鄒吉利,徐彬,吳金虎,陳永剛,黃丹丹

(1.武漢市第三醫(yī)院藥學部,武漢 430060;2.湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院,武漢 430064)

燒傷愈合膏龍腦與異龍腦的含量測定*

鄒吉利1,徐彬1,吳金虎1,陳永剛1,黃丹丹2

(1.武漢市第三醫(yī)院藥學部,武漢 430060;2.湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院,武漢 430064)

目的 建立燒傷愈合膏中龍腦、異龍腦的含量測定方法。方法采用毛細管氣相色譜法,以聚乙二醇20000為固定液,涂布濃度為100%,氮氣為載氣,氫火焰離子化(FID)檢測器,用ZB-WAX毛細管柱(30 m×0.25 mm, 0.25 μm),程序升溫80℃(5 min)→5℃·min-1→180℃(10 min),分流進樣,分流比為10∶1。結果龍腦在0.487 5～31.25 ng(r=0.999 6,n=6),異龍腦在0.487 5～31.25 ng(r=0.999 7,n=6)線性關系良好,平均加樣回收率分別為95.95%和96.44%。結論所建立的方法可同時對龍腦、異龍腦的含量進行測定,準確度高,靈敏性好,可用于燒傷愈合膏的質量控制。

龍腦;異龍腦;燒傷愈合膏;色譜法,毛細管氣相

燒傷愈合膏系武漢市第三醫(yī)院自主研制的系列燒傷制劑之一。根據燒傷病的特點,遵循中醫(yī)對燒傷“火毒內攻”的認識[1-2],按照清熱解毒、化腐生肌、祛瘀生新、活血止痛的原則[3]設計制備的軟膏劑。處方中含有黃連、冰片、乳香等,其中冰片作為使藥,具有開竅醒神、清熱解毒止痛、促進其他藥物透皮吸收的作用[4]。冰片主要含龍腦和異龍腦,其含量的高低影響著燒傷愈合膏的吸收和療效,因此龍腦、異龍腦含量測定對燒傷愈合膏的質量控制尤為重要。筆者在本實驗參考相關文獻[5-7],采用毛細管氣相色譜法同時測定燒傷愈合膏中龍腦、異龍腦的含量,為其質量控制奠定基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent GC6890N氣相色譜儀,FID檢測儀,QL-200型氫氣發(fā)生器,CA型靜音無油空氣泵,電子分析天平,毛細管色譜柱,KQ-300E型超聲儀, Sartorius十萬分之一分析天平。

1.2 試藥 龍腦對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:110881-201107,供含量測定用),異龍腦對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:1512-200201,供含量測定用),水為超純水,乙酸乙酯為分析純,燒傷愈合膏[醫(yī)院制劑批準文號:鄂藥制字(2001)第BZ02-047號,批號:20120720,20120730,20120810]。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 取龍腦、異龍腦對照品,精密稱定,分別加乙酸乙酯配制成0.250 mg·mL-1對照品溶液。取等體積的龍腦、異龍腦對照品溶液混合均勻,得到濃度均為0.125 mg·mL-1混合對照品溶液。

2.1.2 燒傷愈合膏供試品溶液和陰性樣品溶液的制備 取燒傷愈合膏0.5 g,精密稱定,加乙酸乙酯100 mL,精密稱定,超聲30 min,放冷后用乙酸乙酯補足損失的質量,濾過,取續(xù)濾液,即得燒傷愈合膏供試品溶液。按處方比例將不含冰片的其他藥材按相關工藝制成膏劑,得到陰性樣品,再按上述方法制備得到燒傷愈合膏陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件和系統(tǒng)適應性實驗 以聚乙二醇20000為固定相,ZB-WAX毛細管柱(30 m×0.25 mm, 0.25 μm),涂布濃度為100%,柱流量為1.0 mL·min-1,氮氣為載氣,流速30 mL·min-1。柱溫:程序升溫,初始溫度80℃,保留5 min,以5℃·min-1的速率升至180℃,終溫保持10 min,進樣口溫度200℃,檢測器溫度220℃,分流進樣,分流比10∶1。在該條件下將對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液分別進樣1 μL,保留時間為20 min,結果顯示分離良好,陰性無干擾,結果見圖1。

A.陰性樣品;B.混合對照品;C.燒傷愈合膏樣品;1.異龍腦;2.龍腦圖1 燒傷愈合膏氣相圖譜A.Negative controls;B.mixed control;C.shaoshang yuhe gao sample;1.isoborneol;2.campholFig.1 Gas chromatograms of shaoshang yuhe gao

2.3 線性關系考察 以濃度均為0.125 mg·mL-1的龍腦、異龍腦混合對照品溶液為母液,精密吸取母液0.039,0.078,0.156,0.312,0.625,1.250,2.50 mL,分別加乙酸乙酯定容到10 mL量瓶,得到龍腦、異龍腦系列濃度分別為0.487 5,0.975 0,1.950 0,3.900 0, 7.812 5,15.625,31.250 μg·mL-1溶液,分別精密吸取1 μL,注入氣相色譜儀測量,分別以龍腦、異龍腦含量為橫坐標(X),峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸處理,得到龍腦回歸方程:Y=457.5X+0.433 3,r= 0.999 6(n=6),線性范圍:0.487 5～31.25 ng;異龍腦回歸方程:Y=536.7X+0.487 5,r=0.999 7(n=6),線性范圍:0.487 5～31.25 ng。

2.4 精密度實驗 精密吸取混合對照品溶液1 μL,連續(xù)進樣6次,記錄其峰面積,計算得龍腦、異龍腦峰面積RSD分別為1.30%和0.9%。

2.5 穩(wěn)定性實驗 取燒傷愈合膏供試品溶液1 μL,分別在第2,4,6,8,10,12小時進樣,記錄其峰面積,計算得龍腦、異龍腦峰面積RSD分別為1.4%和1.2%。

2.6 重復性實驗 精密吸取同一批號的6份燒傷愈合膏樣品溶液,分別進樣,每次1 μL,記錄其峰面積,計算得龍腦、異龍腦的含量RSD分別為0.98%和1.32%。

2.7 加樣回收率實驗 取燒傷愈合膏樣品6份,各約0.25 g,含龍腦約4.904 mg·g-1,異龍腦約4.032 mg·g-1,精密稱定,分別精密加入龍腦對照品1.10 mg和異龍腦對照品0.95 mg,制備成供試品溶液,測定樣品中龍腦和異龍腦的含量,計算加樣回收率,結果得到龍腦的平均加樣回收率為95.95%,RSD為1.1%,異龍腦的平均加樣回收率為96.44%,RSD為1.96%,見表1。

表1 龍腦和異龍腦的加樣回收率實驗結果Tab.1 Results of recovery of camphol and isoborneol

2.8 樣品含量測定 取本品約0.5 g,精密稱定,制備成燒傷愈合膏供試品溶液,取1 μL注入氣相色譜儀進行色譜分析,測定峰面積并計算含量。結果龍腦含量分別為4.850,4.972,4.892 mg·g-1,平均4.905 mg·g-1;異龍腦含量分別為3.982,4.124,3.988 mg·g-1,平均4.031 mg·g-1。

3 討論

龍腦和異龍腦作為冰片的主要成分,在本法的實驗條件下,兩峰理論板數高,峰形好,分離效果好,可作為燒傷愈合膏質量控制中冰片含量的測定方法。

本實驗利用氣相色譜法確定了燒傷愈合膏中冰片的主要化學成分的含量,這為后期的指紋圖譜研究奠定了基礎。還考察了氣相色譜法測定龍腦、異龍腦含量的方法學,對其含量進行了測定,這對制劑的質量控制提供了支持,為提高該制劑的質量標準和后期體內藥效物質基礎研究奠定了基礎[8-11]。

[1] 谷達法.火毒論[J].中醫(yī)臨床研究,2012,4(15):47-49.

[2] 艾紅利.淺談“火毒”與炎癥的內在聯(lián)系[J].內蒙古中醫(yī)藥,2011,15:122-123.

[3] 袁汀,周瑜妹.外用中藥治療燒燙傷的研究進展[J].光明中醫(yī),2010,25(11):2151-2153.

[4] 李超英,李春雨,楊辛欣,等.復方珍珠滴眼液凝膠中冰片的含量測定方法研究[J].中國藥事,2008,22(10): 884-886.

[5] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:136-137.

[6] 劉峰,馬太久.GC法同時測定冠心舒通膠囊中丁香酚、龍腦和異龍腦[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17 (18):56-59.

[7] 方穎,趙希賢.氣相色譜法同時測定醒腦靜注射液中麝香酮、龍腦、樟腦、異龍腦的含量[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(8):96-98.

[8] 王曉雯,駱晶,賈璞,等.HS-GC聯(lián)用法測定速效救心丸和華佗再造丸中冰片[J].中成藥,2012,34(3):503-505.

[9] 慶秋虹.氣相色譜法測定賽胃安膠囊中冰片(龍腦與異龍腦)的含量[J].海峽藥學,2006,18(2):78-80.

[10] 黃杰偉,馮婉姍,羅雙輝.氣相色譜法測定骨友靈貼膏中冰片的含量[J].今日藥學,2008,18(1):56-57.

[11] 陳建南,曾惠芳,李耿,等.龍腦樟揮發(fā)油及天然冰片成分分析[J].中藥材,2005,28(9):781-782.

DOI 10.3870/yydb.2014.07.029

Determination of Camphol and Isoborneol in Shaoshang Yuhe Gao

ZOU Ji-li1,XU Bin1,WU Jin-hu1,CHEN Yong-gang1,HUANG Dan-dan2
(1.Department of Pharmacy,the Third Hospital of Wuhan,Wuhan 430060,China;2.Hubei Provincial Institute for Food and Drug Control, Wuhan 430064,China)

ObjectiveTo establish a capillary gas chromatography method for determination of camphol and isoborneol inShaoshang yuhe gao(burn healing cream).MethodsThe capillary gas chromatography was adopted under the following conditions:use PEG-2000 as the stationary liquid,nitrogen as carrier gas,ZB-WAX(30 m×0.25 mm,0.25 μm)as the chromatographic column,and the flame ionization detector.The column temperature was programmed at 80℃for 5 min as the initial temperature,then raised to 180℃at the rate of 5℃·min-1and kept for 10 min.The shunt ratio was 10∶1.ResultsThe liner range for camphol was 0.487 5-31.25 μg(r=0.999 6),and the average recovery was 95.95%(n=6).The liner range for isoborneol was 0.487 5-31.25 μg(r=0.999 7),and the average recovery was 96.44%(n=6).ConclusionThe method is accurate,sensitive,and can be applied to quality control ofshaoshang yuhe gao.

Camphol;Isoborneol;Shaoshang yuhe gao;Chromatography,capillary gas

T286;TQ460.1

A

1004-0781(2014)07-0944-03

2013-06-17

2013-07-15

*湖北省科技計劃自然科學基金資助項目(2011CDB298)

鄒吉利(1986-),女,四川資陽人,藥師,碩士,主要研究方向:藥物分析。E-mail:zjlily86@163.com。

吳金虎(1962-),男,湖北十堰人,主任藥師,博士,主要從事臨床藥學及藥理學研究。E-mail:75301082@qq. com。