陳海榮等

摘要

[目的] 建立能同時(shí)檢測(cè)環(huán)丙沙星和恩諾沙星殘留的HPLC紫外檢測(cè)法。[方法] 采用10%三氯乙酸為提取液，直接從生鮮乳中提取環(huán)丙沙星和恩諾沙星，并進(jìn)行HPLC檢測(cè)。[結(jié)果] 環(huán)丙沙星和恩諾沙星的最低檢測(cè)限為5 μg/L，在10～200 μg/L濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r>0.99），平均回收率為84%～112%，變異系數(shù)均小于5%。[結(jié)論] 該方法不僅除蛋白和脂肪效果好，而且回收率較為理想，可以很好滿足確證方法的要求，且重現(xiàn)性好。

關(guān)鍵詞恩諾沙星；鹽酸環(huán)丙沙星；高效液相色譜法；生鮮乳；殘留

中圖分類號(hào)S481+.8文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）06-01724-02

Abstract [Objective] The research ained to establish HLPCultraviolet detection method for simultaneous determination of ciprofloxacin hydrochloride and enrofloxacin residues. [Method] Taking 10% trichloroacetic acid as extracting solution， ciprofloxacin hydroehloride and enrofloxacin were directly extracted from raw fresh milk to make HPLC detection. [Result] The lowest detection limit of ciprofloxaein hydroehloride and enrofloxacin was 5 μg/L and there was a good linear correlation in the range of 10-200 μg/L（r>0.99）. The average recovery rate was 84%-112% and the variation coefficient was less than 5%. [Conclusion] The method had better removal effects of protein and fat and the recovery rate was ideal. The method could better meet the demands of the confirmatory methods and the repeatability was good.

Key words Enrofloxacin； Ciprofloxacin hydroehloride； HPLC； Raw fresh milk； Residue

環(huán)丙沙星（Ciprofloxacin，CIP）和恩諾沙星（Enrofloxacin，ERFX）是奶牛疾病治療中常用的抗菌藥物，鮮乳及乳制品中存在2種藥物殘留的風(fēng)險(xiǎn)，我國(guó)對(duì)這2種藥物在鮮乳及乳制品中的殘留量都有明確規(guī)定[1]。鮮乳及乳制品中環(huán)丙沙星和恩諾沙星殘留的檢測(cè)方法主要是高效液相色譜法（HPLC）和微生物法。高效液相色譜的檢測(cè)器有質(zhì)譜（MS）[2-6]、熒光檢測(cè)器和紫外檢測(cè)器[7]等。由于HPLC-MS檢測(cè)費(fèi)用昂貴，大多數(shù)中小乳品生產(chǎn)企業(yè)的HPLC主要配備紫外檢測(cè)器；HPLC紫外檢測(cè)法具有高效、快速、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，因此建立同時(shí)檢測(cè)環(huán)丙沙星和恩諾沙星殘留的HPLC紫外檢測(cè)法對(duì)于乳品企業(yè)保障奶源質(zhì)量具有重要意義。

1.材料與方法

1.1材料

1.1.1

主要儀器。高效液相色譜儀（Agilent 1260）；島津FA2004型電子天平；SHB-IIIS循環(huán)水式多用真空泵；渦旋儀；微量高速離心機(jī)；溶劑過(guò)濾器等。

1.1.2

標(biāo)準(zhǔn)品。恩諾沙星對(duì)照品，含量為99.9%，批號(hào)為H0081206，購(gòu)自上海將來(lái)實(shí)業(yè)有限公司；鹽酸環(huán)丙沙星對(duì)照品，含量為100%，批號(hào)為H010803，購(gòu)自上海將來(lái)實(shí)業(yè)有限公司。

1.2.5

最低檢測(cè)限和最低定量限的確定。在生鮮乳中添加不同濃度的鹽酸環(huán)丙沙星和恩諾沙星，按照上述步驟進(jìn)行測(cè)定，以S/N>3為最低檢測(cè)限，以S/N>3且變異系數(shù)和回收率均符合檢測(cè)要求的最低濃度作為樣品中鹽酸環(huán)丙沙星和恩諾沙星的最低定量限。按照外標(biāo)法計(jì)算含量，并進(jìn)行多點(diǎn)或單點(diǎn)校正。3 討論

（2）環(huán)丙沙星和恩諾沙星分子中含有羧基和哌嗪基，屬于兩性化合物。因此，藥物容易在水中發(fā)生解離，與固定相上的活性點(diǎn)產(chǎn)生強(qiáng)烈吸附，導(dǎo)致色譜峰拖尾、峰形異常和分離度下降[8]，試驗(yàn)中在流動(dòng)相中加入三乙胺[9]作為掃尾劑以獲得良好峰形。試驗(yàn)表明，乙腈的添加量對(duì)2種FQs藥物的保留時(shí)間的影響較大[10]。試驗(yàn)表明，當(dāng)乙腈比例為14%時(shí)，2種藥物分離效果最好，且保留時(shí)間合理。在對(duì)流速的優(yōu)化中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)流速為0.9 mol/min時(shí)，出峰時(shí)間和峰形比較理想。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于這2種抗生素的HPLC紫外檢測(cè)方法主要是單一檢測(cè)，同時(shí)檢測(cè)這2種抗生素的方法尚未見報(bào)道。該方法通過(guò)對(duì)流動(dòng)相的反復(fù)選擇最終實(shí)現(xiàn)了這2種物質(zhì)的分離，達(dá)到了同時(shí)檢測(cè)的目的。

（3）一般通過(guò)應(yīng)用蛋白沉淀劑和提取劑（如乙腈、甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑）[11-13]，去除生鮮乳樣品中大量脂肪和蛋白質(zhì)等物質(zhì)對(duì)基質(zhì)的干擾，參閱文獻(xiàn)[13]中的方法并進(jìn)行優(yōu)化，最終采用10%三氯乙酸作為提取液直接從生鮮乳中提取殘留藥物，發(fā)現(xiàn)不僅除蛋白、脂肪效果好，而且提取時(shí)回收率較為理想，可以較好滿足確證方法的要求，且重現(xiàn)性好。

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