黃儒添 廖少平 葉小玲

（廣東省博羅縣疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科，廣東 惠州 516100）

牛奶中三聚氰胺殘留量的高效液相色譜檢測分析

黃儒添 廖少平 葉小玲

（廣東省博羅縣疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科，廣東 惠州 516100）

目的 利用高效液相色譜法對(duì)牛奶樣品中三聚氰胺殘留量進(jìn)行測定。方法 抽取本縣牛奶批發(fā)或零售點(diǎn)的50份牛奶樣品，均采用高效液相色譜法測定樣品中三聚氰胺含量，對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析探討。結(jié)果 三聚氰胺在1.0～100 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程：y=39500x-1920（y為樣品峰面積，x為樣品濃度），相關(guān)系數(shù)r=0.9997；檢測方法準(zhǔn)確度與精密度均符合殘留分析的要求；50份牛奶樣品中48份未檢出三聚氰胺，1份殘留量0.7 mg/kg（未超標(biāo)），1份6.2 mg/kg（超標(biāo)），本次抽檢牛奶樣品三聚氰胺殘留量超標(biāo)率2.0%。結(jié)論 高效液相色譜檢測分析牛奶中三聚氰胺殘留量的操作簡便，重現(xiàn)性好，可滿足我科對(duì)液態(tài)牛奶中三聚氰胺殘留量的分析檢測要求。

三聚氰胺；牛奶；高效液相色譜法；檢測

此前，在嬰兒乳制品中發(fā)現(xiàn)了三聚氰胺而引發(fā)了史上最大規(guī)模的全球食品召回事件。一些不法商人將三聚氰胺加入劣質(zhì)牛奶中用以提高劣質(zhì)牛奶的表觀蛋白質(zhì)含量，人服用后會(huì)導(dǎo)致腎結(jié)石，嬰幼兒的臟器功能發(fā)育未完全，攝入三聚氰胺可能死亡。因此，檢測原料乳與乳制品中三聚氰胺的殘留量，對(duì)保護(hù)消費(fèi)者的經(jīng)濟(jì)權(quán)益及人身安全有著重要意義。三聚氰胺檢測方法包括重量法、苦味酸法、電位滴定法等[1,2]。本文對(duì)50份牛奶樣品采用高效液相色譜法檢測三聚氰胺含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

為本縣每一個(gè)牛奶批發(fā)站、零售站編上號(hào)碼，用隨機(jī)數(shù)字表法從中抽取50個(gè)作為調(diào)查對(duì)象，取新鮮牛奶樣品進(jìn)行三聚氰胺殘留量測定。

1.2 儀器及試劑

1.2.1 儀器：Waters 2695高效液相色譜儀；Waters 2487紫外檢測器；Waters SCX陽離子交換固相萃取柱（60 mg/3 mL）；固相萃取裝置；分析天平（感量0.00001 g）；離心機(jī)（＞10000 r/min）；振蕩器；渦旋混合器；超聲波水??；50 mL帶塞離心管；0.22 μm濾膜；有機(jī)相。

1.2.2 試劑：三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品（含量99.6%，國家飼料中心提供）；檸檬酸（分析純）；水（超純水）；甲醇（色譜純）；乙腈（色譜純）；氨水（濃度25%～28%）；三氯乙酸（分析純）；辛烷磺酸鈉（色譜純）；鹽酸溶液（濃度0.1 mol/L）；乙腈水溶液（濃度75%）；氨水甲醇溶液（含氨水5%）；三氯乙酸溶液（濃度1%）。

1.3 溶液配制

1.3.1 流動(dòng)相B：稱取檸檬酸2.10 g、辛烷磺酸鈉2.16 g于1000 mL容量瓶中，用超純水溶解、定容到1000 mL。

1.3.2 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)液：精密稱取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品50 mg于100 mL量瓶中，用乙腈溶解、定容，置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩７謩e精密吸取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)中間液用流動(dòng)相B稀釋、定容至10 mL容量瓶中，得到1.0、2.0、20.0、40.0、80、100 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)液。

1.3.3 待測樣品溶液：準(zhǔn)確稱取牛奶樣品5 g于50 mL帶塞離心管中，加乙腈5 mL、三氯乙酸溶液15.0 mL，劇烈振蕩25 min，離心5 min，取上清液待測。

1.4 測定方法

陽離子交換固相萃取柱依次用3.0 mL甲醇、3.0 mL超純水活化，加入5.0 mL待測樣品溶液，依次用3.0 mL鹽酸（0.1 mol/L）、3.0 mL甲醇洗柱，用3.0 mL氨水甲醇溶液洗脫收集，用50 ℃氮?dú)獯蹈伞?.0 mL流動(dòng)相B溶解殘?jiān)?，有機(jī)相濾膜過濾后供高效液相色譜分析。稱取空白牛奶5 g按以上方法處理后進(jìn)行空白試驗(yàn)，取空白牛奶5 g加入適量三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)液處理后按以上方法處理后進(jìn)行色譜分析。

1.5 含量計(jì)算

待測樣品溶液中三聚氰胺殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)x表示，單位mg/kg，x=[A×Cs×V×1000）/(As×m×1000)]×f。A：待測樣品溶液中三聚氰胺的峰面積，Cs：三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)液中三聚氰胺的濃度（μg/mL），V：溶解樣品最終定容的體積，As：三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)液中三聚氰胺的峰面積，m：樣品的稱取量（g），f：分取倍數(shù)（20/5）。

2 結(jié)果分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

三聚氰胺在1.0～100mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程：y=39500x-1920（y為樣品峰面積，x為樣品濃度），相關(guān)系數(shù)r=0.9997。

2.2 方法的準(zhǔn)確度及精密度分析

稱取空白牛奶5g進(jìn)行空白試驗(yàn)，色譜分析結(jié)果顯示樣品中的雜質(zhì)峰對(duì)三聚氰胺出峰無影響。取空白牛奶5g加入3個(gè)不同濃度的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)液處理后進(jìn)行色譜分析，每個(gè)樣品重復(fù)分析3次，回收率范圍為89.0%～105.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差3.14%～4.97%，其準(zhǔn)確度與精密度均符合殘留分析的要求。樣品添加回收率見表1。

表1 牛奶樣品添加回收率分析

2.3 樣品分析

50份牛奶樣品中，48份未檢出三聚氰胺，1份檢出三聚氰胺殘留量0.7 mg/kg，1份檢出三聚氰胺殘留量6.2 mg/kg。按照我國衛(wèi)生部門的規(guī)定，液態(tài)奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值2.5 mg/kg，本次抽檢的牛奶樣品中三聚氰胺殘留量超標(biāo)率為2.0%（1/50）。

3 討 論

三聚氰胺簡稱三胺，學(xué)名三氨三嗪，分子式C3N6H6，本品可溶于乙腈、甲醇、甲醛、乙酸等，在乙二醇、乙醇、甘油中微溶，難溶于水，可于硫酸、鹽酸、草酸等成鹽，是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料[3]。三聚氰胺的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，本品雖無遺傳毒性也無致癌作用，但攝入量大、時(shí)間長可在泌尿系統(tǒng)形成結(jié)石，引起腎功能衰竭，甚至死亡。

三鹿牌嬰幼兒奶粉時(shí)間發(fā)生后，食品安全問題再次引起人們的關(guān)注，得到國家高度重視。國家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T22388-2008）中規(guī)定了原料奶、乳制品、含乳制品中三聚氰胺的三種檢測方法為HPLC法、HPLC-MS/MS法、GC-MS/MS法。高效液相色譜檢測分析牛奶中三聚氰胺殘留量的操作簡便、重現(xiàn)性好，可滿足我科對(duì)液態(tài)牛奶中三聚氰胺殘留量的分析檢測要求。為了讓企業(yè)確實(shí)履行社會(huì)責(zé)任，此次專項(xiàng)檢查抽查了我縣市場上50批次液態(tài)牛奶，殘留量未超標(biāo)的可正常銷售，對(duì)于檢測不合格的產(chǎn)品要實(shí)行產(chǎn)品下架，同時(shí)對(duì)生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行整改，切實(shí)保障消費(fèi)者的健康安全。

[1] 國家技術(shù)監(jiān)督局.GB/T 9567-1997.工業(yè)三聚氰胺[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,1997.

[2] 戚冬偉.電位滴定-聯(lián)機(jī)測試法對(duì)飼料中的三聚氰胺殘留量分析[J].畜牧與飼料科學(xué),2009,30(1):77-78.

[3] 蔡勤仁,歐陽穎瑜,錢振杰,等.超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測定飼料中殘留的三聚氰胺[J].色譜,2008,26(3):339-342.

R155.57

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：1671-8194（2014）05-0058-02