周史思 陳麗平 周海仙 浙江省溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 溫州 325000

乳腺癌易感基因相互作用蛋白1基因功能區(qū)單核苷酸多態(tài)性與宮頸癌的相關(guān)性研究

周史思 陳麗平 周海仙 浙江省溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 溫州 325000

目的 探討乳腺癌易感基因相互作用蛋白1基因（BRIP1）功能區(qū)5個單核苷酸多態(tài)性（SNP）位點與宮頸癌的相關(guān)性。方法 嚴格按照診斷標準，采集無親緣關(guān)系宮頸癌患者309例（病例組）及健康體檢者（對照組）315名靜脈血，提取基因組DNA，采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)檢測5個SNP的基因型，采用SPSS11.5及Haploview4.2軟件分析各基因型、等位基因及單倍型頻率在兩組中的差異。結(jié)果 宮頸癌組與正常對照組的BRIP1基因rs4986764（外顯子18）及rs7213430（3'非翻譯區(qū)）位點基因型及等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。宮頸癌組rs4986764位點C等位基因頻率顯著高于對照組（P=0.036，OR=1.294，95%=1.017～1.647）；宮頸癌組rs7213430位點A等位基因頻率顯著高于對照組（P=0.003，OR=1.435，95%CI=1.133～1.818）。連鎖不平衡分析發(fā)現(xiàn)一個單倍型（rs11079454-rs7213430-rs4986763）高度連鎖（D'＞0.9），宮頸癌組T-A-C單倍型頻率顯著高于對照組（P=0.018）。結(jié)論 BRIP1基因功能區(qū)rs4986764及rs7213430 SNP位點可能與宮頸癌有關(guān)，攜帶有rs4986764 C等位基因及rs7213430 A等位的個體可能更容易患宮頸癌。

宮頸癌；乳腺癌易感基因相互作用蛋白1基因；單核苷酸多態(tài)性

宮頸癌是全球婦女中最常見的惡性腫瘤之一，僅次于乳腺癌而居于第二位，在發(fā)展中國家尤為常見，位居各種惡性腫瘤之首[1]。宮頸癌受遺傳與環(huán)境因素共同作用。家系、雙生子及寄養(yǎng)子研究表明宮頸癌的遺傳度為30%～50%[2]。最近研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌與乳腺癌易感基因相互作用蛋白1（BRCA1-interacting protein 1，BRIP1）基因關(guān)系密切[3-4]。為了系統(tǒng)研究BRIP1基因與中國漢族群體宮頸癌的相關(guān)性，筆者收集了309名宮頸癌患者及315名健康對照樣本，對BRIP1基因功能區(qū)5個單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）位點進行系統(tǒng)研究。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年3月—2013年12月于我院收集宮頸癌患者309例，均為漢族，年齡35～61歲，平均（42.16±5.38）歲。符合宮頸癌診斷標準：所有患者均經(jīng)活檢或切除組織病理檢查確診為宮頸癌。同期從我院體檢中心收集無親緣關(guān)系的健康女性體檢者315名作為對照組，均為漢族，年齡32～62歲，平均（43.57±4.74）歲。兩組均有正常生育史，排除習慣性流產(chǎn)、其他軀體疾病、遺傳病及可能影響血液系統(tǒng)疾病者。所有參與者簽署知情同意書，并經(jīng)我院倫理委員會批準。

1.2 方 法 EDTA抗凝真空采血管收集外周靜脈血3～5mL，采用TIANamp Blood DNA Kit全血基因組DNA提取試劑盒（天根，中國北京）提取基因組DNA，-20℃儲存?zhèn)溆谩NP分型是由上海邃志生物科技有限公司利用美國Sequenom公司的MassARRAY系統(tǒng)完成，該系統(tǒng)是基于基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)（MALDI-TOF）。PCR反應(yīng)條件：94°C 15min；94°C 20s，56°C30秒，72°C 1min，共45個循環(huán)；最終72°C 3min。PCR擴增后，剩余的dNTP將被去磷酸消化掉，反應(yīng)體系包括 1.53μL水、0.17μLSAP緩沖液、0.3單位堿性磷酸酶（Sequenom）。37°C 40min，后85°C 5min使酶失活。單堿基延伸反應(yīng)在下列條件下進行：94°C 30s；94°C 5s，52°C 5s，80°C 5s 5個循環(huán)，共40個循環(huán)；最后72°C延伸 3min。使用 MassARRAY Nanodispenser（Sequenom）將最終的分型產(chǎn)物點樣到一塊384孔的spectroCHIP（Sequenom）上，并用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜進行分析。

1.3 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用GENEPOP v4.0行兩組基因型哈迪溫伯格（Hard-Weinberg）平衡檢驗。SPSS13.0軟件計算兩組等位基因頻率和基因型頻率；確切概率法（fisher exact test，F(xiàn)ET）或Pearson's卡方檢驗兩組間等位基因頻率和基因型頻率分布差異。block根據(jù)D'＞0.9以及r2＞0.8進行定義。單倍型構(gòu)建應(yīng)用Haploview 4.0軟件進行構(gòu)建。頻率＜5%單倍型被排除不再進行統(tǒng)計學檢驗。Pearson's卡方檢驗兩組間單倍型頻率及群體間差異分布。

2 結(jié)果

BRIP1基因5個多態(tài)性位點的基因型及等位基因頻率分布均符合Hard-Weinberg平衡定律。連鎖不平衡分析發(fā)現(xiàn)一個單倍型（rs11079454-rs7213430 -rs4986763）高度連鎖（D'＞0.9），見圖1。兩組基因型及等位基因頻率分布及統(tǒng)計學結(jié)果見表1。兩組單倍型頻率分布及統(tǒng)計學結(jié)果見表2。

兩組 BRIP1基因 rs4986764（外顯子 18）及rs7213430（3'非翻譯區(qū)）位點基因型及等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。病例組rs4986764位點C等位基因頻率顯著高于對照組（P=0.036，OR=1.294，95%CI=1.017～1.647）；病例組rs7213430位點A等位基因頻率顯著高于對照組（P=0.003，OR=1.435，95%CI=1.133～1.818）。

表1 BRIP1基因功能區(qū)5個SNPs位點基因型及等位基因頻率分布 例（%）

連鎖不平衡分析發(fā)現(xiàn)有rs11079454-rs7213430-rs4986763構(gòu)建的T-A-C單倍型頻率顯著高于正常對照組（P=0.018）。病例組中未發(fā)現(xiàn)T-G-T單倍型。

表2 BRIP1基因功能區(qū)5個SNPs位點單倍型頻率分布

圖1 BRIP1基因5個SNP位點連鎖不平衡結(jié)果

3 討論

BRIP1為一種DNA解旋酶，與乳腺癌易感基因1（breast cancer 1，BRCA1）相互作用，從而調(diào)節(jié)DNA修復和基因組穩(wěn)定性[5]。BRIP1基因位于染色體17q22，編碼1249個氨基酸。含19個外顯子及18個內(nèi)含子，基因長度為184-kb[6]。研究表明，BRIP1基因SNP與多種癌癥的發(fā)病相關(guān)[3-4，7]。然而，BRIP1基因?qū)m頸癌易感性的研究鮮有報道。

盡管本結(jié)果確切的分子機制尚不清楚，可能的解釋為BRIP1基因多態(tài)性可能會導致子宮頸BRIP1基因表達發(fā)生改變。我們推測基因變異可能在數(shù)量、性狀和疾病易感性兩個方面造成個體差異[8]。先前報道Arg173Cys（rs4988345）位點影響了BRIP1蛋白從細胞質(zhì)向細胞核轉(zhuǎn)移及胞核定位，并且有可能改變?nèi)橄侔┑囊赘行?，表明BRIP1遺傳變異可能造成的BRIP1基因潛在功能性變化[9-10]。本研究中，編碼區(qū)rs4986764（外顯子18中）也許會改變BRIP1的基因表達，導致宮頸癌的遺傳易感性增強。rs4986764及rs7213430功能性SNPs可能的具體作用尚待進一步探究。BRIP1基因的遺傳變異與多種癌癥的發(fā)病有關(guān)。根據(jù)報道[11-13]，rs4986764位點C等位基因與乳腺癌的風險增加相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn) 3’UTR中的rs7213430與宮頸癌的遺傳易感性相關(guān)，而與乳腺癌的遺傳易感性不相關(guān)[14]。越來越多的證據(jù)表明，3’UTR中的SNPs可能會改變與3’UTR結(jié)合的miRNA，從而對mRNA的表達進行調(diào)控[15]。BRIP1基因的3’UTR中的SNPs可能會影響mRNA的穩(wěn)定性，并調(diào)控mRNA的表達[16]，從而影響宮頸癌的遺傳易感性。宮頸癌與乳腺癌的遺傳易感性中rs7213430的不一致性亟待更深入的研究。本研究表明，BRIP1基因功能區(qū)rs4986764及rs7213430 SNP位點可能與宮頸癌有關(guān)，攜帶有 rs4986764 C等位基因及rs7213430 A等位的個體可能更容易患宮頸癌。

我們進一步深入研究了功能區(qū)這5個多態(tài)性之間的相互關(guān)系。連鎖不平衡分析發(fā)現(xiàn)有rs11079454-rs7213430-rs4986763構(gòu)建的單倍型存在強連鎖不平衡。單倍型分析顯示，宮頸癌病例組T-A-C單倍型頻率顯著高于正常對照組，進一步支持了先前報道的宮頸癌患者T-A-C-A單倍型頻率顯著增加[4]這一結(jié)果。這些結(jié)果表明，攜帶BRIP1基因的T-A-C單倍型的患者更容易罹患宮頸癌。

遺傳學研究有助于更好地理解宮頸癌的潛在發(fā)病機制。本研究表明BRIP1基因SNPs及其相關(guān)的單倍型在宮頸癌的遺傳易感性中可能發(fā)揮潛在作用。但這些SNPs如何影響B(tài)RIP1/FANCJ的功能尚待進一步的探討研究。

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修回日期：2014-06-16

Association of the Single Nucleotide Polymorphism in Functional Region of BRCA1-interacting Protein 1(BRIP1)with Cervical Cancer

ZHOU Shisi,CHEN Liping,ZHOU Haixian. Integrative Medicine Hospital of Wenzhou,Wenzhou(325000),China

Objective To investigate the association between 5 single nucleotide polymorphisms（SNP）of the BRCA1-interacting protein 1（BRIP1）and the risk of cervical cancer.Methods The participants enrolled in this study included 309 patients with cervical cancer and 315 healthy women as healthy controls.Blood samples were drawn from theseparticipants tocollect BRIP1 gene DNA;then 5 SNPs（rs2048718,rs4986764,rs4986763, rs11079454,rs7213430）of the BRIP1 gene was analyzed by using the MassARRAY system and compared by SPSS11.5 and Haploview 4.2 software.Results The genotype and allele frequency of rs4986764（exon 18）and rs7213430（3'UTR）were significantly different between patients with cervical cancer and healthy controls（P＜0.05）. Compared with healthy controls,patients with cervical cancer had higher frequency of rs4986764 C allele（P=0.036, OR=1.294,95%CI:1.017-1.647）and rs7213430 A allele（P=0.003,OR=1.435,95%CI:1.133-1.818）.Strong linkage disequilibrium was observed in one block（D'＞0.9）,and more T-A-C haplotypes（block 1）were found in patients with cervicalcancer（P=0.018）.Conclusion ThesefindingsindicatesthattheBRIP1 genepolymorphisms（rs4986764 and rs7213430）may be related to cervical cancer.The rs4986764 C allele and rs7213430 A allele may be the risk factor for cervical cancer.

cervical cancer；BRCA1-interacting protein 1；single nucleotide polymorphisms

2014-03-30