崔慶佳 王國(guó)建 張媛 楊影 康東洋 杜延順 趙麗萍 黃莎莎 張偉 孫喜斌 戴樸 黃麗輝

據(jù)估計(jì)，遺傳因素導(dǎo)致的聽力損失在兒童聽力損失患者中高達(dá)50%～60%以上[1]。在中國(guó)聾人中，GJB2、SLC26A4基因突變導(dǎo)致的耳聾比例非常高[2，3]，全球有超過2億7千8百萬聾人，其中8千萬是非綜合征型聾患者。2006年我國(guó)人口抽樣調(diào)查顯示，聽力殘疾人達(dá)53 233例，其中兒童組多重殘疾占71.37%，絕大多數(shù)為聽力言語(yǔ)殘疾[4]。因此，研究GJB2、SLC26A4基因突變?cè)趮雰褐翆W(xué)齡期兒童的發(fā)病特點(diǎn)對(duì)制定兒童期耳聾患者的臨床基因診斷策略及指導(dǎo)康復(fù)干預(yù)具有重要的臨床意義。為此，本研究選取在0～12歲發(fā)病，且攜帶有GJB2或SLC26A4基因純合或復(fù)合雜合致病性突變而確診為遺傳性聾的兒童患者為研究對(duì)象，探討其聽力損失特點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象 2011年5月至2011年9月，北京市18個(gè)區(qū)縣19 883例聽力殘疾者接受了耳聾基因芯片檢測(cè)，本研究選取其中0～12歲發(fā)病，且因攜帶純合或復(fù)合雜合致病性突變而確診為GJB2、SLC26A4基因相關(guān)耳聾的832例患兒為研究對(duì)象，其中，男399例，女433例；極重度聽力損失504例(60.57%)，重度151例(18.15%)，中重度111例(13.34%)，中度66例(7.93%)。553例(66.47%，553/832)為GJB2基因相關(guān)耳聾兒童，男278例，女275例，平均發(fā)病年齡1.80±2.58歲；279例(33.53%，279/832)為SLC26A4基因相關(guān)耳聾兒童，男121例，女158例，平均發(fā)病年齡2.25±2.54歲。所有研究對(duì)象均在醫(yī)生指導(dǎo)下由監(jiān)護(hù)人填寫了《耳聾病人信息登記表》，包括一般信息、出生史、耳聾發(fā)病年齡、家族史、個(gè)人史(耳聾前感染病史、耳毒性藥物應(yīng)用史、外傷史等)等，并簽署知情同意書。

1.2研究方法

1.2.1耳聾基因芯片檢測(cè)方法 采用康為世紀(jì)全血核酸提取試劑盒從研究對(duì)象外周血中提取基因組DNA，用NANO-DROP、ND2000進(jìn)行DNA定量和純度檢測(cè)。采用晶芯遺傳性耳聾基因芯片檢測(cè)試劑盒檢測(cè)GJB2 (235delC、299_300delAT、176_191dell6、35delG)、SLC26A4(IVS7- 2A>G、2168A>G)、GJB3(538C>T)、線粒體12SrRNA(1555A>G、1494C>T)。按試劑盒說明進(jìn)行目的基因的PCR 反應(yīng)、芯片雜交、漂洗等步驟。應(yīng)用晶芯LuxScanTM10K-B微陣列芯片掃描儀以90的激光掃描強(qiáng)度和532nm激發(fā)波長(zhǎng)進(jìn)行芯片掃描，用掃描儀自帶軟件進(jìn)行結(jié)果判讀。每批96例樣本包含一組陰性、陽(yáng)性對(duì)照組，以驗(yàn)證芯片檢測(cè)結(jié)果的可靠性，并隨機(jī)抽取5%進(jìn)行DNA測(cè)序進(jìn)一步驗(yàn)證芯片檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.2.2發(fā)病年齡分組 結(jié)合兒童發(fā)育年齡分期及《中華人民共和國(guó)義務(wù)教育法》規(guī)定，本組對(duì)象按發(fā)病年齡分組如下：小于1歲為嬰兒期(<1歲組)；1歲至滿3歲之前為幼兒期(1～歲組)；3歲至6歲之前為學(xué)齡前期(3～歲組)；6歲至12歲為學(xué)齡期(6～12歲組)。

1.2.3聽力損失程度分級(jí) 本研究聽力檢測(cè)方法視患者配合程度選取聽覺行為反應(yīng)測(cè)聽、游戲測(cè)聽及純音測(cè)聽，以較好耳500、1 000、2 000、4 000 Hz平均純音聽閾判定其聽力殘疾等級(jí)。聽力殘疾一級(jí)為聽覺系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能方面極重度損傷，較好耳聽力損失程度≥91 dB HL；聽力殘疾二級(jí)為重度損傷，聽力損失程度81～90 dB HL；聽力殘疾三級(jí)為中重度損傷，聽力損失程度61～80 dB HL；聽力殘疾四級(jí)為中度損傷，聽力損失程度41～60 dB HL[5]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 18.0，對(duì)GJB2、SLC26A4基因耳聾人群間的發(fā)病年齡構(gòu)成比及聽力損失程度構(gòu)成比進(jìn)行χ2檢驗(yàn)；并分別對(duì)兩基因突變?nèi)巳褐胁煌l(fā)病年齡組的聽力損失程度構(gòu)成比進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)均定為a=0.05。

2 結(jié)果

2.1GJB2、SLC26A4基因純合和復(fù)合雜合突變基因型及構(gòu)成比 832例攜帶GJB2、SLC26A4基因純合或復(fù)合雜合突變耳聾個(gè)體中，各基因突變的基因型及構(gòu)成比見表1。

表1 832例GJB2、SLC26A基因突變耳聾患兒的基因型及構(gòu)成比

2.2GJB2、SLC26A4基因突變患兒發(fā)病年齡構(gòu)成比(表2) GJB2和SLC26A4基因突變患兒在發(fā)病年齡構(gòu)成比上的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=45.78，P=0.001)；GJB2及 SLC26A4基因突變耳聾患兒的發(fā)病年齡主要集中在嬰兒及幼兒期(0～3歲)，兩者在該年齡段所占比例分別為76.31%(422/553)和70.25%(196/279)。

2.3GJB2、SLC26A4基因突變耳聾患兒聽力損失程度的比較 GJB2 、SLC26A4基因純合突變或復(fù)合雜合突變引起的聽力損失程度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.40，P=0.221)，均以極重度聽力損失為主(表3)。

2.4GJB2基因突變耳聾患兒中不同發(fā)病年齡組的聽力損失程度比較 GJB2基因突變者發(fā)病年齡主要分布在嬰兒期和幼兒期，各發(fā)病年齡組均以極重度聽力損失為主(表4)。各發(fā)病年齡組聽力損失程度構(gòu)成比的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=24.179，P=0.004)，隨發(fā)病年齡增大，極重度聽力損失比例逐漸減少。

2.5SLC26A4基因突變耳聾患兒中不同發(fā)病年齡組的聽力損失程度比較 SLC26A4基因突變耳聾患兒發(fā)病年齡主要分布在幼兒期，各發(fā)病年齡組均以極重度聽力損失為主(表5)，各發(fā)病年齡組聽力損失程度構(gòu)成比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.31，P=0.083)，但可見6歲以內(nèi)，隨發(fā)病年齡增大，極重度聽力損失者比例逐漸減少。

表2 GJB2、SLC26A4基因突變患兒發(fā)病年齡構(gòu)成比(例，%)

表3 GJB2、SLC26A4基因突變患兒聽力損失程度比較(例，%)

表4 不同發(fā)病年齡組GJB2突變者的聽力損失程度比較(例，%)

表5 不同發(fā)病年齡組SLC26A4突變者的聽力損失程度比較(例，%)

3 討論

從本組GJB2、SLC26A4基因突變相關(guān)耳聾兒童的6個(gè)熱點(diǎn)突變篩查其聽力損失特點(diǎn)分析，發(fā)現(xiàn)該群體中一些基因型對(duì)表型影響的規(guī)律如下。

3.1GJB2、SLC26A4基因相關(guān)耳聾患兒的發(fā)病年齡 文獻(xiàn)報(bào)道[6～8]，GJB2基因突變?nèi)巳憾@發(fā)病年齡從6～8個(gè)月至20歲不等。本研究結(jié)果中，GJB2基因突變的發(fā)病年齡主要集中在嬰兒期(0～1歲，37.97%)和幼兒期(1～3歲，38.34%)，提示GJB2基因突變患者常見發(fā)病年齡為0～3歲。

SLC26A4是大前庭水管綜合征(enlarged vestibular aqueduct syndrome, EVAS)的致病基因，也是中國(guó)第二位致聾基因[9]。國(guó)內(nèi)外研究[9～12]表明，SLC26A4基因突變相關(guān)耳聾的發(fā)病年齡多在嬰兒期或幼年期，本研究結(jié)果與以上研究相吻合，尤其以1～3歲(44.80%)居多，0～1歲(25.45%)次之。

另外，值得注意的是，GJB2基因突變耳聾患兒以0～1歲發(fā)病居多，可以被早期發(fā)現(xiàn)；SLC26A4基因突變耳聾患兒的發(fā)病年齡則更主要集中在1～3歲，常表現(xiàn)為出生時(shí)有較好的殘余聽力或接近正常的聽力，不易被父母察覺。究其原因可能是SLC26A4基因突變導(dǎo)致前庭水管或內(nèi)淋巴囊擴(kuò)大，1歲以后患兒開始行走活動(dòng)，容易發(fā)生頭部碰撞，碰撞后內(nèi)淋巴液經(jīng)擴(kuò)大的前庭水管從內(nèi)淋巴囊倒流入耳蝸或前庭，損傷毛細(xì)胞，從而導(dǎo)致波動(dòng)性聽力下降。

3.2GJB2、SLC26A4基因突變耳聾患兒的聽力損失程度 GJB2基因突變引起的聽力損失大多表現(xiàn)為重度或極重度聾[13，14]，本研究對(duì)象中同樣以極重度聽力損失為主。另外，本文結(jié)果顯示，發(fā)病年齡越小，極重度聽力損失患兒所占比例越大，提示年齡很小時(shí)GJB2突變即導(dǎo)致非常嚴(yán)重的聽力損失，因而易于發(fā)現(xiàn)，同時(shí)也提示GJB2耳聾隨年齡增長(zhǎng)加重的趨勢(shì)不明顯，因而表現(xiàn)為高齡兒童極重度聽力損失患兒所占比例有所下降。

研究表明，SLC26A4基因突變導(dǎo)致的聽力損失以重度至極重度為主[14]。從文中結(jié)果看SLC26A4基因突變耳聾患兒各年齡組也均以極重度聽力損失為主；6歲以內(nèi)，隨發(fā)病年齡增大，極重度聽力損失的比例有所下降。

綜上所述，在0～12歲發(fā)病且確診為GJB2、SLC26A4基因相關(guān)耳聾兒童中，發(fā)病年齡主要集中在嬰兒期及幼兒期，并以極重度聽力損失為主。GJB2基因突變者發(fā)病年齡越小，極重度聽力損失比例越大。提示對(duì)12歲以下尤其是3歲以內(nèi)發(fā)病的重度、極重度聾患兒，要重視遺傳性聾的分子學(xué)診斷，以做到早發(fā)現(xiàn)、早治療和早干預(yù)，實(shí)現(xiàn)聾而不啞，減輕社會(huì)和家庭負(fù)擔(dān)，提高患兒生活質(zhì)量。

值得注意的是，仍有相當(dāng)數(shù)量的重度聾患兒僅發(fā)現(xiàn)GJB2或SLC26A4單等位基因突變或未發(fā)現(xiàn)突變而無法明確分子病因者，需要進(jìn)一步行兩個(gè)基因的全序列分析，以期發(fā)現(xiàn)雙等位基因突變，提高確診率；同時(shí)，結(jié)合基因檢測(cè)結(jié)果和聽力檢查結(jié)果，獲得更多耳聾突變位點(diǎn)的基因型與聽力表型的相關(guān)性，為臨床診療提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。

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