雷 萍，張文雋，吳亞召，李峻志，祁 鵬，戴 璐，張黎光，吳小杰，李安利

(陜西省微生物研究所，陜西西安 710043)

桑黃Phellinus baumii，俗稱火木層孔菌、針層孔菌、桑耳、鮑氏層孔菌、針裂蹄，屬于擔(dān)子菌綱、多孔菌目，多孔菌科，層孔菌屬，是一種多年生藥用真菌[1]。主要分布于秦嶺、陜西與甘肅交界的子午嶺地區(qū)。生長(zhǎng)于楊、桑、柳、白樺、櫸樹(shù)、桃等闊葉樹(shù)的枯立木及樹(shù)干上[2]。桑黃因其寄生樹(shù)種不同，其形狀、顏色、以及含有的成分亦不同[3]。目前，市場(chǎng)上供應(yīng)的主要有桑樹(shù)桑黃、松樹(shù)桑黃、楊樹(shù)桑黃、白樺桑黃等。桑樹(shù)桑黃為極品，價(jià)格最高。

桑黃是一種珍貴的藥用真菌[4－5]，是我國(guó)最有發(fā)展前景的23種藥用真菌之一，有“森林黃金”之美稱?！吨兴幋筠o典》記載，其可治血崩、血淋、帶下、閉經(jīng)等婦科疾病[6]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)桑黃多糖具有促使腫瘤細(xì)胞自我毀滅的誘導(dǎo)細(xì)胞自殺活性作用，可以防止腫瘤細(xì)胞附著于體內(nèi)，同時(shí)確認(rèn)擁有抑制轉(zhuǎn)移作用[7]。是目前公認(rèn)的生物領(lǐng)域治療腫瘤有效率排在第一位的高等真菌[8]。桑黃產(chǎn)品作為抗腫瘤藥物具有極大的藥用價(jià)值和開(kāi)發(fā)潛力。

醫(yī)藥市場(chǎng)桑黃需求量增大，價(jià)格高導(dǎo)致對(duì)桑黃的無(wú)序采集，自然界中野生桑黃資源匱乏，面臨枯竭。加上桑黃自身生理生態(tài)的特殊性和復(fù)雜性及外部條件的制約，人工栽培存在一定的困難，極大地限制了桑黃在臨床上的應(yīng)用。本試驗(yàn)針對(duì)現(xiàn)有桑黃人工栽培中的子實(shí)體產(chǎn)量低、質(zhì)量差(不成形)等問(wèn)題，提供一種新的桑黃人工代料栽培方法，找出適合桑黃子實(shí)體發(fā)育的空氣相對(duì)濕度、溫度、光照及栽培模式等環(huán)境因子和管理措施，具有子實(shí)體產(chǎn)量高、性狀好等優(yōu)點(diǎn)，為實(shí)現(xiàn)桑黃基地化、規(guī)范化栽培提供可靠的技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 桑黃菌株

陜西省微生物研究所菌種資源中心第三研究室研究人員2006年對(duì)采自秦巴山區(qū)桑樹(shù)上的野生新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離、培養(yǎng)。

1.2 培養(yǎng)基

1.2.1 母種培養(yǎng)基 綜合PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯(去皮、煮汁)200 g，葡萄糖 20 g，蛋白胨 5 g，KH2PO41g，MgSO40.5 g，瓊脂 18 ～ 20 g，酵母膏3.5 g，水 1 000 mL，pH 自然。

1.2.2 原種培養(yǎng)基 麥粒培養(yǎng)基:小麥粒98%，石灰1%，石膏1%，含水量60%。

1.2.3 栽培種培養(yǎng)基 ① 木屑78%，麩皮20%，石膏1%，石灰1%，含水量60% ～62%;②棉籽殼78%，麩皮20%，石灰1%，石膏1%，含水量62% ～65%;③ 麥粒88%，木屑10%，碳酸鈣2%，含水量60%;④ 木屑41%，棉籽殼41%，麩皮15%，石膏1%，蔗糖1%，石灰1%，含水量60% ～62%。

1.2.4 栽培料培養(yǎng)基 ①桑樹(shù)木屑80%，稻殼2%，麩皮15%，石膏1%，蔗糖1%，石灰1%，含水量60% ～62%;② 桑樹(shù)木屑76%，稻殼2%，玉米粉18%，蔗糖1%，石灰1%，含水量60% ～62%;③ 桑樹(shù)木屑76%，稻殼2%，玉米粉10%，麩皮10%，蔗糖1%，石灰1%，含水量60% ～62%;④ 棉籽殼78%，麩皮20%，石灰1%，石膏1%，含水量62% ～65%;⑤ 木屑41%，棉籽殼41%，麩皮15%，石膏1%，蔗糖1%，石灰1%，含水量60%～62%。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 菌種培養(yǎng)

1)母種培養(yǎng)

母種培養(yǎng)基配方為綜合PDA，常規(guī)滅菌后于接種箱內(nèi)無(wú)菌操作接種，其后置于培養(yǎng)箱26℃ ～30℃條件下培養(yǎng)，約10天長(zhǎng)滿。長(zhǎng)滿即可接原種。

2)原種培養(yǎng)

按原種培養(yǎng)基配方稱料，麥粒煮熟至無(wú)白心為止，用規(guī)格為13 cm×19 cm×0.005 cm一端封口的聚乙烯菌袋裝袋，裝滿袋后另一端套以1.5 cm×2.0 cm規(guī)格的塑料頸圈，并用聚乙烯塑料紙封口，高壓滅菌。待冷卻后于接種箱內(nèi)常規(guī)無(wú)菌操作接種。置于26℃ ～30℃無(wú)光照條件下培養(yǎng)，約25～30天長(zhǎng)滿。滿袋即可接栽培種。

1.3.2 栽培種培養(yǎng)基配方試驗(yàn) 按1.2.3所設(shè)栽培種培養(yǎng)基配方稱料，每個(gè)配方接種30袋，試驗(yàn)重復(fù)5次，常規(guī)拌料，用規(guī)格為13 cm×25 cm×0.005 cm一端封口的聚乙烯菌袋裝袋，裝滿袋后另一端套以1.5 cm×2.0 cm規(guī)格的塑料頸圈，并用聚乙烯塑料紙封口，高壓滅菌。待冷卻至室溫后，于接種箱內(nèi)常規(guī)無(wú)菌操作接種。置于26℃ ～28℃無(wú)光照條件下培養(yǎng)，觀察并記錄菌絲生長(zhǎng)情況。

1.3.3 栽培料培養(yǎng)基配方試驗(yàn) 按1.2.4所設(shè)5個(gè)栽培料培養(yǎng)基配方分別稱料，試驗(yàn)5次重復(fù)，常規(guī)拌料，用規(guī)格為17 cm×33 cm×0.005 cm的聚乙烯菌袋裝袋，兩端均套以1.5 cm×2.0 cm規(guī)格的塑料頸圈，并用聚乙烯塑料紙封口，常壓滅菌。分別接種桑黃菌種，每個(gè)配方接種30袋，將接種好的菌袋移入消過(guò)毒的培養(yǎng)室內(nèi)，分層排放。發(fā)菌期間培養(yǎng)室內(nèi)保持25℃ ～26℃，遮光培養(yǎng)，滿袋后，進(jìn)行出菇管理。觀察并記錄菌絲生長(zhǎng)情況和出黃情況。

1.3.4 栽培模式選擇試驗(yàn) 將1.3.3選擇的最佳栽培料配方配制、制袋、接種，發(fā)菌，菌袋在發(fā)菌過(guò)程中溫度保持在25℃ ～28℃，遮光培養(yǎng)。接種5天后，培養(yǎng)室適當(dāng)通風(fēng)，每天通風(fēng)30 min，每隔5～7天翻袋一次，當(dāng)菌絲體發(fā)至接近滿袋，松開(kāi)料袋口，留一點(diǎn)縫隙，待菌絲長(zhǎng)滿后移入出菇棚，進(jìn)行不同方式出菇處理。設(shè)2個(gè)處理，每處理做200袋，每袋裝干料重0.5 kg，重復(fù)3次，產(chǎn)量取平均值。觀察并記錄出黃情況。

處理1:代料栽培直接出黃

一般代料栽培的栽培袋是兩端接種，兩端出菇，出黃時(shí)菇棚溫度保持在25℃ ～30℃，最低不可少于18℃，最高不超過(guò)35℃。始終保持地面潮濕，每天向棚內(nèi)噴水3～4次，棚內(nèi)空氣相對(duì)濕度達(dá)到90%～95%。子實(shí)體發(fā)生期提供300lx左右散射光。每天通風(fēng)換氣至少2次，換氣時(shí)間可根據(jù)外界環(huán)境溫度調(diào)節(jié)，溫度低時(shí)中午換氣，溫度高時(shí)早晚?yè)Q氣。如果出菇期間棚內(nèi)溫度過(guò)高也可隨時(shí)通過(guò)換氣降溫，原基膨大3～5天，逐漸形成菌蓋，要增加噴水保濕，提高濕度，棚內(nèi)地面土壤濕度達(dá)50% ～60%。

處理2:半脫袋覆土栽培方式

在菌絲發(fā)滿、原基形成時(shí)，開(kāi)袋，上半部保留6 cm左右袋，下半部全部脫去，埋到土里。其他管理方式基本同處理1。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同栽培種培養(yǎng)基對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響

由表1可以看出，桑黃菌絲菌種在不同栽培種培養(yǎng)料上的生長(zhǎng)情況有所差異，配方③ 最佳，配方②，④次之，配方①最差。桑黃菌絲在配方③生長(zhǎng)速度快，長(zhǎng)勢(shì)旺盛，長(zhǎng)滿袋所需時(shí)間短。桑黃同其他食藥用菌均為好氣菌，而桑黃菌絲生活力弱，配方① 菌袋通風(fēng)太差造成菌絲生長(zhǎng)勢(shì)弱。

2.2 不同栽培基質(zhì)對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響

由表2可知，桑黃菌絲在配方②生長(zhǎng)速度最快，接種35天長(zhǎng)滿袋，配方③ 在38天長(zhǎng)滿袋，速度次于配方②;觀察菌絲生長(zhǎng)過(guò)程發(fā)現(xiàn)配方②桑黃菌絲長(zhǎng)勢(shì)快，菌絲生理發(fā)育也快，在滿袋前菌絲顏色已開(kāi)始發(fā)生變化。配方③菌絲生長(zhǎng)過(guò)程中，菌絲生長(zhǎng)速度快，生理發(fā)育正常，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)菌絲滿袋前菌絲顏色變色現(xiàn)象。因此，確定配方③作為桑黃人工栽培試驗(yàn)最適培養(yǎng)基。

表1 4種不同栽培種培養(yǎng)基對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響Tab.1 Effect of four different culture mediums on mycelial growth of Phellinus igniarius

表2 5種不同栽培基質(zhì)對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響Tab.2 Effects of five different substrates on mycelial growth of Phellinus igniarius

2.3 不同栽培模式對(duì)桑黃菌子實(shí)體生產(chǎn)量的影響

由表3可知，桑黃菌采用半脫袋覆土出黃栽培模式產(chǎn)量高，這種方式菌袋的保水性好;代料兩頭出黃產(chǎn)量差，由于出黃時(shí)間較長(zhǎng)，失水比較嚴(yán)重。

表3 2種不同栽培模式對(duì)桑黃子實(shí)體產(chǎn)量的影響Tab.3 Effects of two different cultivation modes on fruitbody yield of Phellinus igniarius

3 討論

1)秦巴山區(qū)野生桑黃可經(jīng)過(guò)人工馴化進(jìn)行代料栽培產(chǎn)生桑黃子實(shí)體，適合的培養(yǎng)基為桑樹(shù)木屑76%，稻殼2%，玉米粉10%，麩皮10%，蔗糖1%，石灰1%，含水量60% ～62%?？諝庀鄬?duì)濕度90% ～95%、溫度25℃ ～28℃、光照200～300 lx。

2)通過(guò)栽培模式的探索，結(jié)果表明:采用“裝袋—滅菌—接種—半脫袋—覆土”的半脫袋覆土栽培模式能有效提高桑黃的產(chǎn)量。

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