王 磊，梁 穎，付 彬，王 雷

(天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，天津300120)

藥物制劑

皮炎顆粒三方的制備與質(zhì)量研究*

王 磊，梁 穎，付 彬，王 雷

(天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，天津300120)

目的:研究皮炎顆粒三方的制備方法，建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法:采用一步干燥制粒法制備皮炎顆粒三方;薄層色譜法鑒別黃芩、苦參;高效液相色譜法測(cè)定制劑中黃芩苷的含量。結(jié)果:制備顆粒均勻;供試品色譜中，在與對(duì)照品、對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。黃芩苷的進(jìn)樣量在0.47～1.70 mg之間，峰面積與進(jìn)樣量呈線性關(guān)系。平均回收率為100.39%(n=6)，RSD為0.43%。結(jié)論:一步干燥制粒法制備皮炎顆粒三方，方法簡便，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可以控制本制劑的整個(gè)生產(chǎn)過程。

皮炎顆粒三方，一步干燥制粒法，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

皮炎顆粒(Ⅲ)具有清熱、利濕、解毒之功效，用于治療濕熱型濕疹、蕁麻疹等皮膚病，為我國中西醫(yī)結(jié)合治療皮膚病專家邊天羽主任醫(yī)師經(jīng)驗(yàn)方。在制粒工藝上引進(jìn)噴霧干燥技術(shù)，并根據(jù)天津市食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑再注冊(cè)的要求，對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂、完善，降低顆粒劑生產(chǎn)周期，提高顆粒劑生產(chǎn)工藝及藥品的質(zhì)量控制檢測(cè)水平。

1 儀器與試藥

1.1 儀器超聲清洗儀(1990 QTD，超聲波頻率:40 KHz，深圳固特超聲醫(yī)療設(shè)備有限公司)，島津20A高效液相色譜儀(日本島津)，離心機(jī)(800型，轉(zhuǎn)鼓轉(zhuǎn)速: 0～4000 r/min，金壇市白塔金昌實(shí)驗(yàn)儀器廠)。

1.2 試藥黃芩苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，110715－201117)，苦參對(duì)照藥材(中國藥品生物制品檢定所，121019－200304)，乙醇為色譜純，乙酸乙酯、甲醇等均為分析純，皮炎顆粒三方(本院自制，批號(hào)2013070218，2013070319，2013070420)。

2 制劑的制備［1］

取土茯苓、地黃、茵陳、薏苡仁、黃芩、金銀花、玄參、茯苓皮、白鮮皮、苦參、梔子等11味飲片加水煎煮兩次，第一次2 h，第二次1 h，濾過，濾液合并，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.18～1.22(80℃)的清膏，加入清膏量20%～23%的淀粉、0%～1%的二氧化硅為輔料，噴霧干燥，制成1 000 g顆粒。

3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

3.1 黃芩的鑒別［2］

3.1.1 供試品溶液的制備取本品4袋的內(nèi)容物，研細(xì)，加甲醇20 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 ml使溶解，用鹽酸調(diào)pH值至1～2，用乙酸乙酯提取兩次，每次20 ml，水液備用;合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5 ml使溶解，作為供試品溶液。

3.1.2 對(duì)照品溶液的制備取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.1.3 陰性樣品溶液的制備按處方比例，取除黃芩外的其他藥材，按制備方法的工藝制成顆粒，再按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。

3.1.4 薄層條件照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取供試品、對(duì)照品和陰性樣品溶液各2～6 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水(5∶3∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵溶液。

3.1.5 結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

3.2 苦參的薄層鑒別［2］

3.2.1 供試品溶液的制備取本品4袋的內(nèi)容物，研細(xì)，加濃氨試液1 ml、三氯甲烷25 ml，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?.5 ml使溶解，作為供試品溶液。

3.2.2 對(duì)照藥材溶液的制備取苦參對(duì)照藥材粉末1 g，加濃氨試液1.0 ml、三氯甲烷25 ml，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄? ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

圖1 黃芩苷薄層色譜圖

3.2.3 陰性樣品溶液的制備按處方比例，取除苦參外的其他藥材，按制備方法的工藝制成顆粒，再按上述供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。

3.2.4 薄層條件照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品、供試品和陰性樣品溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－丙酮－乙酸乙酯－濃氨試液(2∶3∶4∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。

3.2.5 結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品溶液無干擾。結(jié)果見圖2。

圖2 苦參薄層色譜圖

3.3 含量測(cè)定［3］

3.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇－水－磷酸(45∶55∶0.2)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長為315 nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

3.3.2 溶液制備

3.3.2.1 對(duì)照品溶液的制備取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每1 ml含黃芩苷0.1 mg的溶液，即得。

3.3.2.2 供試品溶液的制備取“裝量差異”項(xiàng)下的本品約1.0 g，精密稱定，置100 ml量瓶中，加70%乙醇60 ml，超聲處理30 min，放置至室溫，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液，即得。

3.3.2.3 陰性樣品溶液的制備取除去黃芩的其他飲片，按處方配比，精密稱取輔料，按“3.3.2.2”項(xiàng)制備方法操作，制得陰性樣品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10 μl注入液相色譜儀測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見圖3。

圖3 對(duì)照品(A)供試品(B)陰性樣品(C)HPLC圖譜

3.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取“3.3.2.1”項(xiàng)下黃芩苷對(duì)照品溶液(100 μg/ml)3.0、4.0、5.0、6.0、7.0和8.0 ml分別置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述6種溶液各10 μl注入液相色譜儀，按“3.3.1”項(xiàng)下色譜條件分析，測(cè)定各自峰面積。以峰面積值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=3 325 215.95 X－67 119.76(r= 0.999 9)。黃芩苷的進(jìn)樣量在0.47～1.70 mg之間，峰面積與進(jìn)樣量呈線性關(guān)系。

3.3.4 精密度試驗(yàn)取對(duì)照品溶液，按“3.3.1”色譜條件分析，精密吸取10 μl注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，樣品中黃芩苷峰面積的RSD為2.01%。結(jié)果表明進(jìn)樣精密度符合要求。

3.3.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品(2013070218)，按“3.3.2.2”項(xiàng)下制備方法制備樣品液，按照“3.3.1”項(xiàng)下色譜條件分析，分別精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定并計(jì)算各自含量，平均含量為5.17 mg/g (n=6);RSD為0.51%，結(jié)果表明，重復(fù)性符合要求。

3.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品(2013070218)，按“3.3.2.2”項(xiàng)下制備方法制備樣品液，按照“3.3.1”項(xiàng)下色譜條件分析，精密吸取10 μl，分別在0、4、6、10和24 h注入液相色譜儀，測(cè)定，黃芩苷RSD為1.04%，結(jié)果表明，本品在24 h內(nèi)測(cè)定，結(jié)果穩(wěn)定。

3.3.7 回收率試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品(2013070218)，研細(xì)，精密稱取1.0 g，共6份;精密加入黃芩苷對(duì)照品約24、20及16 mg各2份，按照“3.3.2.2”項(xiàng)下方法制備供回收率測(cè)定用供試品溶液，按照“3.3.1”項(xiàng)下色譜條件分析，精密吸取10 μl注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算平均回收率為100.39%(n=6)，RSD為0.43%，結(jié)果表明，回收率符合要求，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)

3.3.8 樣品測(cè)定取樣品3批按“3.3.2.2”項(xiàng)下方法操作，按“3.3.1”項(xiàng)下色譜條件分別測(cè)定3批樣品含量，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3.3.9 含量限度制定黃芩苷是黃芩的主要成分，在飲片中含量應(yīng)不得少于6 mg/g［1］。平均每袋裝量為3.0 g，每1 g含黃芩苷(C21H18O11)計(jì)，應(yīng)為不低于4.8 mg。

3.4 粒度不能通過一號(hào)篩與能通過五號(hào)篩的總和不得超過15%，符合(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅪB第二法，雙篩分法)測(cè)定要求。

3.5 水分不得過6.0%。

3.6 溶化性取供試品1袋，加熱水200 ml，攪拌5 min，立即觀察，應(yīng)全部溶化或呈混懸狀?？扇茴w粒應(yīng)全部溶化，允許有輕微渾濁;混懸顆粒應(yīng)能混懸均勻。

3.7 裝量差異裝量差異限度應(yīng)在±7%范圍內(nèi)，依(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅠC)顆粒劑裝量差異法檢查。

4 討論

本標(biāo)準(zhǔn)黃芩鑒別中，其提取方法也可采用70%乙醇溶解，濾過，蒸干后加水溶解過聚酰胺柱的方法，其結(jié)果與“3.1”結(jié)果一致。但采用70%乙醇溶解，蒸干過程因溶媒含有水，需較長時(shí)間，且過柱有時(shí)不完全，有可能影響最終結(jié)果。

黃芩苷對(duì)照品色譜圖中有時(shí)主峰有拖尾現(xiàn)象，主要是因?yàn)閷?duì)照品中含有水分略高，可以干燥后使用即可消除拖尾。

1楊新建，黃志軍，王雷.皮炎顆粒噴霧干燥工藝研究［J］.天津藥學(xué)，2004，16(3):13

2中國藥典［S］.一部.2010:附錄6，附錄34，附錄65

3楊新建，王雷，梁穎.黃芩苷滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［A］.2009全國中藥創(chuàng)新與研究論壇學(xué)術(shù)論文集［C］.北京:2009:353－356

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A

1006-5687(2014)01-0024-03

2013-09-02