付小梅,孫艷朝,劉婧,吳志瑰,裴建國,彭水梅,譚道鵬

(江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,南昌 330004)

·藥物研究·

蒙古蒼耳子和蒼耳子的抗炎鎮(zhèn)痛作用比較*

付小梅,孫艷朝,劉婧,吳志瑰,裴建國,彭水梅,譚道鵬

(江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,南昌 330004)

目的 觀察蒙古蒼耳子不同提取物的抗炎鎮(zhèn)痛作用,并與蒼耳子進(jìn)行比較。方法雄性昆明小鼠70只,分為空白對(duì)照組、阿司匹林組、蒼耳子乙醇提取物組、蒙古蒼耳子乙醇提取物組、蒙古蒼耳子乙醚提取物組、蒙古蒼耳子乙酸乙酯萃取物組、蒙古蒼耳子正丁醇萃取物組,共7組,各10只,按500 mg·kg-1灌胃給藥,采用小鼠熱板實(shí)驗(yàn)觀察其鎮(zhèn)痛作用,二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)觀察其抗炎作用。結(jié)果在小鼠熱板實(shí)驗(yàn)中,灌服蒼耳子乙醇提取物和蒙古蒼耳子各種提取物60,120及180min后,小鼠的痛閾值均延長(P＜0.05),蒼耳子乙醇提取物組和蒙古蒼耳子乙醇提取物組的小鼠痛閾值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),蒙古蒼耳子乙醚提取物組和正丁醇萃取物組鎮(zhèn)痛效果最好。在二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)中,蒼耳子乙醇提取物和蒙古蒼耳子各部位提取物對(duì)二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹均有明顯的抑制作用(均P＜0.05),蒼耳子乙醇提取物組和蒙古蒼耳子乙醇提取物組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),蒙古蒼耳子乙醚提取物組和正丁醇萃取組抗炎效果最好(P＜0.05)。結(jié)論蒙古蒼耳子有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛作用,與蒼耳子相似,且以乙醚提取物和正丁醇萃取部位抗炎鎮(zhèn)痛效果最好。

蒙古蒼耳子;蒼耳子;抗炎作用;鎮(zhèn)痛作用

蒼耳子始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,為菊科植物蒼耳(X.sibiricumPatr.)的干燥成熟帶總苞的果實(shí),為歷版《中華人民共和國藥典》收載的常用中藥,具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗微生物、抗氧化等作用,臨床上常以單方、復(fù)方,內(nèi)服或外用治療急慢性鼻炎、鼻竇炎以及過敏性鼻炎等鼻科疾病[1-2]。資源調(diào)查發(fā)現(xiàn),江西省境內(nèi)普遍使用的是蒙古蒼耳(X.mongolicumKitag.),商品藥材調(diào)查發(fā)現(xiàn)蒙古蒼耳果實(shí)作為中藥蒼耳子使用達(dá)一半以上,即臨床上常將蒼耳子與蒙古蒼耳子進(jìn)行混用。筆者對(duì)蒼耳子和蒙古蒼耳子進(jìn)行了活性比較,同時(shí)比較蒙古蒼耳子不同提取物以及不同萃取部位的抗炎、鎮(zhèn)痛效果,初步明確其活性部位,為進(jìn)一步深入探討蒙古蒼耳子藥效成分及作用機(jī)制提供參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)雄性昆明種小鼠,體質(zhì)量(20± 2)g,由江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技中心提供,使用許可證號(hào):SYXK(贛)2009-0001,動(dòng)物合格證號(hào):SCXK (贛)2006-0001。飼養(yǎng)環(huán)境保持在約25℃,相對(duì)濕度約55%。

1.2 儀器 SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵:鞏義市英峪予華儀器廠；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:上海亞榮生化儀器廠；CP124S德國賽多利斯電子天平；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋:國華電器有限公司。

1.3 試藥及試劑 蒼耳子、蒙古蒼耳子購于江西樟樹藥材市場(chǎng),經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院范崔生教授鑒定,分別為蒼耳(X.sibiricumPatr.)、蒙古蒼耳(X. mongolicumKitag.)的干燥成熟帶總苞的果實(shí),憑證標(biāo)本存于江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源學(xué)科組。阿司匹林片為湖南新匯制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào):090513。所用乙醚、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇等均為分析純。

1.4 樣品的制備

1.4.1 蒼耳子乙醇提取物樣品制備 稱取蒼耳子100 g,粉碎,10倍乙醇加熱回流提取3次,每次1.5 h,過濾,合并濾液,濃縮成浸膏,用0.5%聚山梨酯-80溶液定容至100 mL,制成生藥濃度1 g·mL-1,備用。

1.4.2 蒙古蒼耳子乙醇提取物樣品制備 稱取蒙古蒼耳子200 g,粉碎,10倍乙醇加熱回流提取3次,每次1.5 h,過濾,合并濾液,濃縮成浸膏,平均分成兩份,其中一份用0.5%聚山梨酯-80溶液定容至100 mL,制成生藥濃度1 g·mL-1,備用。

1.4.3 蒙古蒼耳子乙醚提取物樣品制備 蒙古蒼耳子100 g,粉碎,10倍乙醚索氏提取3次,每次1.5 h,合并提取液,濃縮成浸膏,用0.5%聚山梨酯-80溶液定容至100 mL,制成生藥濃度1 g·mL-1,備用。

1.4.4 蒙古蒼耳子乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物樣品制備 將“1.4.2”項(xiàng)的一份蒙古蒼耳子乙醇提取浸膏用水混懸,依次分別用乙酸乙酯、正丁醇萃取,各萃取3次,合并萃取液,分別濃縮成浸膏,得乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物。分別用0.5%聚山梨酯溶液將其定容至100 mL,制成生藥濃度1 g·mL-1蒙古蒼耳子乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物樣品,備用。

1.5 小鼠熱板法實(shí)驗(yàn) 按文獻(xiàn)[3]方法,健康雌性昆明種小鼠,體質(zhì)量(20±2)g,于小鼠熱板測(cè)痛裝置挑選基礎(chǔ)痛閾在5～30 s的合格小鼠70只,隨機(jī)分為空白對(duì)照組、阿司匹林組、蒼耳子乙醇提取物組、蒙古蒼耳子乙醇提取物組、蒙古蒼耳子乙醚提取物組、蒙古蒼耳子乙酸乙酯萃取物組、蒙古蒼耳子正丁醇萃取物組,共7組,每組10只。禁食12 h以后,各組按500 mg·kg-1灌胃給藥,對(duì)照組給予等量0.5%聚山梨酯-80溶液。每日給小鼠灌胃1次,連續(xù)3 d。分別于最后1次給藥60,120,180,240 min后取小鼠置于(55.0±0.1)℃熱板儀中,加熱后作為熱刺激,用秒表記錄小鼠自投入熱板至出現(xiàn)舔后足的時(shí)間(s)作為該小鼠的痛閾值(第1次舔足時(shí)間)。

1.6 對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn) 按文獻(xiàn)[4]方法,雄性昆明種小鼠70只,體質(zhì)量(20±2)g,隨機(jī)分為空白對(duì)照組(給予0.5%聚山梨酯-80)、阿司匹林組、蒼耳子乙醇提取物組、蒙古蒼耳子乙醇提取物組、蒙古蒼耳子乙醚提取物組、蒙古蒼耳子乙酸乙酯萃取物組、蒙古蒼耳子正丁醇萃取物組,共7組,每組10只。除空白對(duì)照組和阿司匹林組外,其余各組每日按500 mg·kg-1灌胃給藥1次,連續(xù)4 d,末次給藥1 h后,于每只小鼠右耳兩面涂二甲苯0.1 mL致腫,左耳不涂為正常耳。2 h后脫頸椎處死小鼠,沿耳廓基線剪下兩耳,于同一部位用打孔器沖下耳片,直徑8 mm,于分析天平上稱質(zhì)量。計(jì)算鼠耳腫脹度及抑制率。以兩耳片質(zhì)量之差為耳腫脹度,空白對(duì)照組和給藥組耳腫脹度的差值除以空白對(duì)照組耳腫脹度為腫脹抑制率,比較各組間差異。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都采以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,組間比較采用t檢驗(yàn),以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠對(duì)熱刺激的痛閾值比較 見表1。給藥前各組小鼠痛閾值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在給藥后,除空白對(duì)照組外,各組小鼠60,120及180 min痛閾值均延長,表明蒼耳子乙醇提取物和蒙古蒼耳子乙醇提取物均表現(xiàn)出一定的鎮(zhèn)痛作用(P＜0.05)；在給藥后240 min后,作用不明顯(P＞0.05)。同時(shí)蒼耳子乙醇提取物和蒙古蒼耳子乙醇提取物的痛閾值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。表明蒙古蒼耳子各種提取物都能表現(xiàn)出一定的鎮(zhèn)痛作用(P＜0.05),其中以乙醚提取組和正丁醇萃取組鎮(zhèn)痛效果最好。

2.2 小鼠耳腫脹情況比較 見表2。蒼耳子乙醇提取物和蒙古蒼耳子乙醇提取物對(duì)二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用(P＜0.05),兩者的乙醇提取物作用差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。蒙古蒼耳子各部位提取物都對(duì)二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用(P＜0.05),其中以乙醚提取組和正丁醇萃取組抗炎效果最好。

表1 7組小鼠對(duì)熱刺激的痛閾值比較Tab.1 Comparison of pain threshold of thermal stimulation among seven groups of mice s,

表1 7組小鼠對(duì)熱刺激的痛閾值比較Tab.1 Comparison of pain threshold of thermal stimulation among seven groups of mice s,

與空白對(duì)照組同時(shí)間點(diǎn)比較,*1P＜0.05Compared with the blank group at the same time point,*1P＜0.05

組別小鼠/只劑量/ (mg·kg-1)給藥前給藥后60 min 120 min 180 m in 240 min空白對(duì)照組10…18.56±3.37 19.19±3.51 18.90±3.70 17.90±4.02 18.00±2.13阿司匹林組10 500 18.90±3.11 25.46±1.48*123.32±2.86*122.78±3.40*121.98±2.21*1蒼耳子乙醇提取物組10 500 18.39±2.51 20.39±2.52*120.56±1.92*119.34±4.23*118.02±2.98蒙古蒼耳子正丁醇萃取物組10 500 18.90±3.11 22.46±1.48*121.53±2.67*120.56±3.76*118.29±2.34乙酸乙酯萃取物組10 500 18.56±3.37 20.21±3.51*119.34±3.70*119.70±4.00*118.80±2.19乙醚提取物組10 500 18.54±3.02 22.83±4.52*121.87±4.45*121.20±2.79*118.72±6.51乙醇提取物組10 500 18.54±3.02 21.72±5.60*121.03±4.40*120.83±2.70*118.32±4.60

表2 7組小鼠耳腫脹情況比較Tab.2 Comparison of ear swelling among seven groups of mice ,n=10

表2 7組小鼠耳腫脹情況比較Tab.2 Comparison of ear swelling among seven groups of mice ,n=10

與空白對(duì)照組同時(shí)間點(diǎn)比較,*1P＜0.05Compared with the blank group at the same time point,*1P＜0.05

組別劑量/ (mg·kg-1)耳腫脹度/ mg腫脹抑制率/ %空白對(duì)照組…9.00±1.61…阿司匹林組500 5.23±1.04*141.9蒼耳子乙醇提取物組500 6.24±2.43*130.6蒙古蒼耳正丁醇萃取物組500 5.41±1.73*139.9乙酸乙酯萃取物組500 5.90±3.01*134.4乙醚提取物組500 5.82±2.61*135.3乙醇提取物組500 7.02±1.32*122.0

3 討論

菊科蒼耳屬植物全球約有25種,我國有3種及1個(gè)變種。我國蒼耳屬植物以蒙古蒼耳和蒼耳分布最廣。與蒼耳相比,蒙古蒼耳的植株較大,結(jié)果率高,果實(shí)較大,其有效成分含量也較高[5-7]。臨床應(yīng)用中以蒙古蒼耳的果實(shí)作為蒼耳子入藥的情況也普遍存在[8],特別是在南方地區(qū),因此筆者對(duì)蒙古蒼耳子乙醇提取物和蒼耳子乙醇提取物進(jìn)行抗炎鎮(zhèn)痛研究。結(jié)果表明,兩者的鎮(zhèn)痛抗炎作用相似。并且對(duì)蒙古蒼耳子各提取物進(jìn)行鎮(zhèn)痛抗炎比較,發(fā)現(xiàn)乙醚提取物和正丁醇萃取部位的抗炎鎮(zhèn)痛效果最好,為蒙古蒼耳子的進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

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DOI 10.3870/yydb.2014.05.001

Comparative Studies of Anti-inflammation and Analgesic Effects Between X.Sibiricum and X.Mongolicum

FU Xiao-mei,SUN Yan-chao,LIU Jing,WU Zhi-gui,PEIJian-guo,PENG Shui-mei,TAN Dao-peng
(College of Pharmacy,Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanchang 330004,China)

ObjectiveTo investigate the anti-inflammatory and analgesic activities of different extracts fromX. mongolicumcompared with that ofX.sibiricum.MethodsSeventy male Kunming mices were random ly divided into seven groups:control group,aspirin group,the ethanol extracts ofX.sibiricumgroup andX.mongolicumgroup,the extracts fromX. mongolicumwith ether,ethyl acetate,andn-butyl alcohol group(n=10 each).The mice were adm inistrated with 500 mg·kg-1(p.o.)of different extracts.The hot-plate tests and the xylene-induced ear edema in mice were performed to observe the analgesic and anti-inflammatory activities,respectively.ResultsIn the hot-plate tests,the pain threshold from the extracts ofX.sibiricumand the different extracts fromX.mongolicumat 60,120,180 min were prolonged,and there was no statistically significant differences(P＞0.05)between the ethanol extracts fromX.sibiricumandX.mongolicum.The best analgesic activity was the ether andn-butyl alcohol extracts fromX.mongolicum.Meanwile,the ear edema from the extracts ofX.sibiricumand the different extracts ofX.mongolicumwere inhibited significantly(P＜0.05).There was also no significant differences between the ethanol extracts ofX.sibiricumandX.mongolicum(P＞0.05).The ether andn-butyl alcohol extracts from ofX.mongolicumshowed the best anti-inflammatory effect.ConclusionX.mongolicumexhibites significant anti-inflammatory and analgesic activities comparable to that ofX.sibiricum.The best anti-inflammation and analgesic activities are from ether andn-butyl alcohol extracts fromX.mongolicum.

X.mongolicum;X.sibiricum;Anti-inflammation;Analgesic effect

R282.71;R285.5

A

1004-0781(2014)05-0555-03

2013-05-09

2013-09-12

*江西省青年科學(xué)基金資助項(xiàng)目(20114BAB215044)；江西省教育廳科技項(xiàng)目(GJJ12517)

付小梅(1976-),女,江西臨川人,副教授,碩士生導(dǎo)師,博士,主要研究方向?yàn)橹兴幤焚|(zhì)評(píng)價(jià)。電話:0791-87118983,E-mail:smilefxm@163.com。