額、優(yōu)勢(shì)應(yīng)用領(lǐng)域等方面，闡述放射免疫分析技術(shù)與化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)，為相關(guān)研發(fā)及應(yīng)用者提供幫助。

1 概述

1.1 放射免疫分析法

1959 年，美國(guó)科學(xué)家 Berson和 Yalow[1]將放射性同位素測(cè)量的高靈敏度與抗原抗體的高特異性巧妙地結(jié)合，創(chuàng)立了放射免疫分析(radioimmuoassay, RIA)技術(shù) 。RIA屬競(jìng)爭(zhēng)性免疫分析方法，其基本原理是：非標(biāo)記抗原與放射性標(biāo)記抗原同時(shí)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合物(如抗體)上有限的結(jié)合位點(diǎn)，然后將結(jié)合抗原和未結(jié)合的游離抗原分離，用儀器測(cè)定放射性分布，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線確定樣本中待測(cè)物含量。RIA是醫(yī)學(xué)和生物學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域中方法學(xué)的重大突破，能檢出生物體內(nèi)的微量免疫活性物質(zhì)，可精確定量極微量而又具有重要生物學(xué)意義的物質(zhì)，是推動(dòng)醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)發(fā)展的關(guān)鍵技術(shù)。

1.2 化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)

(1) 化學(xué)發(fā)光免疫分析(Chemiluminescence immunoassay，CLIA) 是由化學(xué)發(fā)光物質(zhì)如魯米諾(luminol)或丫啶酯(acridinium esters)等類(lèi)化合物及其衍生物直接標(biāo)記免疫制劑而組成的免疫分析。免疫反應(yīng)后，加入氧化劑直接引發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。

(2)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析(Chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA)是由酶免疫制劑和化學(xué)發(fā)光酶底物組成的免疫分析。免疫反應(yīng)后，加入酶底物引發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。

(3)電化學(xué)發(fā)光免疫分析(Electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA)是將免疫反應(yīng)和電化學(xué)手段相結(jié)合的一種免疫分析技術(shù)，是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，包括了兩個(gè)過(guò)程。發(fā)光底物二價(jià)的三聯(lián)吡啶釕及反應(yīng)參與物三丙胺在電極表面失去電子而被氧化。氧化的三丙胺失去一個(gè)H成為強(qiáng)還原劑，將氧化型的三價(jià)釕還原成激發(fā)態(tài)的二價(jià)釕，隨即釋放光子恢復(fù)為基態(tài)的發(fā)光底物。

近十年來(lái)化學(xué)發(fā)光免疫分析發(fā)展較快，是目前發(fā)展和推廣應(yīng)用最快的免疫分析方法之一, 首次將高特異性的抗原抗體反應(yīng)與高靈敏度的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)結(jié)合，避免放射污染，提高了靈敏度。具有均相測(cè)量和多元檢測(cè)等獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)發(fā)展了全自動(dòng)化化學(xué)發(fā)光儀，即從加樣、傳輸、 溫育、分離、洗滌、測(cè)量到數(shù)據(jù)處理和結(jié)果打印，全部實(shí)行自動(dòng)化[3-4]。

放射免疫分析和化學(xué)發(fā)光免疫分析都能檢測(cè)各種腫瘤標(biāo)志物，已廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)。

2 發(fā)展現(xiàn)狀及特點(diǎn)

2.1 放射免疫分析法

歷經(jīng)半個(gè)多世紀(jì)發(fā)展，RIA檢測(cè)品種多達(dá)近千種，其檢測(cè)領(lǐng)域及品種仍在繼續(xù)擴(kuò)大。據(jù)報(bào)道[5]，我國(guó)有近三千多家的醫(yī)療機(jī)構(gòu)仍在應(yīng)用 RIA 技術(shù)檢測(cè)， 所用檢測(cè)儀器市場(chǎng)保有量在5 000～7 000臺(tái)，近幾年，每年銷(xiāo)售量仍在500臺(tái)左右。說(shuō)明放射免疫技術(shù)在我國(guó)尤其在基層醫(yī)院有廣泛應(yīng)用，加之價(jià)格低廉、準(zhǔn)確性高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，目前主要應(yīng)用于二類(lèi)醫(yī)院、地方醫(yī)院及臨床檢驗(yàn)中心，今后仍是重要發(fā)展方向。我國(guó)自主研制生產(chǎn)的百余種系列放射免疫試劑盒供應(yīng)全國(guó)三千多家醫(yī)療單位，每年約有三千多萬(wàn)患者接受RIA檢查，主要廠家有北京北方生物技術(shù)研究所、原子高科股份有限公司、天津協(xié)和公司、濰坊三維生物工程集團(tuán)有限公司等。法國(guó) CISbio公司是進(jìn)入國(guó)內(nèi)最早、最大的國(guó)外廠家(總代理: 中國(guó)同輻股份有限公司)，其產(chǎn)品數(shù)量多、品種全、質(zhì)量穩(wěn)定、價(jià)格適中，以腫瘤標(biāo)志物為優(yōu)勢(shì)品種[6]，對(duì)國(guó)內(nèi)市場(chǎng)起到補(bǔ)充作用。

2012年，中國(guó)放射免疫試劑市場(chǎng)規(guī)模約2億元人民幣。主要廠家銷(xiāo)售額列于表1。

表1 2012年國(guó)內(nèi)RIA產(chǎn)品主要銷(xiāo)售廠家銷(xiāo)售情況

國(guó)內(nèi)RIA市場(chǎng)，整體市值相對(duì)較小，仍處于穩(wěn)定增長(zhǎng)時(shí)期。近年來(lái)，我國(guó)RIA市場(chǎng)銷(xiāo)售額約以每年15%速度遞增。

中國(guó)攝影化妝造型十佳大賽，在近20年的時(shí)間里已經(jīng)成功舉辦了8屆，每次比賽都在全國(guó)甄選出眾多的美業(yè)精英，促進(jìn)并帶動(dòng)了行業(yè)潮流與美業(yè)發(fā)展。

2.2 化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)

早期的CLIA具有和RIA相似的特異性，但因光信號(hào)持續(xù)時(shí)間太短，靈敏度低于RIA，達(dá)不到臨床應(yīng)用水平。90年代初首先由英國(guó)Amersham公司研究發(fā)現(xiàn)，在HRP催化的Luminol發(fā)光反應(yīng)中加微量對(duì)碘酚作為發(fā)光穩(wěn)定劑，可以使發(fā)光信號(hào)持續(xù)20～30 min。隨后生產(chǎn)出試劑盒，標(biāo)示化學(xué)發(fā)光技術(shù)開(kāi)始進(jìn)入了臨床應(yīng)用。CLIA法試劑穩(wěn)定，使用方便，檢測(cè)快速、準(zhǔn)確、檢測(cè)項(xiàng)目較多，可進(jìn)行全自動(dòng)分析，已廣泛應(yīng)用于腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)使用的CLlA全自動(dòng)分析儀和配套腫瘤標(biāo)志物及甲狀腺系列試劑主要為國(guó)外進(jìn)口產(chǎn)品[7]，如羅氏診斷、雅培、貝克曼、拜耳診斷等。其產(chǎn)品主要集中在大型腫瘤專(zhuān)科醫(yī)院和綜合性醫(yī)院使用。但該技術(shù)存在發(fā)光反應(yīng)短，影響因素多，穩(wěn)定性及重復(fù)性欠佳的問(wèn)題。隨后發(fā)展的增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光免疫分析(ECUA)通過(guò)加入增強(qiáng)劑而顯著增強(qiáng)酶促化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度、延長(zhǎng)發(fā)光持續(xù)時(shí)間，克服了傳統(tǒng)發(fā)光體系中幾秒內(nèi)瞬時(shí)閃光、發(fā)光強(qiáng)度較低、不易測(cè)量的缺點(diǎn)。市場(chǎng)上國(guó)產(chǎn)化學(xué)發(fā)光儀由于靈敏度不高，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，加之要手動(dòng)或半自動(dòng)操作等因素，制約了發(fā)展。

2012年全國(guó)化學(xué)發(fā)光免疫試劑市場(chǎng)年銷(xiāo)售額41億元(見(jiàn)表2)。全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀器及試劑完全依賴(lài)進(jìn)口，主要市場(chǎng)集中在國(guó)內(nèi)三級(jí)醫(yī)院。而國(guó)產(chǎn)以半自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀為主， CLIA市場(chǎng)上主要是價(jià)格相對(duì)高昂的進(jìn)口品牌，國(guó)內(nèi)自主品牌市場(chǎng)占有率不到1.5%。

2.3 兩種技術(shù)方法學(xué)的對(duì)比

2.3.1精密度和靈敏度

戴海玲和于宏亮等[8-9]針對(duì)兩種不同方法檢測(cè)CA125、CA153、CA199及CEA的觀察，CLIA與RIA比較檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)顯著性(P>0.05)。樊英芳等[10]用RIA與CLIA法，比較甲狀腺疾病中的測(cè)定值，結(jié)果顯示相關(guān)性良好，相關(guān)密切度一般，靈敏度相近。兩種技術(shù)的相同點(diǎn)是精密度和靈敏度均較高。

2.3.2檢測(cè)成本

在儀器設(shè)備、試劑成本及耗材方面，CLIA技術(shù)所需費(fèi)用遠(yuǎn)高于RIA。同時(shí)，不同地區(qū)收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)也存在差異?，F(xiàn)以CA199為例，對(duì)比其檢測(cè)成本[11]，結(jié)果列于表3。由表3可見(jiàn)，RIA檢測(cè)每個(gè)樣本所需成本低于CLIA法，性?xún)r(jià)比高。

表2 2012年國(guó)內(nèi)主要化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑廠家銷(xiāo)售額

表3 CLIA與RIA檢測(cè)CA199費(fèi)用對(duì)比

2.3.3檢測(cè)效率

CLIA為機(jī)器化操作，可節(jié)省人力，大大提高檢測(cè)效率，隨時(shí)增加急診樣品，1 h內(nèi)即可出結(jié)果。RIA檢測(cè)法手工操作，通常要2～6 h出結(jié)果。CLIA檢測(cè)效率更高。

2.3.4檢測(cè)品種

RIA檢測(cè)品種范圍廣，覆蓋率高，品種齊全，適用于臨床、科研教學(xué)、標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照、新藥篩選等。CLIA檢測(cè)品種尚處于發(fā)展中。部分臨床檢測(cè)項(xiàng)目不具備CLIA。如CGA、PIIIP、TESTO-CT2、ICTP、RENIN、OHP-CT、肝纖維四項(xiàng)、A1和A2，ALD、雄烯二酮、IGF1等?？茖W(xué)研究中檢測(cè)動(dòng)物生物活性多肽、多肽藥物、多肽及其受體的抗體，主要采用RIA。

2.3.5注冊(cè)文號(hào)品種

RIA歷史悠久，品種齊全，均具有注冊(cè)文號(hào)。由于CLIA發(fā)展時(shí)間短，部分產(chǎn)品剛上市或正在研發(fā)中，故注冊(cè)文號(hào)不齊全。如A1和A2，RIA有文號(hào)，CLIA正在研發(fā)此產(chǎn)品；PIIIP(全段)RIA有文號(hào)，PIIIP(片段)CLIA有文號(hào)。

3 總結(jié)與展望

3.1 RIA的優(yōu)勢(shì)

(1) 政策方面。國(guó)家發(fā)展改革委員會(huì)、衛(wèi)生部、國(guó)家中醫(yī)藥管理局聯(lián)合發(fā)出《關(guān)于規(guī)范醫(yī)療服務(wù)價(jià)格管理及有關(guān)問(wèn)題的通知》，即發(fā)改價(jià)格[2012]1170號(hào)令，隨后正式對(duì)外發(fā)布《全國(guó)醫(yī)療服務(wù)價(jià)格項(xiàng)目規(guī)范(2012年版)》(以下簡(jiǎn)稱(chēng)“新規(guī)范”)。新規(guī)范規(guī)定檢測(cè)項(xiàng)目?jī)r(jià)格不得區(qū)分試劑或方法，要充分考慮當(dāng)?shù)蒯t(yī)療機(jī)構(gòu)主流檢驗(yàn)方法和社會(huì)承受能力等因素，以鼓勵(lì)適宜技術(shù)的使用[12]。要求各地要在2013年底前完成本地區(qū)已實(shí)施的醫(yī)療服務(wù)價(jià)格項(xiàng)目清理規(guī)范工作，并向社會(huì)公布允許在本地區(qū)實(shí)施的醫(yī)療服務(wù)項(xiàng)目和價(jià)格等具體實(shí)施意見(jiàn)。統(tǒng)一的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)政策，RIA比CLIA更具有競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)。同時(shí)，國(guó)內(nèi)使用的RIA試劑和儀器大部分為國(guó)產(chǎn)，使用RIA間接促進(jìn)了民族企業(yè)的發(fā)展[12]。

(2) 經(jīng)濟(jì)方面。結(jié)合我國(guó)目前各級(jí)醫(yī)療保險(xiǎn)的實(shí)情，如城鎮(zhèn)醫(yī)保、新農(nóng)合報(bào)銷(xiāo)費(fèi)用的限制，各病種診療額度的限制及許多未納入醫(yī)保的低收入人群診療疾病的需要等，迫切需要操作方便、結(jié)果可靠、普通患者容易承受的診療手段。CLIA試劑盒檢測(cè)儀器的價(jià)格較高，RIA具有成本低、效果可靠的優(yōu)勢(shì)。

(3) 科研教學(xué)方面。RIA檢測(cè)品種齊全，可檢測(cè)人及動(dòng)物樣品，配套儀器設(shè)備費(fèi)用低廉，適用于科研教學(xué)。CLIA檢測(cè)品種有限，比較適用于臨床篩查，配套儀器設(shè)備及輔助耗材費(fèi)用高昂。對(duì)于緊張的科研經(jīng)費(fèi)，RIA是首選。

3.2 RIA快速發(fā)展

雖然CLIA技術(shù)進(jìn)入臨床檢驗(yàn)和相關(guān)科學(xué)研究領(lǐng)域，對(duì)RIA的市場(chǎng)造成了一定的沖擊，但穩(wěn)定性低、儀器昂貴、收費(fèi)價(jià)格較高、操作人員的培訓(xùn)及配套條件等因素制約其發(fā)展，也與我國(guó)現(xiàn)行的以全民享受醫(yī)保、切實(shí)降低患者醫(yī)療負(fù)擔(dān)為目標(biāo)的醫(yī)療改革方向不協(xié)調(diào)，我國(guó)醫(yī)療改革、統(tǒng)一收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)的契機(jī)可推動(dòng)RIA的繁榮。

(1) 政策方面。關(guān)于環(huán)保管制，管理部門(mén)正在研究RIA的醫(yī)院管控；大力宣傳國(guó)家相關(guān)政策，RIA具有明顯優(yōu)勢(shì)。

(2) 技術(shù)方面。進(jìn)一步降低RIA生產(chǎn)成本，簡(jiǎn)化操作步驟，減少人員接觸時(shí)間并加強(qiáng)自動(dòng)化操作等，可增強(qiáng)其自身競(jìng)爭(zhēng)力。

(3) 市場(chǎng)方面。加強(qiáng)現(xiàn)有市場(chǎng)的管理和穩(wěn)固，開(kāi)拓科研領(lǐng)域市場(chǎng)。

參考文獻(xiàn)：

[1] Bersono SA， Yalow RS. Quantitative aspects of the reaction between insulin insulin-binding antibody [J]. J Clin Invest, 1959, 38: 1 996-2 016.

[2] Arakawa H, Macda M， Tsuji A. Enzyme immunoas-say of cor tiso l by chemiluminescence r eact ion of lumjnol- per ox idase [J]. Bunseki Kag aku, 1977, 26: 322- 326.

[3] 管華，石茂健，崔亞男. 免疫分析技術(shù)研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2007，10(3)：33-36.

Guan Hua, Shi Maojian, Cui Yanan. Developments of immunoassay[J]. Asia-Pacific Traditional Medicine, 2007, 3(10): 33-36(in Chinese).

[4] 翟艷，王卉. 化學(xué)發(fā)光免疫分析及其進(jìn)展[J]. 長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，25(4)：619-621.

Zhai Yan, Wang Hui. Developments of Chemiluminescence immunoassay[J]. Journal of Changchun University of Traditional Chinese Medicine, 2009, 25(4): 619-621(in Chinese).

[5] 王丁泉. 放射免疫分析技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀與展望[J]. 標(biāo)記免疫分析與臨床，2012，19(4)：249-251.

Wang Dingquan. Development of radiological immunoassay[J]. Labeled Immunoassays and Clinical Medicine，2012，19(4)：249-251(in Chinese).

[6] 韓賠珍. 化學(xué)發(fā)光免疫分析[J]. 國(guó)外醫(yī)學(xué)：放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)分冊(cè)，2000，24(5)：196-201.

Han Peizhen. Chemiluminescence immunoassay[J]. Foreign Medical Science： Radiomedicine and Nuclear Medicine, 2000, 24(5): 196-201(in Chinese).

[7] 張青云. 腫瘤標(biāo)志物臨床檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，29(7)：585-589.

Zhang Qingyun. Actuality and developmental trends of clinical detection technology of tumor marker[J]. Chin J Lab Med, 2006, 29(7): 585-589(in Chinese).

[8] 戴海玲，庫(kù)艷麗. 兩種不同方法檢測(cè)CA125、CA153、CA199的觀察[J]. 中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2010，10(9)：1 145-1 146.

Dai Hailing, Ku Yanli. Results of detetion of CA125, CA153 and CA199 by two methods[J]. China Tropical Medicine, 2010, 10(9): 1 145-1 146(in Chinese).

[9] 于宏亮. 兩種方法檢測(cè)CEA對(duì)比分析[J]. 中國(guó)誤診學(xué)雜志，2011，11(32)：7 843.

Yu Hongliang. Detetion of CEA by two methods[J]. Chin J Misdiagn, 2011, 11(32): 7 843(in Chinese).

[10] 樊英芳，陳乃麟. 放射免疫分析與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)在核醫(yī)學(xué)診斷中的比較 [C]//第四屆中國(guó)核學(xué)會(huì)省市“三核”論壇論文集.北京：中國(guó)核學(xué)會(huì)，2007： 219.

[11] 修雁，孫曉光，許開(kāi)平，等. 化學(xué)發(fā)光分析與放射免疫分析的對(duì)照研究[J]. 中國(guó)臨床醫(yī)學(xué)， 2000,7(4)：390-391.

Xiu Yan, Sun Xiaoguang, Xu Kaiping, et al. The Comparison of Chemiluminescence and Radioimmumoassay[J]. Clinical Medical Journal of China, 2000, 7(4): 390-391(in Chinese).

[12] 趙艷津，王彤. 對(duì)放射免疫技術(shù)生存意義的思考[C]// 第四屆全國(guó)核醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)會(huì)議.北京：中華核醫(yī)學(xué)學(xué)會(huì)，2007：210.