孫晴晴，劉源崗，3，王士斌，何鵬

（1華僑大學(xué)化工學(xué)院化工與制藥工程系，福建 廈門 361021；2華僑大學(xué)化工學(xué)院生物工程與技術(shù)系，福建廈門 361021；3華僑大學(xué)生物材料與組織工程研究所，福建 廈門 361021）

組織工程融匯醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和工程學(xué)等學(xué)科，是近年來的研究熱點之一。研究者利用工程學(xué)方法制造仿生結(jié)構(gòu)，模擬天然組織的生理環(huán)境，包括結(jié)構(gòu)的、物理的以及形態(tài)的特征。其中微觀結(jié)構(gòu)對最終的組織構(gòu)建起著至關(guān)重要的作用[1]。

目前關(guān)于組織工程相關(guān)材料的研究相對較多，包括合成材料與天然材料，合成材料如Poly Lactic Acid（PLA）、Poly（L-glycolic acid）（PGA）、Poly（lactic-co-glycolic acid）（PLGA）等，天然材料如膠原蛋白、彈性蛋白、殼聚糖等。其中絲素蛋白纖維作為一種天然的蛋白質(zhì)纖維具有良好的生物相容性、氧和水蒸氣滲透性、生物可降解性、力學(xué)性能強等優(yōu)點而被廣泛應(yīng)用于組織工程，如骨組織[2]、軟骨組織[3]、軟體組織[4]、角膜[5]、血管[6]、宮頸組織[7]和皮膚[8]等。為了促進(jìn)絲素組織工程的發(fā)展，考慮到微觀結(jié)構(gòu)對細(xì)胞在支架內(nèi)的增殖、黏附、向內(nèi)生長形成組織、營養(yǎng)物質(zhì)及代謝產(chǎn)物的良好運輸?shù)犬a(chǎn)生的影響，本文將以絲素支架在組織工程中的不同結(jié)構(gòu)為主線，對絲素的不同結(jié)構(gòu)進(jìn)行總結(jié)歸納，分析不同結(jié)構(gòu)的優(yōu)缺點，以期為今后從微觀結(jié)構(gòu)角度設(shè)計絲素組織工程支架提供一定的參考依據(jù)。

1 絲素蛋白

家蠶蠶絲（Bombyx mori silk）以其獨特的力學(xué)性能和光澤度而受到廣泛關(guān)注，且被用作醫(yī)學(xué)縫合線已達(dá)數(shù)百年之久。近年來，因其具有良好的水溶性、生物相容性、易于化學(xué)修飾、體內(nèi)降解較慢等特性而被用作生物材料。

家蠶蠶絲是熟蠶在蛻變時分泌絲液凝固而成的連續(xù)長纖維，由絲素蛋白和包裹在其外部的絲膠構(gòu)成。絲膠是黏附蛋白，占蠶繭總質(zhì)量的 25%～30%。絲素蛋白分子量（≥200～350 kDa）較大，包含輕鏈（Mw約 26 kDa）和重鏈（Mw約 390 kDa），兩條鏈由一個二硫鍵連接，同時一個 25 kDa的糖蛋白（P25）也以非共價鍵的形式與這些鏈相連[9]。絲素蛋白是一種嵌段共聚物，主要含有親水性的 β折疊所形成的嵌段，嵌段之間由一些小的親水片段相連。結(jié)晶區(qū)基本上是由Gly-X（X為Ala，Ser，Thr，Val）重復(fù)序列構(gòu)成，在這些區(qū)域中存在一些富含甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸和酪胺酸的子域[10]。絲素蛋白中的β折疊使其具有較高的力學(xué)性能和韌性，研究表明，蠶絲纖維的斷裂拉伸強度高達(dá)740 MPa[11]。

絲素蛋白除了具有良好的力學(xué)性能外，還具有良好的生物降解性，其降解速率與絲素蛋白的結(jié)晶度相關(guān)，結(jié)晶度越高，降解速率就越慢。絲素蛋白體內(nèi)生物降解速率不僅取決于組織的移植位點和力學(xué)環(huán)境，還與絲素蛋白在制備過程中的特征參數(shù)相關(guān)。絲素降解是酶解過程，通過細(xì)胞代謝產(chǎn)生多肽鏈，其降解速度可以通過絲素的處理模式和后期處理來調(diào)節(jié)，主要是改變絲素的結(jié)晶度。一般情況下，β折疊增多，絲素的降解速率會減慢。研究表明，絲素生物材料的降解速率會直接影響人間充質(zhì)干細(xì)胞的代謝，進(jìn)而改變骨形成的速率[12]。因此絲素蛋白的加工與材料降解之間的聯(lián)系為絲素用于生物醫(yī)學(xué)材料提供了堅實的基礎(chǔ)。目前，絲素蛋白在組織工程支架中得到了廣泛的應(yīng)用，并根據(jù)組織的不同需要制備出了不同的結(jié)構(gòu)。

2 不同絲素支架的結(jié)構(gòu)

2.1 多孔結(jié)構(gòu)

在3D聚合物支架中，孔洞結(jié)構(gòu)在組織工程中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用，它為接種在支架中的細(xì)胞形成功能性組織提供了至關(guān)重要的框架結(jié)構(gòu)[1]。近年來研究表明，支架的幾何學(xué)形貌決定了細(xì)胞在支架內(nèi)構(gòu)建的組織結(jié)構(gòu)。為了使多孔聚合物支架適用于不同組織的構(gòu)建，如何改進(jìn)多孔聚合物支架的構(gòu)建及制備已經(jīng)成為研究的熱點。且孔洞的形狀、大小、孔壁的厚度和粗糙度等對種植在支架中的細(xì)胞的活性、增殖及分化等均會產(chǎn)生不同的影響。下面以骨組織的體外構(gòu)建為例，列舉了幾種不同的結(jié)構(gòu)對組織構(gòu)建的影響。

Correia等[13]分別以水和六氟異丙醇為溶劑制備了片層孔和球形孔的多孔支架，結(jié)果表明，球形孔（孔徑400～600 μm）更利于骨組織的生長分化。然而Oliveira等[14]卻發(fā)現(xiàn)，將凍干法制備出的片層孔結(jié)構(gòu)用于骨組織體外結(jié)構(gòu)時，片層孔結(jié)構(gòu)對細(xì)胞產(chǎn)生了接觸導(dǎo)向的作用，誘使新形成的膠原沿著片層孔的走向分泌。因此不同的孔洞形狀在組織工程中也有不同的應(yīng)用。

Wang等[15]分別利用凍干法和鹽析法制備的多孔絲素蛋白支架用于體外軟骨組織構(gòu)建。結(jié)果表明，鹽析法制備出的絲素支架具有較大的孔徑、較高的孔隙率和結(jié)晶度，利于細(xì)胞在支架內(nèi)均勻分布，并提高了細(xì)胞的增殖和分化能力。然而為了更準(zhǔn)確地模擬天然軟骨的不同孔徑結(jié)構(gòu)，Hofmann等[16]利用鹽析法制備出大孔（孔徑400～500 μm）與小孔（孔徑112～224 μm）共存的絲素支架用于軟骨組織構(gòu)建，其中大孔結(jié)構(gòu)和小孔結(jié)構(gòu)分別分布在支架的兩端。通過比較細(xì)胞在大孔結(jié)構(gòu)、小孔結(jié)構(gòu)及大小孔結(jié)構(gòu)上的增殖、活性及分化能力等，可以看出大小孔共存的結(jié)構(gòu)在動態(tài)培養(yǎng)下更利于細(xì)胞的增殖分化，且細(xì)胞活性更高。因此準(zhǔn)確地模擬天然組織的結(jié)構(gòu)對成功構(gòu)建組織有較大的影響。

Makaya等[17]分別采用蔗糖及氯化鈉為致孔劑，相應(yīng)地以六氟異丙醇及水為溶劑制備了兩種多孔絲素支架。其中蔗糖/六氟異丙醇支架內(nèi)部孔洞為圓形，孔壁較薄且均一；而氯化鈉/水制備出的支架孔洞為方形，孔壁較厚、表面粗糙且是微孔狀的。將軟骨細(xì)胞種植在兩種支架中發(fā)現(xiàn)形成的軟骨組織在蔗糖/六氟異丙醇支架中分布較為均勻，這是因為支架的孔壁較薄，在軟骨形成過程中孔壁發(fā)生收縮利于軟骨組織沉降物的分散。

綜上所述，不同的結(jié)構(gòu)對于組織構(gòu)建會產(chǎn)生不同的影響，準(zhǔn)確模擬天然組織的結(jié)構(gòu)是成功構(gòu)建組織的關(guān)鍵因素之一。除了上述列舉的方法與應(yīng)用外，作者實驗室采用熱致相分離法制備了絲素支架，通過調(diào)節(jié)制備條件可以得到不同結(jié)構(gòu)特征的絲素支架，如圖1所示，其中圖1(a)顯示支架表面所形成的孔洞為條形孔，圖1(b)中顯示支架表面形成的孔洞結(jié)構(gòu)為圓形孔。

2.2 纖維結(jié)構(gòu)

圖1 絲素蛋白支架表面孔洞結(jié)構(gòu)的電鏡圖

天然細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）主要由兩類大分子構(gòu)成：①多糖類，被稱為黏多糖（GAGs），通常與蛋白共價連接形成蛋白聚糖；②纖維蛋白，如膠原蛋白、彈性蛋白、纖連蛋白及層粘連蛋白，它們同時具有結(jié)構(gòu)功能和黏附功能[18]。蛋白聚糖分子形成高度水合凝膠，組裝的纖維蛋白被嵌入其中，并與細(xì)胞通過力學(xué)的和化學(xué)的信號相互作用。因此，基于天然 ECM 結(jié)構(gòu)特征，納米技術(shù)尤其是納米纖維技術(shù)，因其適于構(gòu)建人工基質(zhì)已經(jīng)成為這個領(lǐng)域的重要方向。一般制備納米纖維結(jié)構(gòu)的方法有自組裝[19-20]、相分離[21]和電紡技術(shù)[22]等。除了傳統(tǒng)的納米纖維結(jié)構(gòu)外，為了滿足不同組織對支架的不同力學(xué)要求，近年來又新興了很多納米纖維結(jié)構(gòu)。

Santos等[23]將淀粉與聚已內(nèi)酯（質(zhì)量比 30∶70）制備成納米纖維與微米纖維共混的支架，其中納米纖維利于細(xì)胞的黏附和增殖，而微米纖維則對支架提供力學(xué)支撐。隨后 Sahoo等[24]將聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）納米纖維涂層在絲素微米纖維編織支架上形成共混支架，這種復(fù)合方式不僅使支架的力學(xué)性能得到了提高，而且為細(xì)胞在表面上的增殖與黏附提供了更大的接觸面，增加細(xì)胞支架上下表面的增殖率。但是，微米纖維的加入是否會影響細(xì)胞在支架上的生長呢？Bondar等[25]為人們解除了這方面的擔(dān)憂，他們通過對比內(nèi)皮細(xì)胞在絲素納米纖維與微米纖維支架上的生長情況得出，內(nèi)皮細(xì)胞在納米纖維和在微米纖維上的細(xì)胞間接觸分子的表達(dá)或細(xì)胞增殖率上并無顯著性差異。

除了將微米纖維結(jié)構(gòu)加入到納米纖維結(jié)構(gòu)提高支架的力學(xué)性能外，細(xì)胞外基質(zhì)中的環(huán)形結(jié)構(gòu)對組織的生物力學(xué)性能也起著關(guān)鍵性的作用。Bhattacharjee等[26]將絲素與殼聚糖交聯(lián)制備了環(huán)形的纖維支架用于椎肩盤組織的再生。殼聚糖的加入提高了支架的硬度，環(huán)形的層狀纖維誘導(dǎo)細(xì)胞延著纖維的方向黏附、生長及分化，同時提高了支架的力學(xué)性能。當(dāng)然，多股納米纖維以不同的方式組合同樣可以提高支架的力學(xué)性能。Li等[27]將兩股絲素纖維絲（共3456根）相互纏繞形成的纖維簇（即wired結(jié)構(gòu)）用于前交叉韌帶（anterior cruciate ligament，ACL）的體外構(gòu)建，通過對比另外兩種結(jié)構(gòu)（辮子形和直線形）得出， wired結(jié)構(gòu)的支架力學(xué)性能明顯高于其它兩種，可媲美天然 ACL的力學(xué)性能。

2.3 纖維-多孔結(jié)構(gòu)

纖維結(jié)構(gòu)具有較大的比表面積，利于細(xì)胞的黏附和增殖，但辮子狀、直線狀及wired形狀的纖維結(jié)構(gòu)等由于其相對致密的結(jié)構(gòu)而不利于營養(yǎng)物質(zhì)的運輸，同時降低了細(xì)胞的接種量以及細(xì)胞在支架內(nèi)部的滲透和細(xì)胞外基質(zhì)的分泌。因此多孔結(jié)構(gòu)在纖維支架里發(fā)揮著重要作用。Liu等[28]將編織的絲素支架與多孔的絲素海綿結(jié)合用于韌帶組織工程。這種結(jié)構(gòu)一方面利于支架的傳質(zhì)，另一方面用多孔的絲素海綿代替?zhèn)鹘y(tǒng)構(gòu)建韌帶組織時所加入的凝膠，便于細(xì)胞在支架內(nèi)的滲透，而且克服了細(xì)胞-凝膠在體內(nèi)動態(tài)環(huán)境中被排斥的弊端。

對于多孔支架來說，加入纖維可以提高細(xì)胞的黏附及分化能力，同時也提高了支架的力學(xué)性能[25]。Stoppato等[29]將氯化鈉與絲素纖維混合利用鹽析法制備混有絲素纖維的聚乳酸多孔支架，結(jié)果表明，加入絲素纖維后，支架的性能得到了提高，同時增加了支架對內(nèi)皮細(xì)胞的體外供養(yǎng)能力以及體內(nèi)血管化的能力。

圖2 不同放大倍數(shù)下支架表面的電鏡圖

由此可見，纖維-多孔結(jié)構(gòu)支架中的纖維結(jié)構(gòu)可以提高細(xì)胞在支架上的黏附和增殖能力，而多孔結(jié)構(gòu)則利于細(xì)胞在支架上向內(nèi)生長，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)及代謝產(chǎn)物在支架內(nèi)的運輸及傳遞，擁有了多孔結(jié)構(gòu)和纖維結(jié)構(gòu)在組織構(gòu)建中的雙重優(yōu)勢。作者實驗室利用熱致相分離法制備了多孔的絲素纖維支架，如圖2所示，支架表面形成了多孔的納米纖維與微米纖維共混的結(jié)構(gòu)，其中納米纖維可以促進(jìn)細(xì)胞在支架表面的黏附與增殖，而微米纖維除了具有促進(jìn)細(xì)胞在支架表面的黏附與增殖外，還對支架的結(jié)構(gòu)起到支撐的作用。

2.4 水凝膠結(jié)構(gòu)

絲素水凝膠是絲素蛋白水溶液在酸、脫水劑、離子、超聲處理或者凍干的作用下由溶膠轉(zhuǎn)變成凝膠而得。蛋白濃度的增加，溫度的升高以及Ca2+的加入都可以加速溶膠-凝膠的轉(zhuǎn)變。絲素水凝膠可用于注射或非注射傳遞系統(tǒng)，且研究表明絲素水凝膠的力學(xué)性能適于組織工程相應(yīng)組織的體外構(gòu)建。

Fini等[30]將成骨細(xì)胞包載在絲素水凝膠內(nèi)體外培養(yǎng)一段時間后，用于兔子遠(yuǎn)端股骨極量缺損的修復(fù)治療。研究結(jié)果表明，在絲素水凝膠中，TGF-β1的表達(dá)顯著增加，新形成骨中骨小梁的體積、厚度和面積等都有顯著提高，且新形成的骨結(jié)構(gòu)與正常骨相似，說明絲素水凝膠加速了修復(fù)的過程。Diab等[31]以鼠股骨節(jié)段極量缺損為模型，將載有骨形成蛋白-2（bone morphogenetic protein 2，BMP-2）的絲素水凝膠填充在納米纖維聚已內(nèi)酯（polycaprolactone，PCL）網(wǎng)眼管中用于大骨缺損的治療，研究結(jié)果表明，絲素水凝膠是 BMP-2的優(yōu)良載體，而且在實驗結(jié)束時被完全降解，避免了支架在構(gòu)建組織時所產(chǎn)生的免疫排斥等不良反應(yīng)。

除了傳統(tǒng)的將絲素水凝膠用于單獨包載蛋白或細(xì)胞外，Davis等[32]將分離出來的胰島細(xì)胞直接用水凝膠包載，同時共載 ECM 蛋白及間充質(zhì)干細(xì)胞用于治療1型糖尿病。結(jié)果表明，共載時胰島素的分泌量是對照的3.2倍，同時囊化胰島細(xì)胞的功能基因表達(dá)量及相關(guān)功能蛋白的表達(dá)量均增加，同時去分化蛋白表達(dá)量降低，這些結(jié)果說明了以絲素水凝膠為載體用于胰島的體外移植是有望達(dá)到的。此外，作者實驗室利用超聲法制備了絲素水凝膠并將其與微囊化細(xì)胞復(fù)合，水凝膠結(jié)構(gòu)可以為微囊化細(xì)胞提供良好的營養(yǎng)及代謝運輸，微囊可以為細(xì)胞提供較大的比表面積，便于細(xì)胞的黏附和增殖。圖 3所示便為絲素水凝膠與微囊化細(xì)胞的復(fù)合體。

水凝膠由于它的高含水量以及與天然組織相似的力學(xué)性能而被用于藥物載體及組織工程中。其中可注射水凝膠可以降低凝膠在應(yīng)用過程中的侵襲性，這反過來還可以降低手術(shù)成本及康復(fù)成本[33]?？勺⑸渌z主要用于一些有空間可供注射的位點，并可通過以下方式制備：物理交聯(lián)、化學(xué)交聯(lián)、酶誘導(dǎo)交聯(lián)和離子交聯(lián)/自組裝。Zhang等[34]利于超聲誘導(dǎo)制備出可注射絲素水凝膠并包載血管內(nèi)皮生長因子-165（vascular endothelial growth factor，VEGF165）及BMP-2用于提升上頜竇底，結(jié)果表明共載兩種生長因子的水凝膠系統(tǒng)提升上頜竇底較明顯，且組織內(nèi)有血管生成。

圖3 復(fù)合物及復(fù)合物內(nèi)細(xì)胞的圖像

2.5 其他結(jié)構(gòu)

除了上述支架結(jié)構(gòu)外，還有一些其他支架結(jié)構(gòu)被用于不同的領(lǐng)域。Wray等[35]將聚四氟乙烯包裹的不銹鋼絲（直徑152～787 μm）線性排列構(gòu)建絲素支架中孔洞通道，并將這種支架用于大尺寸組織的構(gòu)建，其中不銹鋼絲產(chǎn)生的孔洞可用于體外血管化的構(gòu)建。除此這外，在絲素支架表面涂層磷灰石用于骨組織構(gòu)建[36]、絲素與生物玻璃復(fù)合用于骨質(zhì)疏松的治療等也在一定程度上擴(kuò)展了絲素蛋白在組織工程中的應(yīng)用。

3 總結(jié)與展望

通過以上對絲素支架的不同結(jié)構(gòu)在組織工程中的應(yīng)用可知，絲素在組織工程支架中發(fā)揮著較大作用。但如何有效地、精準(zhǔn)地模仿天然組織以用于體外構(gòu)建組織，還需要進(jìn)一步研究天然組織的結(jié)構(gòu)（分子及原子水平），并尋找合適的材料及方法精確地模擬組織結(jié)構(gòu)。有理由相信，隨著組織工程的進(jìn)一步發(fā)展，絲素在組織工程中的應(yīng)用前景將更為廣闊。

[1]Mandal B B，Kundu S C. Cell proliferation and migration in silk fibroin 3D scaffolds[J]. Biomaterials，2009，30：2956-2965.

[2]Rockwood D N，Gil E S，Park S H，et al. Ingrowth of human mesenchymal stem cells into porous silk particle reinforced silk composite scaffolds：An in vitro study[J]. Acta Biomaterialia，2011，7：144-151.

[3]Hofmann S，Knecht S，Langer R，et al. Cartilage-like tissue engineering using silk scaffolds and mesenchymal stem cells[J].Tissue Engineering，2006，12：2729-2738.

[4]Mauney J R，Nguyen T，Gillen K，et al. Engineering adipose-like tissue in vitro and in vivo utilizing human bone marrow and adipose-derived mesenchymal stem cells with silk fibroin 3D scaffolds[J]. Biomaterials，2007，28：5280-5290.

[5]Gil ES，Park SH，Marchant J，et al. Response of human corneal fibroblasts on silk film surface patterns[J]. Macromolecular Bioscience，2010，10：664-673.

[6]Lovett M，Cannizzaro C，Daheron L，et al. Silk fibroin microtubes for blood vessel engineering[J]. Biomaterials，2007，28：5271-5279.

[7]House M，Sanchez C C，Riceet W L，et al. Cervical tissue engineering using silk scaffolds and human cervical cells[J].Tissue Engineering Part A，2010，16：2101-2112.

[8]Wharram S E，Zhang X，Kaplan D L，et al. Electrospun silk material systems for wound healing[J]. Macromolecular Bioscience，2010，10：246-257.

[9]Tanaka K，Inoue S，Mizuno S. Hydrophobic interaction of P25，containing Asn-linked oligosaccharide chains，with the H-L complex of silk fibroin produced by Bombyx mori[J]. Insect Biochemistry and Molecular Biology，1999，29（3）：269-276.

[10]Vepari C，Kaplan D L. Silk as a biomaterial[J]. Progress in Polymer Science，2007，32：991-1007.

[11]Altman G H，Diaz F，Jakuba C，et al. Silk-based biomaterials[J].Biomaterials，2003，24：401-416.

[12]Park S H，Gil E S，Park S H，et al. Relationships between degradability of silk scaffolds and osteogenesis[J]. Biomaterials，2010，31：6162-6172.

[13]Correia C，Bhumiratana S，Yan L P. Development of silk-based scaffolds for tissue engineering of bone from human adipose-derived stem cells[J]. Acta Biomaterialia，2012，8：2483-2492.

[14]Oliveira A L，Sun L，Kim H J. Aligned silk-based 3-D architectures for contact guidance in tissue engineering[J]. Acta Biomaterialia，2012，8：1530-1542.

[15]Wang Y，Bella E，Lee C S D，et al. The synergistic effects of 3-D porous silk fibroin matrix scaffold properties and hydrodynamic environment in cartilage tissue regeneration[J]. Biomaterials，2010，31：4672-4681.

[16]Hofmann S，Hagenmüller H，Koch A M，et al. Control of in vitro tissue-engineered bone-like structures using human mesenchymal stem cells and porous silk scaffolds[J]. Biomaterials，2007，28：1152-1162.

[17]Makaya K，Terada S，Ohgo K，et al. Comparative study of silk fibroin porous scaffolds derived from salt/water and sucrose/hexafluoroisopropanol in cartilage formation[J]. Journal of Bioscience and Bioengineering，2009，108：68-75.

[18]Zhang X，Reagan M R，Kaplan D L. Electrospun silk biomaterial scaffolds for regenerative medicine[J]. Advanced Drug Delivery Reviews，2009，61：988-1006.

[19]Roohani-Esfahani S I，Lu Z F，Li J J，et al. Effect of self-assembled nanofibrous silk/polycaprolactone layer on the osteoconductivity and mechanical properties of biphasic calcium phosphate scaffolds[J]. Acta Biomaterialia，2012，8：302-312.

[20]Lu Q，Wang X，Lu S，et al. Nanofibrous architecture of silk fibroin scaffolds prepared with a mild self-assembly process[J].Biomaterials，2011，32：1059-1067.

[21]Li X T，Zhang Y，Chen G Q. Nanofibrous polyhydroxyalkanoate matrices as cell growth supporting materials[J]. Biomaterials，2008，29：3720-3728.

[22]Li C，Vepari C，Jin H J，et al. Electrospun silk-BMP-2 scaffolds for bone tissue engineering[J]. Biomaterials，2006，27：3115-3124.

[23]Santos M I，Tuzlakoglu K，F(xiàn)uchs S，et al. Endothelial cell colonization and angiogenic potential of combined nano- and micro-fibrous scaffolds for bone tissue engineering[J].Biomaterials，2008，29：4306-4313.

[24]Sahoo S，Lok Toh S，Goh H. PLGA nanofiber-coated silk microfibrous scaffold for connective tissue engineering[J].Journal of Biomedical Materials Research B，2010，95：19-28.

[25]Bondar B，F(xiàn)uchs S，Motta A，et al. Functionality of endothelial cells on silk fibroin nets：Comparative study of micro- and nanometric fibre size[J]. Biomaterials，2008，29：561-572.

[26]Bhattacharjee M，Miot S，Gorecka A，et al. Oriented lamellar silk fibrous scaffolds to drive cartilage matrix orientation：Towards annulus fibrosus tissue engineering[J]. Acta Biomaterialia，2012，8：3313-3325.

[27]Li X，Snedeker J G. Wired silk architectures provide a biomimetic ACL tissue engineering scaffold[J]. Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials，2013，22：30-40.

[28]Liu H，F(xiàn)an H，Wang Y，et al. The interaction between a combined knitted silk scaffold and microporous silk sponge with human mesenchymal stem cells for ligament tissue engineering[J].Biomaterials，2008，29：662-674.

[29]Stoppato M，Stevens H Y，Carletti E，et al. Effects of silk fibroin fiber incorporation on mechanical properties，endothelial cell colonization and vascularization of PDLLA scaffolds[J].Biomaterials，2013，34：4573-4581.

[30]Fini M，Motta A，Torricelli P，et al. The healing of confined critical size cancellous defects in the presence of silk fibroin hydrogel[J]. Biomaterials，2005，26：3527-3536.

[31]Diab T，Pritchard E M，Uhrig B A，et al. A silk hydrogel-based delivery system of bone morphogenetic protein for the treatment of large bone defects[J]. Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials，2012，11：123-131.

[32]Davis N E，Beenken-Rothkopf L N，Mirsoian A，et al. Enhanced function of pancreatic islets co-encapsulated with ECM proteins and mesenchymal stromal cells in a silk hydrogel[J].Biomaterials，2012，33：6691-6697.

[33]Overstreet D J，Dutta D，Stabenfeldt S E. Injectable hydrogels[J].Journal of Polymer Science Part B：Polymer Physics，2012，50：881-903.

[34]Zhang W，Wang X，Wang S，et al. The use of injectable sonication-induced silk hydrogel for VEGF165and BMP-2 delivery for elevation of the maxillary sinus floor[J].Biomaterials，2011，32：9415-9424

[35]Wray L S，Rnjak-Kovacina J，Mandal B B，et al. A silk-based scaffold platform with tunable architecture for engineering critically-sized tissue constructs[J]. Biomaterials，2012，33：9214-9224.

[36]Zhao J，Zhang Z，Wang S，et al. Apatite-coated silk fibroin scaffolds to healing mandibular border defects in canines[J].Bone，2009，45：517-527.