周 莉，駱永偉，2，王 永，王 蓉，劉向云，桂 博，賈玉玲，2，孫祖越

（1.上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所藥理毒理學(xué)研究室，中國(guó)生育調(diào)節(jié)藥物毒理檢測(cè)中心，上海 200032；2.復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院，上海 201203）

雌激素誘導(dǎo)SD大鼠前列腺炎與內(nèi)環(huán)境改變的關(guān)系

周 莉1，駱永偉1，2，王 永1，王 蓉1，劉向云1，桂 博1，賈玉玲1，2，孫祖越1

（1.上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所藥理毒理學(xué)研究室，中國(guó)生育調(diào)節(jié)藥物毒理檢測(cè)中心，上海 200032；2.復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院，上海 201203）

目的通過(guò)雌二醇誘導(dǎo)SD雄鼠慢性前列腺炎，探討SD雄鼠的內(nèi)環(huán)境改變的關(guān)聯(lián)性作用，為前列腺炎發(fā)生機(jī)制和治療提供一條實(shí)驗(yàn)性途徑。方法3％戊巴比妥麻醉，無(wú)菌條件下去勢(shì)手術(shù)；術(shù)后動(dòng)物恢復(fù)5d，30只雄鼠按照體重隨機(jī)分組，每組10只。第6天低劑量組皮下注射0.25mg/kg的雌二醇，高劑量組皮下注射1.25mg/kg的雌二醇，溶媒對(duì)照組注射橄欖油，每天1次，連續(xù)30d。結(jié)果與溶媒對(duì)照組比較，低、高劑量組白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）和紅細(xì)胞壓積（HCT）均降低（P＜0.01）；前列腺酸性磷酸酶（PAP）明顯降低（P＜0.01）；高劑量組睪酮含量明顯增加（P＜0.01），C-反應(yīng)蛋白（CRP）在低、高劑量組也呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)，但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；溶媒對(duì)照組和給藥組前列腺組織大體解剖表面未見(jiàn)明顯差異，光學(xué)顯微鏡下，溶媒對(duì)照組前列腺組織結(jié)構(gòu)完整、腺腔和間質(zhì)無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，高劑量組和低劑量組的前列腺間質(zhì)均可見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)；低、高劑量組大鼠脾臟均可見(jiàn)棕黃色顆粒沉淀，其余臟器無(wú)明顯改變，胸腺、脾臟及其臟器系數(shù)均明顯降低。結(jié)論根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，雌激素引起的慢性非細(xì)菌性前列腺炎可導(dǎo)致內(nèi)環(huán)境血液學(xué)、血清生化，激素水平、臟器和臟器系數(shù)的一系列改變。

雌激素；前列腺炎；大鼠

前列腺炎是男性泌尿系統(tǒng)多發(fā)病、常見(jiàn)病。臨床上以發(fā)病緩慢，病因病理復(fù)雜，癥狀表現(xiàn)多樣化，病程遷延，反復(fù)發(fā)作為特點(diǎn)。目前臨床上仍然缺乏療效確切、持續(xù)和適應(yīng)范圍廣泛的治療方法。研究制備良好的動(dòng)物模型是闡明該病發(fā)病機(jī)理和開(kāi)發(fā)新藥的有效方法。目前的動(dòng)物模型主要通過(guò)免疫誘導(dǎo)、性激素誘導(dǎo)、化學(xué)制劑誘導(dǎo)、生物制劑誘導(dǎo)、尿液逆流誘導(dǎo)以及自發(fā)性炎癥等。而性激素誘導(dǎo)的大鼠前列腺炎癥是應(yīng)用最廣的動(dòng)物模型，并認(rèn)為它與人慢性無(wú)菌性前列腺炎癥狀相一致［1］。因此，本研究采用雌二醇誘導(dǎo)SD大鼠慢性非細(xì)菌性前列腺炎［2，3］，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行一系列相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)，試圖探索雌二醇誘導(dǎo)的慢性非細(xì)菌性前列腺炎與內(nèi)環(huán)境改變的關(guān)聯(lián)性作用，旨在為前列腺炎的發(fā)生機(jī)制和治療研究提供一條實(shí)驗(yàn)性途徑。

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)雄性SD大鼠380～480g，30只，由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供（SCXK［滬］2008-0016）。SD大鼠在上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所（中國(guó)生育調(diào)節(jié)藥物毒理檢測(cè)中心）清潔級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)飼養(yǎng)（SYXK［滬］2008-0027）。室溫（20～26）℃，相對(duì)濕度（40～70）％，光照12h，黑暗12h；塑料籠大小為（400×350×200）mm，5只/籠，自由飲水和攝食。

1.2 主要儀器

法國(guó)生產(chǎn)的VET ABC（169）血球計(jì)數(shù)儀；Magimnzyme III磁酶免定量測(cè)定儀；尿液分析儀；Anthos Zenith 200st酶標(biāo)儀；萊卡（Leica）RM2126切片機(jī)。

1.3 主要試劑

苯甲酸雌二醇（批號(hào)07/11/02），上海通用藥業(yè)股份有限公司；

1.4 動(dòng)物分組和造模

30只SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，3％戊巴比妥麻醉，無(wú)菌條件下取腹正中切口，直達(dá)腹腔，輕輕拉動(dòng)睪丸脂肪，暴露睪丸和附睪，自輸精管處結(jié)扎，完整地切除雙側(cè)睪丸和附睪，依次縫合肌肉和皮膚，放回鼠籠，自由飲食?；謴?fù)觀察5d，按體重隨機(jī)分為3組，溶媒對(duì)照組、低劑量組和高劑量組，每組10只，第6天開(kāi)始低劑量組皮下注射0.25mg/kg的雌二醇，高劑量組皮下注射1.25mg/kg的雌二醇，溶媒對(duì)照組注射橄欖油，每天1次。

1.5 樣本取材與檢測(cè)

在造模最后一天（第30天時(shí)），即解剖取材的前一天，收集每只大鼠的尿液檢測(cè)尿常規(guī)，主要觀察白細(xì)胞計(jì)數(shù)；采集每只大鼠的血液足量檢測(cè)血常規(guī)，EDTA抗凝血供全血細(xì)胞計(jì)數(shù)，主要觀察白細(xì)胞計(jì)數(shù)；

根據(jù)上述血、尿常規(guī)指標(biāo)判斷造模成功后處死動(dòng)物，麻醉后打開(kāi)腹腔，采集自凝血制備血清后供免疫學(xué)指標(biāo)檢測(cè)，并進(jìn)行病理取材，對(duì)前列腺、精囊腺、包皮腺、肛門括約肌和提肛肌稱重并取材，甲醛溶液固定后進(jìn)一步檢查。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 尿常規(guī)

尿常規(guī)檢查包括尿比重（SG）、酸堿度（PH）、白細(xì)胞（LEU）、亞硝酸鹽（NIT）、尿蛋白（PRO）、葡萄糖（GLU）、酮體（KET）、膽紅素（BIL）、尿膽原（UBG）和尿潛血（ERY）共十項(xiàng)，結(jié)果均屬正常范圍內(nèi)的變化，未見(jiàn)能說(shuō)明與造模有關(guān)的異常改變。

2.2 血液學(xué)指標(biāo)

與溶媒對(duì)照組比較，低、高劑量組白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）和紅細(xì)胞壓積（HCT）均降低（P＜0.01），考慮與雌激素作用有關(guān)（表1）。

2.3 血清生化指標(biāo)

與溶媒對(duì)照組比較，低、高劑量組PAP明顯降低，其余各項(xiàng)指標(biāo)與同期溶媒對(duì)照相比，均未見(jiàn)能說(shuō)明與造模有關(guān)的異常改變（表2）。C-反應(yīng)蛋白（CRP）在低、高劑量組也呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；CRP是在感染和組織損傷時(shí)血漿濃度快速急劇升高的主要的急性期蛋白，體現(xiàn)了雌激素的作用對(duì)大鼠組織造成了一定的損傷。

血清總酸性磷酸酶（TACP）測(cè)定主要用于前列腺癌的診斷和監(jiān)測(cè)，增高主要見(jiàn)于前列腺癌，特別是有轉(zhuǎn)移時(shí)，血清酸性磷酸酶可明顯增高，前列腺癌經(jīng)手術(shù)及抗雄激素治療后，血清TACP水平緩慢降至正常。

2.4 激素指標(biāo)

造模后，高劑量組睪酮含量明顯增加，與溶媒對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，前列腺特異性抗原（PSA）含量也呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)，但未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（表3）。說(shuō)明雌激素的作用導(dǎo)致大鼠體內(nèi)激素的不平衡，高劑量組睪酮增加考慮為代償性增加。其余各項(xiàng)指標(biāo)與同期溶媒對(duì)照相比，均未見(jiàn)能說(shuō)明與造模有關(guān)的異常改變。

PSA是一種糖蛋白酶，由前列腺腺管上皮細(xì)胞分泌，正常人血清含量極微，前列腺癌患者的正常腺管結(jié)構(gòu)遭到破壞是，血清中的PSA含量增高，對(duì)前列腺癌的診斷、療效觀察和預(yù)后判斷有主要意義。前列腺炎也可導(dǎo)致PSA輕度增高，可做鑒別診斷。

表1 雌激素誘導(dǎo)的前列腺炎模型大鼠血液學(xué)指標(biāo)的變化Tab.1 Changes of hematology indices in the estrogen-induced rat models of prostatitis

表2 雌激素誘導(dǎo)的前列腺炎模型大鼠血清生化指標(biāo)的變化Tab.2 Changes of serum biochemical indices in the estrogen-induced rat models of prostatitis

表3 雌激素誘導(dǎo)的前列腺炎模型大鼠激素指標(biāo)的變化Tab.3 Changes of hormonal indices in the estrogen-induced rat models of prostatitis

2.5 病理學(xué)指標(biāo)

與溶媒對(duì)照組比較，低、高劑量組胸腺、脾臟以及胸腺和脾臟的臟器系數(shù)均明顯降低外，考慮為雌激素作用的結(jié)果；各臟器重量和系數(shù)均未見(jiàn)明顯變化（表4、表5）。

2.6 SD大鼠雌激素誘導(dǎo)的前列腺炎模型組織病理學(xué)變化

前列腺組織：溶媒對(duì)照組和模型組表面未見(jiàn)明顯差異。光學(xué)顯微鏡下觀察：溶媒對(duì)照組前列腺組織結(jié)構(gòu)完整、腺腔和間質(zhì)無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。而高劑量組和低劑量組模型組的前列腺間質(zhì)可見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)（圖1見(jiàn)彩插2）。

其他臟器：與溶媒對(duì)照組相比，低、高劑量組大鼠脾臟均可見(jiàn)棕黃色顆粒沉淀，其余臟器無(wú)明顯改變（圖2見(jiàn)彩插2）。

3 討論

目前前列腺炎的發(fā)病機(jī)制主要集中在病原體感染、免疫機(jī)制、神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制、氧化應(yīng)激、尿液返流等，每一種因素都有其依據(jù)，且有一定的關(guān)聯(lián)性。研究表明，雌激素可以誘導(dǎo)前列腺炎發(fā)生慢性炎癥。Sugimoto等［2］將雄性Wistar大鼠，去勢(shì)、每天皮下注射17β-雌二醇。第31天，模型組前列腺的IL-1β、TNF-α升高，前列腺和尿中的一系列炎癥趨化因子如單核細(xì)胞趨化蛋白-1（CCL2/MCP-1）、巨噬細(xì)胞炎性蛋1α（CCL3/MIP-1α）、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞趨化因子-1（CXCL1/CINC-1）、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞趨化因子-2（CXCL3/CINC-2）和類趨化因子配體（CXCL5/LI）都升高。Kim采用同樣的方法也誘導(dǎo)了炎癥［3］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)雌二醇誘導(dǎo)SD雄鼠慢性前列腺炎模型，探討雌二醇誘導(dǎo)慢性前列腺炎內(nèi)環(huán)境改變的關(guān)聯(lián)性作用。

表4 雌激素誘導(dǎo)的前列腺炎模型大鼠臟器指標(biāo)的變化Tab.4 Changes of organ weights in the estrogen-induced rat models of prostatitis

表5 雌激素誘導(dǎo)的前列腺炎模型大鼠臟器系數(shù)的變化Tab.5 Changes of organ weight coefficients in the estrogen-induced rat models of prostatitis

CRP是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白由肝細(xì)胞合成［4］，當(dāng)機(jī)體有局部炎性反應(yīng)或組織損傷刺激時(shí)可刺激肝臟CRP合成、分泌，肝臟合成的CRP可以從血清遷移到其他組織器官中去并結(jié)合到炎性反應(yīng)受損部位。檢測(cè)CRP對(duì)于疾病診斷雖無(wú)特異性，但其濃度上升是各種細(xì)菌性炎性反應(yīng)或組織損傷的靈敏指標(biāo)。同時(shí)也是鑒別細(xì)菌感染和病毒感染的良好指標(biāo)［5］。細(xì)菌感染時(shí)CRP可明顯增高，且增高的程度和感染的嚴(yán)重程度呈正比［6］。同樣在患前列腺炎、睪丸炎、精囊炎等情況下精液CRP的含量升高［7］，同時(shí)由于炎性反應(yīng)刺激也大大增多。本研究顯示低、高劑量組CRP水平增加，體現(xiàn)了造模對(duì)大鼠前列腺組織造成的損傷，這與莊順紅等［8］研究結(jié)果相符合。

前列腺特異性抗原（PSA）是前列腺腺管上皮細(xì)胞分泌的一種糖蛋白，它雖是前列腺的一種特殊物質(zhì)，但卻不是前列腺癌的專一特異性物質(zhì)。正常人血清中含量極微，前列腺癌患者的正常腺管結(jié)構(gòu)遭到破壞是，血清中的PSA含量增高。前列腺炎也可導(dǎo)致PSA輕度增高，可做鑒別診斷。本研究中血清PSA含量也有一定的升高，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為在慢性前列腺炎中可以引起PSA輕度升高。Nadler等［9］研究發(fā)現(xiàn)在慢性前列腺炎中血清PSA升高，但和對(duì)照組相比沒(méi)有顯著差異。而Korrovits等［10］研究認(rèn)為在無(wú)臨床癥狀前列腺炎中血清中PSA水平升高可作為無(wú)臨床癥狀前列腺炎的生物標(biāo)志物。

前列腺是雄激素作用的靶器官，血清睪酮對(duì)前列腺的生長(zhǎng)和生理功能的維持有重要作用，也是前列腺組織中DHT的重要來(lái)源。在大鼠模型建立過(guò)程中發(fā)現(xiàn)閹割或雄激素水平下降能夠引起前列腺炎；給予略高于生理劑量的睪酮能降低雌二醇誘導(dǎo)的炎癥發(fā)生率并且能減輕炎癥程度。Emrah等［11］在探索雌、雄激素比例對(duì)大鼠前列腺中炎癥和上皮細(xì)胞的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，雄激素缺乏會(huì)劑量依賴性的升高外周血和基質(zhì)炎癥浸潤(rùn)的數(shù)量。本研究中睪酮與對(duì)照組相比水平升高，可能是代償性升高，相關(guān)原因有待進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果顯示大鼠去勢(shì)后前列腺重量降低，說(shuō)明大鼠體內(nèi)雄激素水平較低時(shí)，不能維持前列腺自身的發(fā)育。這和劉向云等［12］研究結(jié)果一致。胸腺是T淋巴細(xì)胞分化成熟的中樞免疫器官，胸腺系數(shù)是衡量胸腺功能正常與否的一項(xiàng)重要指標(biāo)。脾臟是動(dòng)物體內(nèi)最大的淋巴器官。給予雌激素后，前列腺重量沒(méi)有變化，但胸腺和脾臟的臟器重量和臟器系數(shù)與對(duì)照組相比發(fā)生明顯變化，說(shuō)明雌激素誘導(dǎo)的前列腺炎屬于免疫性疾病，影響大鼠的免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育。

綜上所述，雌二醇誘導(dǎo)的慢性前列腺炎可以導(dǎo)致體內(nèi)內(nèi)環(huán)境發(fā)生一系列的改變，有望為其治療和研究提供一條實(shí)驗(yàn)性途徑。

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Correlation of estrogen-induced SD rat models of prostatitis with changes of internal environment

ZHOU Li1，LUO Yong-wei1，2，WANG Yong1，WANG Rong1，LIU Xiang-yun1，GUI Bo1，JIA Yu-ling1，2，SUN Zu-yue1
（1.Shanghai Institute of Planned Parenthood Research＆National Evaluation Center for Toxicology of Fertility Regulating Drugs，Shanghai 200032，China；2.School of Pharmacy，F(xiàn)udan University，Shanghai 201203）

ObjectiveTo explore the correlation of internal environment with estradiol-induced male SD rat models of chronic prostatitis，and provide an experimental approach for its pathogenesis and treatment researches.Methods Anesthesia with 3％pentobarbital，castration surgery under the sterile condition，and recovery for five days were performed in the experiment.Thirty male SD rats were randomly divided into 3 groups，10 rats in each group.0.25mg/kg estradiol（low dose）and 1.25/kg estradiol（high dose），respectively，were subcutaneously injected from day 6 for 30 consecutive days.The solvent control group

injection of olive oil in the same period.ResultsWBC，RBC，HGB and HCT were significantly lower in the estrogen groups than that in the control group（P＜0.01）.PAP was significantly decreased（P＜0.01）.Testosterone was significantly increased in the high-dose group（P＜0.01），and C-reactive protein（CRP）also showed an increasing trend in the estrogen groups，but statistically not significant.There was no significant difference in the gross appearance of the prostate among the groups.Histopathological analysis revealed that there were inflammatory infiltration and accumulation of brown particles in the spleen tissue in both the low dose and high dose estrogen groups.There were no significant changes in other organs.Organ and organ coefficiente of the thymus and spleen were significantly reduced.ConclusionsOur findings indicate that chronic nonbacterial prostatitis induced by estrogen can lead to a series of changes of the internal environment including the hematology，serum biochemistry，hormone levels，organs and organ coefficient.

Estrogen；Prostatitis；Rat；Hematology；Biochemistry；Hormone

R33

A

1671-7856（2014）02-0033-05

10.3969.j.issn.1671.7856.2014.002.008

十二五“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（2011ZX09301-005），上海市人才發(fā)展基金（2010031）和上海市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物創(chuàng)新行動(dòng)計(jì)劃項(xiàng)目（11140901300/11140901303））。

周莉，副研究員；主要從事藥物生殖藥理毒理學(xué)研究、前列腺疾病藥理毒理學(xué)研究和新藥臨床前安全性評(píng)價(jià)，E-mail：zhoulijss@163.com。

孫祖越，1964年生，男，博士，研究員；主要從事藥物生殖藥理毒理學(xué)研究、前列腺疾病藥理毒理學(xué)研究和新藥臨床前安全性評(píng)價(jià)。E-mail：sunzy64@163.com。

2013-11-29