康慶偉，閻 姝

艾地苯醌(Idebenone)是一種難溶于水的有機(jī)合成藥物（結(jié)構(gòu)式見圖1），具有良好的抗氧化活性，能激活腦線粒體呼吸活性，改善大腦能量代謝，刺激神經(jīng)生長因子的合成，是一種能量代謝改善藥物，在治療腦血管疾病方面有廣泛的療效[1-2]，對人體無毒，副作用也相對較少。但是由于其首過效應(yīng)大，生物利用度低，限制了其臨床應(yīng)用。納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體作為一種緩釋載體，能夠提高其生物利用度并能夠很好的解決這些問題。本文通過比較不同形式的艾地苯醌載藥方式的體外釋放情況，用以控制制劑質(zhì)量，評價(jià)制劑工藝。

圖1 艾地苯醌分子結(jié)構(gòu)式

1 材料與方法

1.1 材料 高效液相色譜儀（LabAlliance，美國）；超聲波清洗脫氣機(jī)（HS3120，天津東科儀器有限公司）；恒溫恒濕箱（LHS-150SC，上海一恒科技有限公司）；小型空氣浴精密恒溫?fù)u床（THZ-03M2，北京西化儀器科技有限公司）；

艾地苯醌（上海德默化學(xué)技術(shù)有限公司）；TDB-NE，TDB-NLC（實(shí)驗(yàn)室自制），Tween 80（天津市江天化工技術(shù)有限公司）；甲醇（色譜級(jí)，天津市江天化工技術(shù)有限公司）；透析袋（截留分子量MWCO10000，美國）；0.22 μm微孔濾膜（上海市新亞凈化器件廠）。

1.2 檢測條件 采用HPLC方法進(jìn)行檢測，色譜條件:色譜柱:μbandpadTM C18(3.9×300mm)；流動(dòng)相:甲醇:水(72:28)；流速:1.0mL/min；檢測波長:278 nm；進(jìn)樣量:20 μL。

1.3 體外釋放實(shí)驗(yàn)方法 采用動(dòng)態(tài)透析法進(jìn)行體外釋放實(shí)驗(yàn)。透析袋置于釋放介質(zhì)（PH 7.4的磷酸鹽緩沖液，含0.3%（w/v）的吐溫80）中浸泡12 h至滲透擴(kuò)散平衡，取出一端用透析夾夾緊，精密量取1.0mL的艾地苯醌納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體分散液（艾地苯醌載藥濃度為5mg/mL）置于預(yù)先盛有1mL釋放介質(zhì)的透析袋中，立即夾緊另一端，置含100mL釋放介質(zhì)的250mL錐形瓶中，保持搖床轉(zhuǎn)速為70 r/min。分別于0.5，1.5，4，6，12，18，24，48，72 h取樣1mL，同時(shí)補(bǔ)加等溫同體積的釋放介質(zhì)。樣液加入到4mL流動(dòng)相中，混合均勻，經(jīng)納米乳膜（0.22 μm）過濾后HPLC法測定其在278 nm下的峰面積，代入回歸方程，求得測定的濃度，以測定濃度與已知濃度之比計(jì)算藥物累積釋放百分率。3次平行試驗(yàn)。

1.4 不同劑型藥物釋放度測定 精密量取1.0mL不同劑型:艾地苯醌自由藥物（溶于Miglyol 812油相），艾地苯醌納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，艾地苯醌納米乳、艾地苯醌納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體水凝膠，艾地苯醌納米乳水凝膠的艾地苯醌載體分散液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.5 釋放介質(zhì)的影響 取3個(gè)透析袋分別模擬胃液、腸液和體液環(huán)境[3-4]，置于不同釋放介質(zhì)（pH 1.2的磷酸鹽緩沖液，pH 6.8的磷酸鹽緩沖液，pH 7.4的磷酸鹽緩沖液，均含0.3%（w/v）的吐溫80）中浸泡12 h至滲透擴(kuò)撒平衡，取出一端用透析夾夾緊，分別精密量取1.0mL艾地苯醌納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體和艾地苯醌納米乳（表面活性劑為Tween 80，艾地苯醌載藥濃度為5mg/mL）分散液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.6 攪拌速度的影響 分別精密量取1.0mL艾地苯醌納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體和艾地苯醌納米乳，在70 r/min的搖床轉(zhuǎn)速和100 r/min的搖床轉(zhuǎn)速下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果

NE劑型體外釋放較快，其釋放曲線始終處于NLC劑型體外釋放曲線上方，在24 h時(shí)約有22%的藥物被釋放；NLC劑型體外釋放速率次之，在24 h時(shí)約有17%的藥物被釋放；自由藥物體外釋放速率最慢，在24 h時(shí)只有5%的藥物被釋放（見圖2）。

圖2 不同劑型對藥物釋放的影響

NLC劑型和NLC水凝膠劑型體外釋放速率前期基本相近，NLC劑型體外釋放曲線和NLC水凝膠劑型體外釋放曲線在24 h前基本無區(qū)別，在48 h后，NLC水凝膠的釋放速率明顯慢于NLC水凝膠的釋放速率。

NE劑型和NE水凝膠劑型體外釋放速率前期也是基本相近，NE劑型體外釋放曲線和NE水凝膠劑型體外釋放曲線在24 h前基本無區(qū)別，在48 h后，NE水凝膠的釋放速率明顯慢于NE水凝膠的釋放速率。

NLC劑型在人工胃液（pH 1.2）、人工腸液（pH 6.8）和人工體液（pH 7.4）三種人體內(nèi)環(huán)境中釋放速度相近，在不同釋放介質(zhì)中藥物釋放僅有一點(diǎn)的差距。分析IDB的NLC劑型在不同釋放介質(zhì)中釋放的不同，可能與釋放介質(zhì)的pH和溶解性有關(guān)。最終結(jié)果是艾地苯醌NLC在pH6.8的人工腸液環(huán)境下釋放稍快，在pH7.4的人工體液環(huán)境下釋放稍慢，證明艾地苯醌NLC在腸液中的溶出比較明顯（見圖3、圖4）。

圖3 釋放介質(zhì)對艾地苯醌NLC釋放的影響

圖4 釋放介質(zhì)對艾地苯醌NE釋放的影響

NE劑型在人工胃液（pH 1.2）和人工體液（pH 7.4）兩種人體內(nèi)環(huán)境中釋放速度相近，在兩種釋放介質(zhì)中藥物釋放僅有一點(diǎn)的差距。但是艾地苯醌NE劑型在人工腸液（pH 6.8）中的釋放速度相對來說非常快，24 h已達(dá)50%，證明艾地苯醌NE在腸液中的溶出相對來說迅速。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，NE劑型艾地苯醌在人工胃液和人工體液中釋放相對較慢，在人工腸液釋放相對較快的對pH敏感的性質(zhì)可以使藥物在腸道中控制釋放。

NLC劑型在100 r/min的搖床轉(zhuǎn)速條件下體外釋放較快，其釋放曲線始終處于NLC劑型在70 r/min的搖床轉(zhuǎn)速條件下體外釋放曲線上方，在24 h時(shí)分別有22%和17%的藥物被釋放。NE劑型在100 r/min的搖床轉(zhuǎn)速條件下體外釋放較快，其釋放曲線始終處于NLC劑型在70 r/min的搖床轉(zhuǎn)速條件下體外釋放曲線上方，在24 h時(shí)分別有26%和22%的藥物被釋放（見圖5、圖6）。

圖5 攪拌速度對艾地苯醌NLC釋放的影響

圖6 攪拌速度對艾地苯醌NE釋放的影響

3 討論

本實(shí)驗(yàn)利用透析袋擴(kuò)散法對于不同劑型的艾地苯醌在不同條件下的釋放進(jìn)行研究，并運(yùn)用高效液相色譜來檢測藥物的累積釋放率。分別從劑型、水凝膠、釋放介質(zhì)和攪拌速度等方面對于藥物釋放進(jìn)行研究，了解到運(yùn)用不同的表面活性劑會(huì)影響藥物的釋放速度，NE劑型的釋放速度快于NLC劑型；水凝膠有明顯的藥物緩釋作用；另外，在一定范圍內(nèi)，搖床轉(zhuǎn)速越高，藥物的緩釋效果更明顯。

當(dāng)艾地苯醌溶解于Miglyol 812的油相和水相相接觸時(shí)，艾地苯醌由于其脂溶性而與Miglyol 812有很強(qiáng)烈的相互作用，基本不向水相分配，這就是自由藥物的釋藥速度比NLC和NE都慢的原因[5]。由于劑型限制了藥物分子在制劑內(nèi)部的自由運(yùn)動(dòng)，加上微粒的保護(hù)作用，使藥物在體內(nèi)的溶解和吸收速率明顯減慢，從而最終會(huì)延長藥物的作用時(shí)間，減少了藥物的服用次數(shù)，實(shí)現(xiàn)對藥物的緩控釋功能。NE劑型艾地苯醌在人工胃液和人工體液中釋放相對較慢，在人工腸液釋放相對較快的對PH敏感的性質(zhì)可以使藥物在腸道中控制釋放。艾地苯醌納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體和艾地苯醌納米乳在進(jìn)入體內(nèi)后藥物釋放將受到胃腸道蠕動(dòng)激烈程度的影響，胃腸道蠕動(dòng)越激烈，藥物釋放的速度越快[6]。

納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體和納米乳及其水凝膠劑型都是靶向給藥的潛力劑型，可以通過研究其在胃腸道中的控制釋放達(dá)到劑型功能的更佳應(yīng)用。但納米乳液作為藥物載體的靶向性比較差，納米乳液體系有一定的刺激性，藥物的釋放機(jī)理不很明確，故納米乳液作為藥物載體在臨床上應(yīng)用較少。但隨著對納米乳液體系研究的不斷深入，新的表面活性劑的不斷出現(xiàn)及納米乳液作為藥物載體藥物釋放模型的建立和完善，納米乳液作為藥物載體，最終可達(dá)到藥物的緩釋控釋，提高藥物療效的目的。而且納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體作為第二代脂質(zhì)納米粒，在很多各方面相對于納米乳都存在優(yōu)勢，在靶向用藥方面會(huì)有更大的機(jī)會(huì)和潛力。

[1]張翼,陳繼華,付鵬程.艾地苯醌對缺血性腦卒中后抑郁的預(yù)防性研究[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2013，29(19):3222-3224.

[2]郭章玉，崔元孝，商笑.艾地苯醌對癲癇患者認(rèn)知功能和生活質(zhì)量的影響觀察[J].中國藥房，2013，24(6):529-532.

[3]田霞，全東琴.聯(lián)苯雙酯過飽和自微乳釋藥系統(tǒng)的體內(nèi)外評價(jià)[J].中國藥學(xué)雜志，2011，46(8):600-604.

[4]余東升，潘立群，姚昶,等.黃芪注射液濃縮液微乳的體外釋放實(shí)驗(yàn)研究[J].遼寧中醫(yī)雜志，2007，34(7):969-970.

[5]Jia-You Fang，Chia-Lang Fang，Chi-Hsien Liu et al. Lipid nanoparticles as vehicles for topical psoralen delivery:Solid lipid nanoparticles(SLN)versus nanostructured lipid carriers(NLC)[J].Eur J Pharm Biopharm，2008，70(2):633-640.

[6]劉穎，張萍，馮年平,等.冬凌草甲素自微乳給藥系統(tǒng)的體外釋放動(dòng)力學(xué)研究[J].中國中藥雜志，2008，33(18):2049-2052.