趙惠茹，趙陽(yáng)

(西安醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，陜西西安 710021)

木犀草素是一種天然的黃酮類化合物，具有抗腫瘤、消炎、抗過(guò)敏、抗菌、抗病毒等多種生物活性及藥理作用［1-2］，可從多種天然藥材、蔬菜果實(shí)中分離得到。但由于木犀草素在水中的溶解度非常低，因此木犀草素的口服制劑存在單次服藥劑量較大、生物利用度低、療效低等缺點(diǎn)，在臨床上沒(méi)有被廣泛應(yīng)用［3］。

微乳由水相、表面活性劑、助表面活性劑和油相組成，粘度低、熱力學(xué)穩(wěn)定且各向同性，外觀呈半透明、透明狀或略帶乳光［4］。其粒徑分布均勻，介于10～100 nm，對(duì)難溶性藥物可增加溶解度，使藥物療效增強(qiáng)，提高生物利用度，延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的作用時(shí)間，具有緩釋和靶向的作用［5-6］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)合現(xiàn)代藥劑學(xué)的發(fā)展趨勢(shì)，以測(cè)定木犀草素在不同油相、表面活性劑和助表面活性劑中的溶解度和繪制偽三元相圖的方法篩選微乳處方，將木犀草素制備成O/W型微乳，用紫外法測(cè)定其載藥量，考察微乳對(duì)木犀草素的增溶作用，為木犀草素相關(guān)制劑的研究提供一定的依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

Tween-80、無(wú)水乙醇、1，2-丙二醇、油酸、油酸乙酯均為分析純;肉豆蔻酸異丙酯(IPM)、聚氧乙烯氫化蓖麻油(Cremphor RH-40)、泊洛沙姆188均為化學(xué)純;木犀草素對(duì)照品(西安應(yīng)化生物技術(shù)有限公司，批號(hào)為:Lu120723，純度≥98%);液體石蠟、PEG-400、藥用甘油均為藥用級(jí);二次蒸餾水;甲醇，色譜級(jí)。

UV-160A型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì);85-2型恒溫磁力攪拌器;TGL-16C高速離心機(jī);DK-420S三用恒溫水浴箱;BP211D型電子天平;SK-1快速混勻器。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 空白微乳的制備［7］精密稱取RH-40 24 g，無(wú)水乙醇12 g，置于錐形瓶中，加入 IPM 4 g，于25℃恒溫磁力攪拌，緩慢滴加雙蒸水60 g，得到略帶淡藍(lán)色乳光外觀透明的微乳液。

1.2.2 木犀草素溶解性能 分別吸取蒸餾水、空白微乳各10 mL，置于50 mL錐形瓶中，各加入過(guò)量木犀草素，于恒溫振蕩器上37℃連續(xù)振蕩12 h，然后在37℃水浴中平衡24 h使藥物充分溶解。各取適量液體置離心管中，于3 000 r/min離心10 min，取上清液，微孔濾膜過(guò)濾。精密吸取續(xù)濾液適量，分別置25 mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度。于346 nm處測(cè)定吸收度，計(jì)算溶解度。

1.3 分析方法

1.3.1 最大吸收波長(zhǎng)的選擇 精密稱取13.2 mg木犀草素對(duì)照品，加無(wú)水乙醇溶解并定容至100 mL容量瓶中，配制成質(zhì)量濃度為132 μg/mL的對(duì)照品貯備液，精密吸取此貯備液2.0 mL，用無(wú)水乙醇稀釋至10 mL容量瓶中，其濃度為26.4 μg/mL。精密吸取空白微乳與木犀草素微乳各2.0 mL，分別置50 mL容量瓶中，加入乙醇適量，超聲10 min后，用乙醇定容至刻度，搖勻，靜置10 min，過(guò)濾。分別取續(xù)濾液和對(duì)照品溶液適量，以乙醇為空白，在200～800 nm進(jìn)行掃描。結(jié)果微乳樣品中木犀草素與木犀草素對(duì)照品在346 nm處均出現(xiàn)最大吸收峰，而空白微乳在此波長(zhǎng)無(wú)吸收。故最大吸收波長(zhǎng)選擇346 nm。

1.3.2 木犀草素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取木犀草素對(duì)照品貯備液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL置10 mL容量瓶中，加入乙醇適量稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度分別為 13.2，26.4，39.6，52.8，66 μg/mL的木犀草素系列對(duì)照品溶液，以乙醇為空白，在346 nm測(cè)定吸光度。以木犀草素對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得木犀草素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A=8.513C+0.020 9(r=0.997)。結(jié)果表明，木犀草素在 13.2 ～ 66 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.3.3 精密度 取同一供試品溶液，按上述實(shí)驗(yàn)條件測(cè)定吸光度，平行測(cè)定6次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.92%?？梢?jiàn)該法測(cè)定木犀草素含量的精密度良好。

1.3.4 回收率 精密吸取空白微乳9份各1.0 mL，分別置25 mL容量瓶中，精密加入木犀草素對(duì)照品溶液適量，再加入乙醇稀釋至刻度，搖勻，制備成高、中、低3種不同濃度的供試品溶液，按上述實(shí)驗(yàn)條件測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=9)Table 1 Results of recovery test

2 結(jié)果與討論

2.1 在不同油相、表面活性劑(SF)和助表面活性劑(CoSF)中木犀草素的溶解度［7］

本研究的油相選擇液體石蠟、油酸、IPM和油酸乙酯，表面活性劑選擇 RH-40、泊洛沙姆188和Tween-80，助表面活性劑選擇甘油、1，2-丙二醇、無(wú)水乙醇、PEG-400和正丁醇。各取上述油相、表面活性劑和助表面活性劑3 mL置具塞離心管中，分別加入過(guò)量的木犀草素對(duì)照品，在37℃恒溫水浴中振搖12 h后，繼續(xù)平衡 24 h，3 000 r/min離心 10 min。吸取上清液適量，用無(wú)水乙醇稀釋后測(cè)定吸光度，代入木犀草素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算木犀草素在各種溶劑中的溶解度，結(jié)果見(jiàn)表2～表4。

表2 各種不同油相中木犀草素的溶解度(n=3)Table 2 Solubilities of luteolin in all kinds of different oils

表3 各種不同表面活性劑中木犀草素的溶解度(n=3)Table 3 Solubilities of luteolin in all kinds of different surfactants

表4 各種不同助表面活性劑中木犀草素的溶解度(n=3)Table 4 Solubilities of luteolin in all kinds of different co-surfactants

由表2～表4可知，在4種油相中，木犀草素在IPM中溶解度最大;在3種表面活性劑中，RH-40中的溶解度相比Tween-80和泊洛沙姆188較大;在無(wú)水乙醇中溶解度大于其余4種助表面活性劑。故本實(shí)驗(yàn)選取IPM為油相，RH-40為表面活性劑，無(wú)水乙醇為助表面活性劑。

2.2 表面活性劑與助表面活性劑質(zhì)量之比(Km)的確定

以IPM為油相，RH-40為表面活性劑，無(wú)水乙醇為助表面活性劑，在表面活性劑與助表面活性劑質(zhì)量之比(Km)分別為 3∶1，2∶1，1∶1，1∶2 時(shí)，將油相與混合表面活性劑(由表面活性劑和助表面活性劑按一定比例組成)分別按照質(zhì)量比 1∶9，2∶8，3∶7，4∶6，5∶5，6∶4，7∶3，8∶2，9∶1 進(jìn)行混合，向混合液中緩慢滴加蒸餾水，同時(shí)不斷振搖使各組分充分混勻，觀察溶液變化，在即將渾濁的臨界點(diǎn)時(shí)，微乳體系發(fā)生相轉(zhuǎn)變，記錄此時(shí)各組分和水的用量。以一定質(zhì)量的RH-40和無(wú)水乙醇組成的混合表面活性劑作為相圖的一個(gè)頂點(diǎn)，IPM作為油相頂點(diǎn)，水作為水相頂點(diǎn)，繪制該系統(tǒng)在不同Km值時(shí)的偽三元相圖［7-9］。以相圖中微乳區(qū)域的面積大小(即曲線的左邊區(qū)域)為考察指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 微乳體系在不同Km下的偽三元相圖Fig.1 Pseudoternary phase diagrams of microemulsion system at different Km values

由圖1可知，當(dāng)Km=2∶1時(shí)，微乳區(qū)域最大，外觀透明，且具有藍(lán)色乳光。因此，在制備微乳時(shí)，選擇表面活性劑RH-40與助表面活性劑無(wú)水乙醇的質(zhì)量之比為2∶1。

2.3 木犀草素分別在微乳和水中的溶解性能

按照1.2節(jié)方法重復(fù)制備3批空白微乳(批號(hào)分別為 20130509，20130510，20130512)，分別測(cè)定木犀草素在其中的溶解度，與水中溶解度進(jìn)行比較，結(jié)果見(jiàn)表5。

由表5可知，木犀草素在微乳中的溶解度比水中有明顯的增大，分別為30.71 mg/mL 和 54.7 μg/mL，說(shuō)明此O/W型微乳對(duì)木犀草素有明顯的增溶作用。原因可能是由于在微乳形成時(shí)油相增溶到烴核內(nèi)部，不僅增大了內(nèi)核體積，且油相對(duì)藥物溶解度較好，而且微乳體系在油-水界面有大量表面活性劑和助表面活性劑混合物吸附，界面易于彎曲，具有高度的柔性，從而極大提高了藥物在微乳中的溶解度［10-12］。

表5 木犀草素在微乳和水中的溶解度(n=3)Table 5 Solubilities of luteolin in microemulsion and water

3 結(jié)論

制備了由肉豆蔻酸異丙酯-聚氧乙烯氫化蓖麻油-無(wú)水乙醇-水組成的O/W型微乳體系，考察了微乳對(duì)木犀草素的增溶作用。研究表明，木犀草素在微乳中的溶解度是水中的561倍，說(shuō)明此微乳體系對(duì)木犀草素有明顯的增溶作用。

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